太湖新银鱼线粒体Cytb基因PCR扩增条件的优化

为建立适宜太湖新银鱼（NeosalanxtaihuensisChen）线粒体DNA细胞色素b（Cytb）基因PCR的反应体系和扩增程序,利用正交设计LI6（4^5）表,对反应体系的模板DNA、dNTPs、Primers、TaqDNA聚合酶的浓度和退火温度进行五因素四水平优化筛选和扩增程序的优化,确立了最优反应体系和扩增程序。在设定的PCR扩增条件中dNTPs浓度对扩增结果的影响最大,这极显著水平;引物浓度、退火温度对扩增结果的影响显著;TaqDNA聚合酶的浓度对扩增结果的影响最小,不显著。25pL的反应体系中,在退火温度为50℃、引物浓度为0．5μmol／L、Taq酶浓度为2．5U／μL、模板浓度为5ng／μL、dNTPs浓度为2．5mmol／L的条件下,太湖新银鱼线粒体Cytb基因扩增效果为最佳,电泳条带清晰、规则。