布鲁氏菌Omp16蛋白的原核表达与鉴定

为实现布鲁氏菌Omp16蛋白在大肠杆菌中的高效表达,根据GenBank发表的Omp16(登录号为JF918760. 1)基因序列,在不改变Omp16蛋白氨基酸序列的情况下,根据大肠杆菌密码子偏好性优化基因序列,全基因合成Omp16基因,并将其克隆到pET28a(+)载体中,构建重组质粒pET28a(+)-Omp16,转化至BL21工程菌进行诱导表达,利用His-tag镍柱纯化Omp16重组蛋白,并对纯化后的重组蛋白进行鉴定。结果表明:当重组菌株pET28a (+)-Omp16/BL21(DE3)诱导条件为37℃、IPTG浓度为0. 5 mmol/L诱导6 h时,Omp16蛋白表达量最高; SDS-PAGE电泳显示经镍柱纯化后Omp16蛋白达到了电泳纯,经Western blot分析,目的蛋白具有抗原特异性,在21ku处出现阳性条带,与预期蛋白分子大小相符,因此成功在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达出布鲁氏菌Omp16重组蛋白,为后续单克隆抗体的制备和布鲁氏菌病的检测试剂的研发提供了参考。     

核黄素受体蛋白的原核融合表达

用PCR(polymerase-chain-reaction)方法从含有软体海龟编码核黄素结合蛋白(riboflavin binding protein,RfBP)基因的质粒中克隆出RfBP基因,将该基因与原核表达载体pET30a( )重组并研究了表达条件,聚丙烯酰胺凝胶(SDS)电泳表明,蛋白质的大小为35 kD,以BL21(DE3)pLysS作宿主菌,1 mmol/LIPTG(isopropyl-l-thio-β-D-galactoside)诱导4h,融合蛋白His-tag-RfBP表达量达到最大.本文研究结果可为研究核黄素受体蛋白调节植物的核黄素含量及生长发育机制奠定基础.     

链霉菌查尔酮合成酶基因克隆及原核表达载体构建

根据Genbank数据库已知的链霉菌的查尔酮合成酶基因的保守区设计chs基因特异简并引物,土壤总DNA为模板,利用PCR技术扩增得到该l条chs基因编码区,通过TA克隆、测序和同源比对及进化分析表明:该基因为放线菌来源chs基因.分别在该基因5’末端和3’末端分别引入的限制酶NcoI和EcoR I酶切位点,利用上述2种限制酶分别酶切导入到psimple-T/chs载体和原核表达pET32a,凝胶回收目的片段后,将二者连接并转化大肠杆菌感受态细胞,转化子经菌液PCR筛选、双酶切鉴定后,3730测序结果表明,该基因全长编码区为1089 bp,推测该基因编码全长为362个氨基酸残基,等电点(PI)为5.41、分子量为3 965道尔顿含有CHS保守功能区的酸性蛋白质.分析表明,该基因与Streptomyces lividans来源的查尔酮合成酶RppA基因核苷酸相似性高达93％,氨基酸序列相似性高达87.70％.测序结果表明,该基因已经成功插入到pET32a载体中.     

根癌农杆菌Atu5117基因原核表达载体的构建

为进一步提高农杆菌在植物转基因中的效率,构建一个原核基因表达载体,为农杆菌T-复合物招募蛋白VBP1的编码基因Atu5117的表达调控机理研究奠定基础。首先,通过聚合酶链式反应(PCR)获得Atu5117基因5’端上游具有转录活性的基因片段。然后,用绿色荧光蛋白基因(gfp)和493bp Atu5117启动子构成嵌合基因,体外构建原核表达载体PRSET-Agfp1,并转化到宿主细胞(大肠杆菌DH5α)。通过对绿色荧光蛋白(GFP)的跟踪观察,最终确定有启动子转录活性的基因片段。结果表明,该原核表达载体PRSET-Agfp1构建成功,为Atu5117基因的表达调控机理研究奠定基础。     

瑕疵鉴定的鉴定责任及发现机制

鉴定结论作为现代法庭审判的重要依据,它的形成不仅需要借助仪器和科学方法,还需要鉴定人进行检验、分析。司法鉴定是为诉讼服务的一项科学实证活动,鉴定意见存在瑕疵或错误是在所难免的,因此,在推动司法鉴定法制化的同时,应从行业管理的角度加强配套制度建设,不仅要强化对司法鉴定意见的监督,明确瑕疵、错误鉴定意见的发现机制,而且要建立司法鉴定执业风险保障体系,保障瑕疵、错误鉴定意见的责任得到有效追究和合理赔偿。     

花生HSP 20基因家族鉴定及其表达特性分析

HSP20是一类小分子热激蛋白,在植物抵御逆境胁迫中发挥重要作用.本研究借助花生基因组数据库,通过隐马尔可夫（Hiddne Markov Model,HMM）搜索野生种花生（Arachis duranensis）和（Arachis ipaensis）蛋白质数据库,鉴定出AdHSP 20和AiHSP 20基因各27个,基因长度为946～1 103 bp,不均匀分布在花生9条染色体上.进化树分析显示,这些基因分为11个亚家族.通过对基因结构和保守序列分析表明该基因家族高度保守.表达分析发现,2个野生种花生中各有5个基因在各组织中高表达,大部分基因在果针入土期开始大量表达,具有组织表达特异性,存在多个激素及逆境胁迫相关的顺式作用元件,预示着该基因家族参与花生逆境胁迫响应.     

智能手机鉴定的困境及对策

智能手机鉴定在实践中呈上升趋势,但目前其在鉴定门类中法律地位含糊不明,与其他类型电子数据鉴定相比,其特殊性也没有得到重视。一方面,智能手机及系统、存储介质、数据形态具有复杂多样性;另一方面,其鉴定工具、技术和标准相对滞后,特别是当下鉴定技术还达不到电子取证完整性的要求。要改变这一困境,必须在法律上给予智能手机鉴定明确的地位,制定统一的鉴定操作规范,并对鉴定技术进行强制补强性说明,这样才能确保智能手机鉴定的合法性和可靠性。     

认识文件鉴定与档案鉴定的区别及其意义

在我国档案界,存在有将档案与文件、文件鉴定与档案鉴定混为一谈的观点。文章分别从鉴定的对象和任务、鉴定工作的性质、鉴定的主体、鉴定的标准和依据等方面阐述了文件鉴定与档案鉴定的区别,使我们坚守文件与档案的定义,明确鉴定职责,促进鉴定工作,提高鉴定质量,发挥档案工作的效益。     

沈德潜格调说的实质及儒学原旨

《说诗晬语》是清代格调派诗论家沈德潜的代表性诗话著作。此作的第一要义应是格调说，而其精神实质应是以儒家思想为基质的气象说。围绕着此气象的弘扬，沈氏正面从主体和客体两个层面充实其内涵，努力探讨一个有使命意识诗人的精神气质，大力弘扬着历代具此种气质的诗作，特别是有效地利用他的理论、挑战、反恩了当时诗坛的各种流派，以所倡导的宏大气象超越了乾嘉以来唐宋之争，从《说诗晬语》中能找到所有这一切立足于时代的逻辑理路与领袖文坛的风范。     

刺参酸性粘多糖的分离及鉴定

将刺参体壁用０ ．５ ｍｏｌＬＫ２ＣＯ３ 抽提，胰酶水解，乙醇沉淀得多糖粗品，再经过氧化氢脱色、萃取脱蛋白质、透析除盐等工艺制得多糖纯品．此多糖纯品经凝胶电泳和醋纤薄膜电泳证明为均一性多糖．红外光谱分析表明，样品具有典型的多糖吸收峰．薄层色谱分析确定其单糖组成为葡萄糖醛酸、氨基半乳糖和岩藻糖．此外，样品富含硫酸基团，属典型的酸性杂多糖，ＨＰＬＣ测定其平均相对分子量为５０ ０００ ．     

原苏共的档案管理

前苏联国家档案馆馆长皮霍亚透露了一个秘密:12年前有250万份档案卷宗曾被销毁。     

论经济纠纷司法会计鉴定的风险及防范

司法会计鉴定的风险防范是一项极其复杂的系统工程。从司法会计鉴定的特点,潜在风险目前处置中存在误区等方面入手,分析该行为的复杂性,提出防范和化解会计鉴定风险的措施。     

野菜的毒性鉴定及去毒方法

(一)野菜的简易毒性鉴定。(1)煮熟后,尝味。如有明显的苦涩味或其他怪味则表示可能有毒,涩味表示含单宁,苦味表示可能有生物碱、配糖体等苦味物质。(2)煮熟后,在汤中加入浓茶,如产生较多沉淀,则表示内含金属盐或生物碱。(3)煮熟后,振摇汤汁,如产生大量泡沫者,则表示内含皂甙类物质。(4)煮熟后,晒干磨成粉,混入饲料喂养动物,观察动物食后的反应。     

高县的病残儿及计划生育术后鉴定

高县的病残儿及计划生育术后鉴定吴林祥高县计划生育技术鉴定组根据国家计生委、卫生部的独生于女病残儿鉴定标准和节育手术并发症诊断的两个新标准。今年四次共鉴定病残儿１０８例，符合串为６１．１％。进行节育后鉴定４１例，符合率６０．９％。他们对这“两项鉴定”工...     

山葡萄酵母的筛选及初步鉴定

为筛选适合酿造山葡萄酒的优良酵母,从山葡萄果皮表面及破碎后自然发酵过程中分离筛选,通过富集培养、稀释涂布和划线纯化,获得酵母菌株6株,通过WL(Wallerstein Laboratory Nutrient Agar)琼脂培养基培养,初步鉴定有3株为酵母属(Saccharomyces)的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae).     

科技成果鉴定中存在的问题及对策

目前我国科技成果鉴定中在组织鉴定单位、成果完成单位、查新结论、鉴定专家、成果鉴定评价指标体系、成果鉴定中的监督等六个方面存在问题。通过对上述问题的探讨与剖析,针对性地提出转变政府及管理部门的职能、建立科技成果鉴定评价体系、规范查新程序、实施规范化的专家管理、推行背靠背的成果评价等对策,以期对科技成果作出客观、公正、更科学的评价。     

羊皮癣病病原菌的分离及鉴定

采用沙保弱氏培养法(Sabourord cultivation),从四川某县黄羊种畜场128只南江黄羊中所患癣病,取皮屑、被毛。经过分离培养、真菌学鉴定,系石膏样小孢子菌(Microsporum gypseum)、羊毛状小孢子菌(Microsporum lauosunl).上述真菌均对皮康圣、三酸合剂敏感。其发病率高达68.75％。     

模拟情境与表达剩余的传播之域--马原小说的意义之境

在中国新时期"先锋小说"的板块上,马原写下了亮丽的一笔.这主要不是依赖他作品的内容,更多的则是他那恶作剧般小说叙述的"陌生化"形式.其最大的意义在于他有意识地创作了"活页小说",形成类似"元小说"的效果.但马原最终被读者抛弃与他最初被读者接受一样,都是因为"形式",这是他个人的悲剧,也是中国新时期"先锋小说"的悲剧.     

“百合”植物名称及原植物考证

通过分析中国古今文献记载,对"百合"植物的中文名称及对应的原植物进行了研究考证。结果显示:"百合"作为植物名称,异名颇多,在现存文献中多达三十余个异名。现代使用的百合科的"百合"名称是根据《尔雅翼》记述的百合鳞茎形态得名,及《本草纲目》记述的该植物可治疗一种名为"百合"的疾病而来。在中国古籍文献中,百合所指的原植物也有多种,除对应百合科百合属的卷丹、百合和细叶百合等种类外,还有古籍记载的木兰科或豆科植物。可见,"百合"在中文古籍中的名称和原植物均较多,而且复杂,在现代百合研究中应注意区分。