HIV-1gp41NHR序列靶点专一性的荧光共振能转移测定

目的确定并利用荧光共振能转移法（FRET）对以HIV-lgp41N端七联重复序列（NHR）为靶点的融合抑制剂进行筛选和作用机制研究。方法FRET采用金属络合物多肽技术设计针对不同结合位点、结合强度可调、涵盖全部NHR序列的靶点和探针,对HIV融合抑制剂进行高通量筛选。由于HIV在进行膜融合时其gp41的N端NHR和C端CHR可形成稳定的六螺旋结构,因此,利用圆二色谱仪对FRET所使用的靶点／探针对的结合强度进行验证,确定对应的靶点／探针对可形成稳定的六螺旋结构;同时,借助细胞活性测试测定抑制荆的活性,验证FRET是否可用于筛选以HIV-1gp41NHR为靶点的抑制剂。结果与结论FRET中使用的靶点／探针均可形成螺旋度较高的六螺旋结构,其中Fe（Env2．0）,／CP2及Fe（Env5．0）,／CP5形成的01．螺旋度分别高达89．6％和84．7％。FRET所使用的靶点／探针对专一性强、结合作用强,可用于进行HIV一1融合抑制剂的筛选和机制研究。