甜椒抗菌蛋白基因(harp)转化桉树的研究

用不同浓度的2,4-D与IAA对桉树叶盘进行了愈伤组织的诱导及植株再生的试验,建立了新的桉树再生体系.进一步用含甜椒抗菌基因(hrap)的农杆菌侵染桉树叶盘,发现侵染后对愈伤组织诱导率无明显影响,却抑制了桉树的植株再生.对再生苗的PCR和Sou thern杂交检测证实已将hrap基因已转入桉树植株的基因组中.     

ARF基因导入烟草的遗传转化研究

以烟草无菌苗叶片为外植体,利用叶盘法,将含生长素应答基因(auxin response factor,ARF)的根癌农杆菌LBA4404携带双元质粒载体(pBin438)介导进行遗传转化.结果表明:诱导烟草叶片不定芽的最佳分化培养基为MS+0.8 mg.L-16-BA+0.05mg.L-1NAA,生根培养基为1/2MS+0.02 mg.L-1IBA+0.02 mg.L-1NAA,分化率、生根率分别为96.9%、96.7%;将预培养3 d的外植体与农杆菌菌液浸染3~5 min后,共培养2~3 d,然后转化到含Km75 mg.L-1的选择培养基上进行分化筛选,再转入Km为75 mg.L-1、100 mg.L-1的培养基上进行生根筛选,生根率为66.1%;与对照相比,转基因烟草在形态上发生了明显的改变,叶片颜色变深绿,叶片增厚,主叶脉变粗壮等.PCR扩增,获得40株阳性转基因苗,证明ARF基因已导入烟草中.     

几丁质酶及β-1,3-葡聚糖基因转化橡胶树的研究

旨在通过基因工程的方法提高橡胶树白粉病抗性.以高产、综合性状优良的大规模推广级品种‘热研7-33-97'15090块花药愈伤组织为受体,通过农杆菌介导将菜豆几丁质酶和烟草β-1,3-葡聚糖酶基因转入橡胶树,获得1386个抗性胚状体,其中277个通过次生体胚发生成功增殖.PCR结果表明有49个胚状体为阳性,转化效率为0.33％.通过农杆菌介导将菜豆几丁质酶和烟草β-1,3-葡聚糖酶基因转入橡胶树,PCR阳性率为0.33％,为通过基因工程手段提高橡胶树白粉病抗性奠定了良好的基础.     

大肠杆菌巴豆甜菜碱还原酶基因缺失菌株的构建

报道了体外构建caiA基因缺失的带有卡那霉素抗性基因的5.2kb线状DNA分子,以此转化大肠杆菌JM83和BL21(DE3)株,借助于体内DNA同源重组,定向敲除了大肠杆菌中的巴豆甜菜碱还原酶编码基因caiA。经遗传稳定性实验、聚合酶链反应(PCR)以及Southern鉴定,表明所获得的JM83转化子22号和BL21(DE3)转化子4号确为caiA基因缺失突变株;酶活分析结果表明,22号和4号转化子均丧失了巴豆甜菜碱还原酶活性。     

抗口蹄疫病毒phage-scFv及可溶性scFv的构建

利用重组DNA技术在抗口蹄疫病毒单克隆抗体1C 7 VH基因和VL基因之间导入一段连接肽[(G ly4Ser)3],采用重叠延伸拼接法,经聚合酶链反应(PCR)扩增获得scF v基因。将scF v基因克隆至噬菌粒pCANTAB 5E载体,转化E.coli TG 1,构建噬菌体抗体文库。用M 13KO 7辅助噬菌体挽救及固相口蹄疫病毒(FMDV)抗原对噬菌体抗体文库的三轮“吸附-洗脱-扩增”的淘洗,筛选出scFv阳性克隆。将阳性克隆转化E.coli BH 2151,通过异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导可溶性scFv蛋白的表达。酶联免疫吸附实验(EL ISA)检测表明:scFv克隆表达的phage-scFv及可溶性scFv与FMDV亲和力高,特异性强。     

利用CRISPR/Cas9双质粒系统构建Nissle 1917ΔcheZ基因缺失株

为研究趋化性基因cheZ对大肠杆菌益生菌Nissle 1917的影响,研究以敲除大肠杆菌Nissle 1917的cheZ基因为目的.首先,利用诺唯赞ClonExpress?MultiS一步克隆试剂盒构建pTargetTΔcheZ重组质粒,随后将pTargetTΔcheZ重组质粒电转入含pCas质粒的Nissle 1917感受态中,以实现对大肠杆菌益生菌Nissle 1917染色体中cheZ基因进行靶向敲除,经PCR鉴定和基因测序双重证实,Nissle 1917基因组中的cheZ基因已敲除.最后,经IPTG诱导和高温培养,消除缺失株中的pTargetTΔcheZ和pCas 2个质粒,最终获得趋化性基因cheZ缺失株Nissle 1917ΔcheZ.本试验为验证cheZ基因在益生菌Nissle1917中的生物活性及其扮演的基因功能的后续相关研究打下了前期基础.     

植物细菌诱导型表达载体的构建

根据GenBank中细菌诱导型启动子的碱基序列设计一对引物,通过PCR扩增出启动子PPP3(AF469483,220bp).经分子操作将启动子和质粒pUC18连接后转化E.coliDH5α,经蓝白筛选和PCR检测筛选阳性菌落,测序结果与Genebank中的碱基序列完全相同.对扩增到的PPP3片段和含目的基因(hrap或pflp)的pBI121质粒进行双酶切,分别回收PPP3片段和含目的基因的pBI121大片段,连接后转化E.coliDH5α,通过卡那霉素抗性筛选和PCR检测,表明细菌诱导型启动子和目的基因已正确连接.用重组质粒转化农杆菌,经卡那霉素抗性筛选和PCR检测,证明植物细菌诱导型表达载体构建成功.     

含硒黑紫麦种植前景好

天然含硒优质黑紫小麦,是我国科研最新推出的高科技品系资源。采用常规育种、染色体工程与分子标记相结合,通过基因移置,目前在山东菏泽市培育成高营养食药兼用型硬质黑小麦——“紫晶一号”。“紫晶一号”小麦株高75—80厘米,幼苗匍匐,根系发达,秸秆粗状,株型紧凑,叶片长宽、幼苗期根秆呈紫色,抗倒伏,抗逆性强,分蘖力强,硬质,属半     

老年人和儿童社区获得性肺炎的病原学分析

目的探讨儿童和老年人社区获得性肺炎病原学差异。方法回顾性分析我院236例社区获得性肺炎患者的临床资料,比较病原体种类和比例差异。结果所有入组的236例患者均行痰培养和病原体检测。儿童组106例患者中检出痰培养阳性102例,共计108株病菌,其中肺炎链球菌50株(46.3),金黄色葡萄球菌23株(21.3),流感嗜血杆菌17株(15.7),大肠杆菌11株(10.2),呼吸道合胞病毒5株(4.6),其他病原体2株(1.9)。老年人组130例患者中检测痰培养阳性119例,共计131株病菌,其中肺炎链球菌67株(51.1),G-阴性杆菌54株(41.2,包括克雷白杆菌25株,大肠杆菌21株,流感嗜血杆菌8株),军团菌6株(4.6),其他病原体4株(3.1)。结论儿童社区获得性肺炎的病原体以肺炎链球菌最为常见,占46.3,其次为金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌、大肠杆菌和呼吸道合胞病毒;老年人社区获得性肺炎的主要病原体包括肺炎链球菌和G-阴性杆菌,其他病原体较少见。     

静注肾上腺素加用参附注射液对心肺复苏影响的实验研究

目的探讨静注肾上腺素加用参附注射液(SF)对家兔心搏呼吸骤停模型心肺复苏(CPR)的影响.方法将32只家兔随机分为SF组、对照组,每组16只;制备家兔心搏呼吸骤停模型,并在4min后开始CPR,统计CPR成功率.结果两组CPR成功率具有显著性差异(P＜0.05),SF组为81.25%,对照组为68.75%.结论静注肾上腺素加用SF可显著提高家兔心搏呼吸骤停模型CPR成功率.     

转基因作物安全评价及检测技术

转基因作物的安全评价及检测已成为世界各国研究的热点。目前采用的转基因作物安全评价和检测方法已在国际上达成广泛的共识,能够为转基因作物的商业化提供有力的科学保障。就转基因作物的安全性问题,以及转基因作物的安全评价（包括标记基因的安全）和检测方法等问题进行了总结和分析,以期为人们对转基因作物安全性的认识和转基因作物的安全管理提供一定的参考。相关的评价方法和检测技术尚需不断的改进和完善,以适应未来更多转基因作物大规模商业化种植的需要。     

低温诱导的植物抗冻基因研究进展

低温是影响植物生长、发育和地理分布的重要因素 .近年来 ,有关植物抗冻性的分子生物学研究取得了长足的进步 .大量研究发现低温诱导许多基因的表达 ,根据基因表达的蛋白产物 ,可分为编码功能蛋白基因和调节蛋白基因两大类 .作者对这两类低温反应基因的表达与调控及在植物抗冻性中作用的最新研究进展进行了介绍 .     

转基因植物安全评价及其伦理探析

转基因植物的出现是科技发展的必然,但转基因植物的安全问题有待验证,以至于转基因植物引发的伦理争议层出不穷。转基因植物的发展有利于保证粮食安全,缓解世界粮食短缺;减少人工化学品投放,保护生态环境;降低农业生产成本,提高劳动生产率;丰富人类食品的种类,提高食物的营养价值;预防或治疗某些疾病,增强食品卫生预防能力。与此同时,转基因植物还可能引发食物中毒、产生过敏反应、引起抗生特性等食用方面的风险,以及损害物种遗传多样性等环境方面的伦理争议。因此,实现转基因植物安全评价应遵循生命伦理学的尊重原则、不伤害原则、公正原则、效用原则等四大原则,以促进转基因植物的和谐发展。     

浅谈转基因植物研究及我国的发展策略

论述了转基因植物及其重要意义、国内外转基因植物研究与产业化现状、发展趋势以及我国转基因植物研究存在的问题与对策。     

植物抗寒基因研究进展

本文综述了国内外抗寒基因的研究方法和抗寒基因的表达控制的新进展。     

核黄素、烟酸对烟草抗赤星病诱导的交互作用

用核黄素、烟酸单独或二者组合分别诱导烟草植株,１６ｈ提取总ＲＮＡ,用５种防卫基因的ｃＤＮＡ探针作印迹杂交．结果表明,病程相关蛋白ＰＲ－ｌａ在４种处理中均表现出转录活性增强,其中以核黄素诱导效应最好．几丁质酶（ＣＨＴ）、查尔酮合成酶（ＣＨＳ）及脂氧合酶（ＬＯＸ）基因的表现为：受核黄素、烟酸／核黄素诱导后活性略有增强,而受烟酸、核黄素／烟酸诱导后活性下降．苯丙氨酸氨裂解酶（ＰＡＬ）基因在４种处理中都不能被激活．ＰＡＧＥ电泳显示,ＰＲ－ｌａ和ＣＨＴ积累与基因转录活性相一致;ＰＲ蛋白积累动态又与诱导抗性发生动态呈先后关系,抗病性最大期比蛋白质积累的最高期晚３天;烟草基因组ＤＮＡ的随机引物扩增（ＲＡＰＤ）检测结果指出,除烟酸单独诱导在引物２中扩增出两种产物外,其他处理都不能诱导烟草ＤＮＡ分子结构发生变化．     

转基因作物基因资源的知识产权保护进路研究

知识产权是知识财产私有的权利形式,是一种基于个体的权利生成,面对权利客体的多样性创新,特别是转基因作物基因资源集合了自然公共属性和个体价值属性,对知识产权保护进路形成突破。以农民权为基础和框架构建的基因资源权应注入社区发展权的公共性理念,通过社区共享性制度系统促进转基因作物基因资源与知识产权保护的双向度互动式发展进路。     

论动物转基因科研试验安全监管的法律制度

动物转基因技术种类日益复杂,应用范围不断扩大,但成本和技术要求却不断降低,生物风险和安全威胁越来越大。科研试验阶段是风险防控的关键,因此需要科学而严谨的科研试验法律监管,以预防意外和不正当试验对社会及生态造成不良影响。国内可以指向转基因动物科研试验监管适用的法律规定集中于农业应用领域,不足以形成全面有效的监管。基于动物转基因技术的发展现状和趋势,需要对现有法律法规进行分析,明确科研试验监管的基本原则,以协调监管体系为核心探讨法律完善的关键问题,进而系统性地明确科研试验安全监管法律的进展趋势。     

论国际采购与供应链管理

对采购的价值理念进行了论述,研究和分析了当前中国的采购市场与采购环境。提出建立中国采购经理指数(PMI),实现与世界采购评价标准的接轨。通过中外采购管理的对比,发现中国采购管理的不足和其根源。结合贸易自由化给全球采购带来的机遇与挑战以及现代化物流业的发展对中国采购环境的影响,指出了国际采购的发展趋势。     

甜菜碱可以提高植物对低温的忍受力

某些植物种类在低温胁迫下积累甜菜碱,适应低温,提高对冰冻的忍受力.外施甜菜碱可以增强一些植物种类,包括天然积累甜菜碱和非积累甜菜碱植物的抗寒性.外施甜菜碱加上低温驯化处理比单独低温驯化处理更能提高植物的抗寒性.把编码甜菜碱生物合成酶的基因转到某些原来非积累甜菜碱植物上,也能产生、积累甜菜碱和提高抗寒性.