黄鳝乳酸脱氢酶及酯酶同工酶研究

采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,对黄鳝(Monopterus albus)肌肉、心脏、脑、肾脏、卵巢、脾脏及肝脏等七种组织的乳酸脱氢酶(Lactata dehydrogenase,LDH)及酯酶(Esterase,ES)进行了研究,分析并讨论了二种同工酶的遗传基础、组织分布及活性差异。     

miR-144在骨质疏松患者护理过程中的变化和对骨质疏松的作用研究

目的研究miR-144在骨质疏松患者护理过程中的表达变化情况及其对骨质疏松的作用。方法采用实时定量聚合酶链式反应(real time qPCR)方法检测miR-144在骨质疏松患者中的表达及其在接受护理干预过程中的表达变化;采用CCK-8实验检测miR-144对人骨髓间充质干细胞(BMSCs)活性的影响;采用碱性磷酸酶(ALP)染色检测miR-144对人BMSCs成骨分化能力的影响。结果与正常对照组相比,骨质疏松患者血清中miR-144的表达显著降低;骨质疏松患者接受护理干预过程中,患者血清中miR-144的表达逐渐增高;CCK-8实验结果表明,miR-144 mimic显著提高人BMSCs活性,而miR-144 inhibitor显著抑制人BMSCs活性;ALP染色结果表明,miR-144 mimic显著促进人BMSCs向成骨方向分化,而miR-144 inhibitor显著抑制人BMSCs向成骨方向分化。结论 miR-144在骨质疏松患者中表达降低,护理干预后miR-144的表达显著升高,且其能够调控人BMSCs活性和成骨分化能力。     

老年人T淋巴细胞Ag-NORs表达活性分析

目的探讨老年人外周血 T 淋巴细胞 Ag-NORs 活性表达特点与衰老的关系。方法应用 KL 型免疫图像分析系统及其配套试剂和方法,分析老年人外周血T 淋巴细胞 Ag-NORs 的表达,并对照比较,以 T 淋巴细胞核仁/细胞核(I/S)银染面积之比表示。结果老年组 Ag-NORs 活性为 I/S(7.36±0.77%),非常显著低于对照组(7.74±0.65)%(P<0.01)。在 Ag-NORs 高活性表达中,老年组明显低于对照组,分别为18%与45%(P<0.01);而 Ag-NORs 低活性表达中,老年组为10.3%,对照组无1例低活性(P<0.05)。结论老年人 T 淋巴细胞 Ag-NORs 活性明显降低,细胞免疫水平低下,是衰老发生、发展的重要因素。     

新产品介绍

北京农学院与北京市北分仪器技术公司联合开发的BFS-2300农药残毒速测仪,广泛应用于蔬菜中的有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒的快速测定。该速测仪具有以下优点和特点: 1.体积小,重量轻,便携式(长32cm,宽21cm,高8cm)。 2.灵敏度高,重现性好。本仪器采用从敏感酶源中提取制备的乙酰胆碱酯酶作为检测试剂。根据乙酰胆碱酯酶的活性变化过程来测定蔬菜中的残留农药,     

重组毕赤酵母表达reteplase发酵过程中的降解现象

研究了pH和温度对重组毕赤酵母表达retep lase(rPA)发酵过程中的降解现象。在低pH(4.5)诱导条件下,由于蛋白酶活性高,rPA降解严重,表达量几乎为0,提高诱导pH至6.5,蛋白酶活性降低,rPA的表达量最高达到122 m g/L。通过将诱导温度从30&#176;C降低到20&#176;C,rPA的表达量从153.2 m g/L提高到207.9 m g/L。降低温度能减少细胞死亡率,从而减少了发酵液中蛋白酶的释放,降低了蛋白酶的活性,抑制了对目的蛋白rPA的降解。另外,低温使胞内AOX酶活性提高,从而增强了rPA的表达。     

乙酰胆碱酯酶在桑蚕氟中毒中的表现以及和桑蚕抗氟性之间的关系

本试验通过几个抗氟性不同的桑蚕品种原种蚕添食不同浓度的氟处理的桑叶后测定其头部神经节中乙酰胆碱酯酶的活性，研究了氟离子在氟中毒过程中对桑蚕乙酰胆碱酯酶的抑制效应．结果发现在较低的添氟浓度下，氟离于抑制酶活性而引起的有关生理作用不是很明显；在较高的添氟浓度下，其引起的生理效应比较明显，乙酰胆碱酯酶活性的抑制可引起蚕体活动兴奋性的亢进．乙酰胆碱酯酶活性水平在对照组和添氟组，均与和蚕品种抗氟性的无大关系．     

大肠杆菌核苷磷酸化酶的重组表达和活性

将大肠杆菌K-12菌株来源的嘌呤核苷磷酸化酶、尿苷磷酸化酶和胸苷磷酸化酶基因分别克隆到pET-11a载体并转化大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌表达,通过SDS-PAGE分析和酶的活性测定,重组菌诱导表达后目的蛋白的表达量占菌体总蛋白的37%以上,与产核苷磷酸化酶的野生菌比较,酶的活性也有显著提高。在特异反应条件下,构建的工程菌可以用来高效催化核苷的转糖基反应。     

诱导条件对重组人锰超氧化物歧化酶发酵的影响

分别研究了3种诱导剂和Mn2+浓度对重组人锰超氧化物歧化酶(rhMn-SOD)发酵表达的影响,并进一步优化了乳糖诱导rhMn-SOD表达的条件。结果表明:异丙基--βD-硫代半乳糖苷(IPTG)和乳糖诱导能够获得类似的表达效果,诱导的同时加入2 mmol/L的Mn2+能够明显提高rhMn-SOD的表达。进一步的实验结果表明:乳糖诱导的最佳浓度为7 mmol/L,最佳时机为接种后6 h,A600为2.1,诱导表达6 h rhMn-SOD活性和比活达到最高。     

通用干扰素与胸腺肽融合基因构建与表达研究

临床上将干扰素(IFN)和胸腺肽(THYα1)联合使用远大于各自单独使用的效果,根据细胞因子协同作用的特点,本文通过DNA重组技术将两者构成一个融合基因。本实验用PCR技术将化学合成的胸腺肽α1基因与干扰素基因通过PCR拼接、扩增并克隆到PGEM-T载体中,构建克隆质粒PGEM-IFNTHY。为使IFNTHY基因在原核细胞中表达,克隆质粒经酶切、插入到表达载体pET28 a中。将重组质粒转化至表达宿主BL21(DE3)中,经诱导,SDS-PAGE和W esterb lot检测显示,pET28 IFNTHY基因得到了表达;微量细胞病变抑制法和玫瑰花结法显示表达产物有活性。     

miR-188在脆性骨折患者中的表达及其对骨折愈合的调控作用

目的探讨miR-188在脆性骨折患者骨组织和血液中的表达,并研究miR-188对人成骨细胞及骨折愈合的影响。方法应用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测脆性骨折患者骨组织和非脆性骨折患者中miR-188的表达水平,并检测脆性骨折患者接受治疗过程中血液miR-188的表达变化。应用CCK-8和MTT实验检测miR-188对人成骨细胞活性和增殖能力的影响。应用TUNEL染色检测miR-188对成骨细胞凋亡的影响,并用qRT-PCR探究miR-188对成骨细胞凋亡相关基因的影响。应用qRT-PCR检测miR-188对成骨细胞骨形成相关基因I型胶原蛋白(collagen-1)、碱性磷酸酶(ALP)和骨形成蛋白4(BMP4)表达的影响。结果 qRT-PCR实验结果证明,miR-188在脆性骨折患者的骨组织和血液中的表达显著升高,差异具有统计学意义(P 0. 05)。此外,在脆性骨折患者接受治疗过程中,miR-188的表达逐渐降低。CCK-8实验表明,miR-188能够显著降低成骨细胞活性。MTT实验结果显示,过表达miR-188能够抑制成骨细胞增殖。TUNEL染色显示,转染miR-188能够促进成骨细胞发生凋亡。此外,qRT-PCR结果显示,miR-188能够增加促凋亡基因Bax的表达,而降低抑凋亡基因Bcl2的表达。qRT-PCR结果表明,miR-188能够减少成骨细胞骨形成相关基因collagen-1,ALP和BMP4的表达。结论 miR-188在脆性骨折患者的骨组织和血液中的表达显著升高,且miR-188能够调控成骨细胞活性、增殖、凋亡及骨形成,进而参与骨折愈合过程。     

芫花活性成分抑制鳞翅目幼虫取食的机理

就芫花及其有效成分β-谷甾醇对斜纹夜蛾及卫矛尺蠖取食的抑制作用进行了研究.结果表明:斜纹夜蛾和卫矛尺蠖4龄幼虫连续4天取食涂有10%芫花乙醇粗提物(YAE)的食物后,其中肠淀粉酶、酯酶、蛋白酶的活力指数均显著高于对照;连续4天取食0.1%β-谷甾醇后,淀粉酶活力指数也显著高于对照,酯酶与蛋白酶的活力与对照持平.10%芫花乙醇粗提液处理斜纹夜蛾4龄幼虫4天,其谷胱甘肽-S-转移酶活性呈先升后降趋势,至第4天,活力绝对值虽高于对照组,但差异不显著.斜纹夜蛾4龄幼虫连续3代取食涂有芫花乙醇粗提物的食物后,其谷胱甘肽-S-转移酶活性呈先升后降的趋势,至F2代,与对照组的差异已不显著;以同样方法饲养5龄幼虫,其酶活性亦呈先升后降趋势,但每代处理与对照组的差异均不显著.芫花活性物质既抑制试虫取食,使其“收入“减少,又促进消化酶及解毒酶超量分泌,造成“支出“增加,最终导致虫体逐渐衰竭死亡.     

田基黄总黄酮抗CCl4复合因素所致大鼠肝纤维化的实验研究

目的:研究田基黄总黄酮抗大鼠肝纤维化作用。方法:采用CCl4复合因素诱导肝纤维化大鼠模型;从第7周起,每天灌胃给予田基黄总黄酮(9、18、36mg/kg)1次,连续给药12周后,测定血清总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、TNF-α水平及肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)和羟脯氨酸(Hyp)的含量及MMP-1和TIMP-1蛋白的表达。结果:田基黄总黄酮能显著降低CCl4复合因素诱导的肝纤维化大鼠血清中TBIL、DBIL、ALT、AST、PC-Ⅲ、HA、LN的水平、肝组织中Hyp的含量和MMP-1和TIMP-1蛋白的表达,说明田基黄总黄酮具有良好的抗胆汁性肝纤维化的作用。此外,田基黄总黄酮也能提高肝组织SOD、GSH-Px的活性,降低肝组织MDA及血清中TNF-α的含量。结论:田基黄总黄酮可抑制CCl4复合因素诱导的大鼠肝纤维化的形成,其抗肝纤维化作用可能与其抗氧化作用及抗TNF-α的分泌有关。     

白介素-2治疗肾癌的护理体会

白介素-2(IL-2)是目前研究最广泛的细胞因子之一,亦是机体复杂的免疫调节和反应系统中最重要的淋巴因子之一,其在体内有显著的活性[1].IL-2主要由激活的T淋巴细胞分泌和表达,它可以促进T细胞的增殖和相关细胞因子的分泌,并刺激NK细胞生长并增强其杀伤细胞活性.     

Pb和Cd胁迫下外源激素水杨酸(SA)对大蒜生理特性的影响

利用盆栽试验,研究了Pb和Cd胁迫下外源激素水杨酸(SA)对大蒜叶绿素和POD活性的影响。结果表明,在不加SA条件下,叶片中POD活性和叶绿素含量随Pb和Cd浓度的增加呈先上升后下降趋势;在Pb和Cd胁迫下施加20mg·kg-1SA,提高了大蒜叶片中POD活性和叶绿素含量,施加200mg·kg-1的SA降低了大蒜POD活性和叶绿素含量。     

氧化活性碳纤维吸附In(Ⅲ),Fe(Ⅲ)

以HNO3为氧化剂,对活性碳纤维(ACF)表面进行改性,得到氧化活性碳纤维(OACF).以静态和动态实验法考察OACF在酸性体系中吸附分离In(Ⅲ),Fe(Ⅲ)的性能.OACF在溶液中对In(Ⅲ),Fe(Ⅲ)的吸附量随p H的增加而增加,氧化后活性碳纤维的吸附能力较氧化前明显增大,15 min即可完全达到吸附平衡.Langmuir吸附模型能较好地反映纤维的吸附过程.动态吸附分离实验表明,OACF对In(Ⅲ),Fe(Ⅲ)均具有较大的吸附能力,并能对其进行初步分离.     

用于有机磷农药残留检测的植物酯酶筛选

利用酶法分析中的酶抑制原理，在不同pH条件下对可被有机磷农药抑制的不同来源的植物酯酶进行了筛选。以总酯酶活力和对敌敌畏的灵敏度为指标，确定了豫麦39中提取的植物酯酶为最佳的农药检测用酶，其最佳检测pH为6.5．     

miR-432在神经胶质瘤中的表达及作用

目的探讨microRNA-432(miR-432)在神经胶质瘤患者中的表达及临床意义。方法采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)实验检测神经胶质瘤患者癌症组织和非胶质瘤患者脑组织中miR-432的表达水平,并检测神经胶质瘤患者和非胶质瘤患者血清中miR-432的表达情况;应用Lipo2000试剂将miR-432类似物(miR-432mimic)、miR-432抑制剂(miR-432inhibitor)和其各自阴性对照(mimic-NC或inhibitor-NC)转染进胶质瘤细胞系U87细胞中,qRT-PCR实验检测转染后细胞中miR-432的表达水平,CCK-8实验检测细胞活力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果 miR-432在神经胶质瘤组织中表达显著低于正常脑组织(P=0. 0019),且其在神经胶质瘤患者血清中的表达显著低于非神经胶质瘤患者(P=0. 0228)。胶质瘤细胞系U87细胞转染miR-432mimic后,miR-432的表达显著升高,而转染miR-432inhibitor后miR-432的表达显著降低,差异均具有统计学意义(P=0. 0018和0. 0161);与mimic-NC相比,miR-432mimic显著抑制U87细胞活力和迁移能力;而与inhibitor-NC相比,miR-432inhibitor显著提高U87细胞活力和迁移能力。结论 miR-432具有抑制胶质瘤细胞的活力和迁移能力的作用,有望成为胶质瘤的潜在治疗靶点。     

禽脑脊髓炎病毒内蒙分离株外壳蛋白VP1基因在大肠杆菌中的融合表达及活性分析

为研制禽脑脊髓炎病毒(avian encephalomyelitis virus,AEV)亚单位疫苗,对AEV-NH937内蒙分离株外壳蛋白VP1基因进行融合表达、纯化及活性分析.根据AEV-NH937基因组全序列,设计一对引物.利用RT-PCR技术,扩增AEV的外壳蛋白VP1基因.经序列分析,VP1基因编码区为810bp,编码270个氨基酸残基.将VP1基因插入载体pGEX-4T1构建表达重组质粒,然后转化大肠杆菌BL21.经IPTG诱导后,用聚丙稀酰氨凝胶电泳分析,结果表明,有融合蛋白表达,其分子量为56KD.纯化后,利用ELISA检测分析VP1蛋白,证明VP1蛋白有一定的抗原活性.     

仙人掌多糖对急性肝损伤小鼠的保护作用

研究了仙人掌多糖(Polysaccharides of Opuntia dillenii Haw. OPS ) 对CCl4 肝损伤小鼠的保护作用.用OPS 溶液预先灌胃30 d,末次灌胃后2 h腹腔注射0.10?l4(20 mL/kg) 的花生油溶液, 造成小鼠急性肝损伤模型,18 h后测定血清丙氨酸氨基转移酶( ALT )、天门冬氨酸氨基转移酶( AST )活性和肝脏丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性.表明预先灌胃OPS 溶液,具有显著地抑制CCl4引起的小鼠血清ALT活性、AST活性及肝脏MDA 含量的升高,对肝脏SOD活性的降低有明显改善作用.说明:OPS对CCl4 致小鼠肝损伤具有保护作用.     

斑马鱼内皮脂肪酶(EL)、丝氨酸磷脂酶(PLA1A)和H型脂肪酶(LH)基因的组织分布与胚胎发育表达分析

以模式动物斑马鱼为研究对象,运用实时定量PCR技术和原位杂交技术,对脂肪酶基因家族中的内皮脂肪酶(EL)、丝氨酸磷脂酶(PLA1A)和H型脂肪酶(LH)基因的组织分布和胚胎发育表达进行了研究.三种基因在所检测的组织中都有表达,其中EL mRNA在精巢、卵巢和皮肤中表达较高,PLA1A mRNA在肠道、心脏、肝脏和皮肤中表达较高,LH mRNA在卵巢、皮肤和精巢中表达较高.在胚胎发育过程中,EL和LH基因均在胚胎发育的早期(卵裂期和囊胚期)有较高的表达,表现出明显的母源表达特征,而PLA1A基因在胚胎发育的原肠期前后表达较高,显示其在胚胎发育的原肠作用中可能承担角色.