大白菜RAPD扩增体系的优化研究

以大白菜 341 1 - 7自交系为材料 ,使用 PE公司生产的 Thermal Cycler480型 PCR仪 ,对影响大白菜 RAPD扩增的因素进行了研究 ,确定了模板 ,Mg2 +,d NTPs,引物和 Taq DNA聚合酶的适宜浓度和最佳的循环次数 .实验结果表明 ,在 2 5μL反应体系中使用 2 0— 60 ng的模板 DNA,1 .5— 2 .0 mmol/L 的 Mg2 +,0 .1 5— 0 .2 5 mmol/L d NTPs,0 .8— 1 .0 μmol/L随机引物 ,1 .0— 1 .5 U Taq DNA聚合酶 ;在 94℃下预变性 5 min后执行 94℃ 1 min,37℃ 1min,72℃ 2 min,35个循环 ,最后 72℃再延伸 5 min的条件下 ,大白菜的 RAPD扩增效果较好     

珊瑚菜ITS序列的PCR扩增与测序分析

为加强珍稀濒危物种珊瑚菜遗传多样性的研究和种质资源的保护工作,本实验对珊瑚菜ITS基因片段的PCR扩增条件进行了优化和产物的测序分析.结果显示:珊瑚菜ITS基因片段的PCR扩增最佳反应体系为Buffer 2. 50μL,d NTP 0. 50μL,引物ITS1和ITS4各1. 00μL,Taq DNA polymerase 0. 15μL,模板DNA 2. 00μL,dd H2O 17. 85μL,总体积25. 00μL.最佳扩增程序为94℃预变性5. 0 min,94℃变性50 s,50℃退火50 s,72℃延伸1 min 45 s,37个循环,后72℃延伸10 min.在最佳扩增条件下获得了清晰、稳定的目的条带,测序后获得长度为628 bp的核苷酸序列,通过GenBank的BLAST比对验证,确定为ITS序列,其中包括完整的ITS1序列和5. 8S r DNA序列以及ITS2的部分序列.     

茶树TRAP反应体系的建立及正交设计优化

TRAP标记技术因操作简单、重复性好、效率高等特点得到广泛应用,但该技术在茶树中的研究报道较少,且茶树TRAP-PCR体系优化尚未见报道.笔者采用正交设计的方法,对茶树TRAP-PCR反应中Mg2+、Taq酶、dNTP、固定引物、随机引物5个因素进行了优化研究,建立了茶树TRAP-PCR最佳反应体系.该20μL反应体系含有2μL 10×PCR Buffer (Mg2+ free),50 ng模板DNA,1.75 mmo/L Mg2+,0.50 U Taq酶,0.20 mmol/L dNTP,0.20 mmol/L随机引物和0.20 mmol/L固定引物.根据优化结果,利用最佳反应体系,选用16个茶树品种对TRAP标记多态性进行了初步研究.     

Fenton试剂处理猪场养殖废水的实验研究

采用Fenton高级氧化技术对猪场养殖废水进行了氧化处理,探讨了反应时间、pH值、温度、H2O2和FeSO4的投加量等因素对猪场养殖废水CODCr去除率的影响,确定了最佳的处理条件.试验结果表明,当[H2O2]=40 mmol/L,[ Fe2+]=4mmol/L,pH= 3.5,30℃条件下,反应40 min后,猪场养殖废水的CODcr的去除率达到最大值,为87.2%.     

白鲢RAPD的扩增条件及重复性的研究

当PCR反应体系中Mg2 +浓度为 2 5mmol/L、dNTPs浓度为 2 0 0 μmol/L、引物浓度为0 2 μmol/L、TaqDNA聚合酶为 1 5U、DNA模板为 2 5ng(反应总体积 2 5μl)时 ,可得到比较稳定的RAPD谱带 分别从白鲢 (Hypophthalmichtysmolitrix)血液、肌肉、肝脏、生殖腺等组织提取模板DNA ,其RAPD结果是一致的     

麦冬药材中6种麦冬皂苷的质量分数测定

建立HPLC法同时测定麦冬药材中penogenin-3-O-α-L-吡喃鼠李糖(1-2)-β-D-葡萄糖苷、去木糖-14-hydro sprengerinin C、麦冬皂苷Ra、penogenin-3-O-α-L-吡喃鼠李糖(1-2)-β-吡喃木糖(1-4)-β-D-葡萄糖苷、14-hydro sprengerinin C和慈溪麦冬皂苷A 6种麦冬皂苷的质量分数。色谱条件为lunna NH2色谱柱(4. 6 mm×150 mm,5μm),流动相乙腈-水(90∶10),流速1. 0m L/min,检测波长208 nm,柱温为室温。该条件下上述6种麦冬皂苷线性范围分别为0. 96～9. 60μg/m L,0. 92～9. 20μg/m L,0. 97～9. 70μg/m L,0. 94～9. 40μg/m L,1. 04～10. 40μg/m L,0. 92～9. 20μg/m L。在相应线性范围内线性相关系数均大于0. 999 1;方法回收率为98. 59%～101. 77%,RSD为1. 15%～1. 98%。所建方法可用于麦冬药材及相关制剂中麦冬皂苷的测定。     

应用PCR-RFLP技术检测二甲基精氨酸二甲胺水解酶2基因-449G/C多态性的实验研究

目的确定聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(Polymerase chain reaction-restricted fragment length polymorphism,PCR-RFLP)技术检测二甲基精氨酸二甲胺水解酶2(dimethyl arginine dimethylamine hydrolase 2,DDAH2)基因-449G/C的最适实验条件。方法对影响DDAH2基因PCR反应的主要因素进行研究。结果最适变性温度为95℃,最适退火温度为58℃,最适引物浓度为0.25μmol/L,最适2X Power Taq PCR Master Mix浓度为12.5μl,酶切体系为15.5μl体系中加5.0μl产物用5U的限制性内切酶Sma I消化。结论应用PCR-RFLP技术建立的DDAH2基因-449G/C位点多态位点检测方法简便、经济、快速。     

太湖新银鱼线粒体Cytb基因PCR扩增条件的优化

为建立适宜太湖新银鱼（NeosalanxtaihuensisChen）线粒体DNA细胞色素b（Cytb）基因PCR的反应体系和扩增程序，利用正交设计LI6（4^5）表，对反应体系的模板DNA、dNTPs、Primers、TaqDNA聚合酶的浓度和退火温度进行五因素四水平优化筛选和扩增程序的优化，确立了最优反应体系和扩增程序。在设定的PCR扩增条件中dNTPs浓度对扩增结果的影响最大，这极显著水平；引物浓度、退火温度对扩增结果的影响显著；TaqDNA聚合酶的浓度对扩增结果的影响最小，不显著。25pL的反应体系中，在退火温度为50℃、引物浓度为0．5μmol／L、Taq酶浓度为2．5U／μL、模板浓度为5ng／μL、dNTPs浓度为2．5mmol／L的条件下，太湖新银鱼线粒体Cytb基因扩增效果为最佳，电泳条带清晰、规则。     

几种化学因子对水稻抗白叶枯病诱导作用比较

比较了水杨酸 (SA) ,对氨基苯酚 (p -AP)、硝酸镍、百草枯 (PQ)、氧化铜和铜试剂对水稻幼苗抗白叶枯病的诱导抗病作用、它们的最佳诱导浓度和最佳诱导时期 .它们的最佳诱导浓度分别为 0 .0 5mmol/L、0 .5mmol/L、2 .2mmol/L、0 .1 5mg/L、0 .3mmol/L和 0 .5mmol/L .除SA和PQ的最佳诱导期分别为处理后第 2天和第 4天外 ,其余因子均在处理后第 3天 .在最佳浓度下 ,SA、p -AP、硝酸镍、PQ、氯化铜和铜试剂的相对诱导效果 (局部抗性 )分别为 1 9.7%、3 9.5%、69.6%、4 6.1 %、1 2 .3 %和 1 8.9% .硝酸镍、PQ和P -AP均有明显的系统诱导抗病作用 .三种因子均在处理后第 4天表现出最大的系统诱导抗病效果 ,相对诱导效果分别为 4 2 .9%、3 5.5%和 2 7.6% .并且 ,在处理后第 8天这种诱导作用也较明显 .     

铂族金属及钴、镍高效液相色谱分离分析

本文报道以新试剂2—(6—甲基-2苯并噻唑偶氮)-5—二乙氨基酚作柱前衍生试剂,以甲醇/水=82/18(v/v),含20mmol/L pH5.0醋酸盐缓冲溶液,12mmol/L水扬酸,5mmol/L TBA·Br作流动相.柱温35℃,流速1.0mL/min,检测波长575nm,反相高效液相色谱定量分离和测定了Os(Ⅳ)、Rh(Ⅲ)、Ru(Ⅲ)、Pd(Ⅱ)、Pt(Ⅱ)、Co(Ⅱ)和Ni(Ⅱ)等7个元素.当S/N=3时,各金属离子的检出限分别为(ng):2.79,0.31,8.20,1.14,9.45,0.27,0.040.方法应用于合成样的分析,标准回收率在95.0—104.0%之间.