油茶查尔酮合酶和异构酶基因的cDNA克隆

查尔酮合酶和查尔酮异构酶是类黄酮代谢与色素苷代谢的关键酶.以油茶近成熟种子cDNA文库和EST文库为材料,通过分子克隆方法鉴定了1条查尔酮合酶基因全长cDNA和1条查尔酮异构酶全长cDNA.结果表明:油茶查尔酮合酶基因的cDNA含1479 bp,编码412个氨基酸,为目前最长的查尔酮合酶,与其它物种的查尔酮合酶具有极高的相似性,在进化上高度同源;油茶查尔酮异构酶基因的cDNA含899 bp,编码206个氨基酸,与茶的查尔酮异构酶基因高度同源,但与其它物种的相似性较低.     

根癌农杆菌Atu5117基因原核表达载体的构建

为进一步提高农杆菌在植物转基因中的效率,构建一个原核基因表达载体,为农杆菌T-复合物招募蛋白VBP1的编码基因Atu5117的表达调控机理研究奠定基础。首先,通过聚合酶链式反应(PCR)获得Atu5117基因5’端上游具有转录活性的基因片段。然后,用绿色荧光蛋白基因(gfp)和493bp Atu5117启动子构成嵌合基因,体外构建原核表达载体PRSET-Agfp1,并转化到宿主细胞(大肠杆菌DH5α)。通过对绿色荧光蛋白(GFP)的跟踪观察,最终确定有启动子转录活性的基因片段。结果表明,该原核表达载体PRSET-Agfp1构建成功,为Atu5117基因的表达调控机理研究奠定基础。     

兜兰二氢黄烷酮醇-4-还原酶基因的克隆及其表达特性

克隆同色兜兰二氢黄烷酮醇-4-还原酶基因DFR,分析其序列特征,了解其在不同组织部位的表达情况.采用RT-PCR和RACE技术从花中克隆DFR的全长cDNA,用生物信息学方法分析序列特征,并用半定量RT-PCR研究其在不同组织的表达.分离到DFR,该cDNA全长1267bp,具有1个1074 bp的完整开放阅读框,编码357个氨基酸.序列分析表明,该DFR蛋白含有1个NADB_Rossmann superfamily保守结构域,1个NADP(H)结合域和1个底物特异性结合域,其与文心兰、石斛兰和大花蕙兰等的DFR同源性在75％～80％.系统进化树显示,该DFR蛋白与兰科植物的DFR蛋白亲缘关系比较近.半定量RT-PCR表明,该DFR在成熟花和营养叶中的表达量最高,在子房、苞叶、萼片和花瓣中的表达量相当,在唇瓣中的表达量次之,在蕊柱中的表达量较唇瓣中的低,在花茎中的表达量最低,在根中几乎检测不到.原核表达结果表明,该DFR在大肠杆菌中获得表达.从兜兰中克隆到花色代谢途径中的关键酶基因DFR,该基因可能参与调控花色素的合成.     

内元(内含子)剪接与基因表达调控

自1977年发现不连续基因（断裂基因）以来，有关内元（内含子）的功用以及转录后的加工机制是真核生物分子遗传研究的一个热门。本文就有关内元的类型、剪接机制及在基因表达中的调控作进一步的探讨。     

核黄素、烟酸对烟草抗赤星病诱导的交互作用

用核黄素、烟酸单独或二者组合分别诱导烟草植株,１６ｈ提取总ＲＮＡ,用５种防卫基因的ｃＤＮＡ探针作印迹杂交．结果表明,病程相关蛋白ＰＲ－ｌａ在４种处理中均表现出转录活性增强,其中以核黄素诱导效应最好．几丁质酶（ＣＨＴ）、查尔酮合成酶（ＣＨＳ）及脂氧合酶（ＬＯＸ）基因的表现为：受核黄素、烟酸／核黄素诱导后活性略有增强,而受烟酸、核黄素／烟酸诱导后活性下降．苯丙氨酸氨裂解酶（ＰＡＬ）基因在４种处理中都不能被激活．ＰＡＧＥ电泳显示,ＰＲ－ｌａ和ＣＨＴ积累与基因转录活性相一致;ＰＲ蛋白积累动态又与诱导抗性发生动态呈先后关系,抗病性最大期比蛋白质积累的最高期晚３天;烟草基因组ＤＮＡ的随机引物扩增（ＲＡＰＤ）检测结果指出,除烟酸单独诱导在引物２中扩增出两种产物外,其他处理都不能诱导烟草ＤＮＡ分子结构发生变化．