M48磁珠法提取脱落细胞DNA的改良方法

目的:对M48磁珠法提取脱落细胞DNA进行改良。方法:在常规M48磁珠法基础上省略MW1试剂及一次酒精的洗涤步骤,同时利用磁力架快速倾倒溶液法及吸瓶加液法减少提取时间。结果:采用两种方法提取DNA,在STR检验成功数及图谱上没有明显差异,但用改良的M48磁珠法提取时间少于常规的M48磁珠法。结论:采用改良的M48磁珠法提取纯化DNA,可以缩短提取时间,并能保证提取质量。     

应用M48磁珠试剂盒提取牙齿DNA

目的:应用M48磁珠试剂盒提取牙齿DNA,并评价其应用价值。方法:对实验室日常受理的6例牙齿,分别采用有关文献提出的QIAquick?PCR纯化试剂盒方法和M48磁珠试剂盒提取牙齿DNA。结果:6例牙齿采用两种方法检出结果一致,但是M48磁珠试剂盒提取牙齿DNA过程较简单、时间短。结论:M48磁珠试剂盒可以应用于牙齿DNA提取,并能大大减少实验人员工作量。     

陈旧性血迹的DNA检验

该文利用Chelex-100法和M48磁珠提取法分别提取陈旧性血迹,比较发现,M48磁珠提取法更适用于陈旧性血迹的DNA检验。     

改良的差异裂解法提取混合斑中精子DNA

目的:采用改良的差异裂解法提取混合斑中精子DNA,并评价其应用价值。方法:对实验室日常受理的34例混合斑检材,分别采用改良的差异裂解法与常规差异裂解法提取其精子DNA。结果:34例混合斑检材采用两种方法的检出结果基本一致,但是改良的差异裂解法相比常规差异裂解法在时间上缩短一半。结论:改良的差异裂解法能较快提取混合斑中精子DNA,并能保证检验结果。     

解胶剂对脱落细胞粘取器DNA检验的影响

目的:探讨折叠粘膜对粘膜DNA检验、解胶剂对折叠状粘膜的DNA检验的影响。方法:使用常规Chelex100法,分别提取伸展状、折叠状粘膜、加入解胶剂的折叠状粘膜。结果:组间两两比较,伸展组与折叠组、H解胶剂组与折叠组、D解胶剂组之间有显著差异;而从组间的平均峰面积看,H解胶剂组>伸展组>折叠组。结论:过分折叠对粘取器粘膜的DNA检验不利,溶解效果较强的解胶剂能更充分地释放被粘附的脱落细胞,Chelex100法结合滤膜离心套管,能有效避免无机提取溶液消化粘胶乳化的影响。     

三种新鲜长骨DNA提取方法的比较

目的:研究对新鲜长骨DNA的快速高效提取。方法:采用Chelex-100法、核酸提取仪法、改良法提取肋软骨和新鲜长骨的DNA,对检测所得STR数据进行统计分析。结果:改良法对肋软骨和新鲜长骨样本的检出率均是100%。结论:改良法能快速高效地获得新鲜长骨DNA。     

应用QIAamp DNA Investgator Kit试剂盒提取牙齿DNA

目的:应用QIAamp DNA Investgator Kit试剂盒提取牙齿DNA,并评价其应用价值。方法:实验室日常受理的12例牙齿,分别采用有关文献方法和QIAamp DNA Investgator Kit试剂盒提取牙齿DNA。结果:12例牙齿采用两种方法检出结果一致,但是QIAamp DNA Investgator Kit试剂盒提取牙齿DNA过程较简单,时间短。结论:QIAamp DNA Investgator Kit试剂盒可以应用于牙齿DNA提取,减少实验人员工作量。     

激光捕获显微切割结合低体积扩增技术研究

目的:研究激光捕获显微切割技术联合应用低体积扩增技术,建立一套微量混合样本DNA的检验方法。方法:使用PALM系统切割捕获目标细胞,弹射到低体积扩增玻片的反应位点上,消化细胞,提取DNA,使用Identifiler?试剂盒在1.5μL体系中进行PCR扩增。结果:分别捕获10个口腔上皮细胞、20个精子细胞,成功获得16个完整的STR基因座分型谱带。结论:激光捕获显微切割技术联合应用低体积扩增技术适用于法医学中微量混合样本DNA检验。     

直接扩增法提取脱落细胞DNA

随着社会的发展,法医DNA检验的检材除了常见的血痕、精斑、唾液斑外,越来越呈现出微量化的趋势,比如盗窃案件中常常遗留的汗潜指纹、工具、手套等。这些现场的生物学检材,大多需要进行纯化提取,提取过程耗时、繁琐并伴有DNA模板的损失,特别对于微量检材,往往得不到STR分型。该文采用直接扩增法来检验,并同时采用M48核酸纯化试剂盒进行平行对比提取,结果表明直接扩增法对于微量检材的提取具有很好的效果。     

毛细管电泳定量分析兔血管平滑肌细胞内外源基因RT-PCR产物

目的应用毛细管电泳的方法定量分析体外培养的兔血管平滑肌细胞中外源基因mRNA的表达水平。方法构建兔特异性金属蛋白酶组织抑制剂3(TIMP-3)基因重组质粒载体,通过阳离子脂质体介导转染兔平滑肌细胞;实验分为重组质粒组、空质粒载体组、正常对照组;转染48小时后抽提各组总RNA,按照RT-PCR方法进行扩增;对重组质粒载体进行双酶切,提纯TIMP-3DNA并进行浓度测定,按照已知浓度对其进行毛细管电泳,绘制TIMP-3DNA标准浓度曲线图;对RT-PCR产物分别进行琼脂糖凝胶电泳及毛细管电泳,观察结果并依据标准浓度曲线公式计算RT-PCR产物的含量。结果琼脂糖凝胶电泳中,重组质粒组在TIMP-3基因相应的碱基位置出现明显的阳性条带,而其他两组未见明显的条带;毛细管电泳结果显示重组质粒组TIMP-3DNA含量明显高于正常对照组及空载体质粒组,P<0.05,差别具有显著性意义。讨论CE是一种高效的定性定量方法,RT-PCR产物可以用毛细管电泳直接分离定量。     

指甲内侧DNA检验成功率影响因素探讨

人体指甲接触其他个体时,指甲内侧会留下少量的其他个体DNA,对它的检验是当代案件侦破的热点。在不同情况下,指甲内侧DNA检验的成功率差异较大。影响指甲内侧DNA检验成功率的主要因素有个体差异、案件性质和案件发展过程、检材的前处理、检材提取是否正确以及能否正确判读分型结果等,该文详细综述了指甲内侧DNA检验成功率的影响因素。     

KingFisher核酸提取仪在疑难检材中的应用

目的:探讨King Fisher核酸提取仪的应用价值。方法:通过对不同检材的提取纯化,对比King Fisher核酸提取仪和4种提取纯化方法的提取效果。结果:King Fisher具有高效的纯化效果。     

虹膜色素上皮细胞移植治疗视网膜色素上皮细胞变性

目的研究自体虹膜色素上皮细胞(Iris P igm ent Ep ithelium,IPE)移植治疗视网膜色素上皮细胞变性的效果。方法采用酶—机械分离—酶消化法法获取高纯度、高活力的RPE细胞用于移植,采用外路法将IPE细胞悬液移植入视网膜下腔。结果IPE移植术后患者眼底移植区色素沉着减少,未见渗出,出血,视网膜平,视力从入院时的0.15提高至术后2W的0.2。多焦ERG显示移植区P1波平均反应密度上升。结论IPE细胞移植有望成为RP治疗的一新方法。     

三种燃烧介质上柴油残留物的检验效果研究

目的:比较不同燃烧介质上柴油残留物的检验效果,排除燃烧介质对其检验的干扰。方法:分别在棉布、塑料和纸板上添加一定量柴油,完全燃烧后经溶剂提取,用气相色谱/质谱法对柴油残留物进行检验。结果:在这三种燃烧介质中,柴油在纸板上的燃烧程度最高,且对于纸板上的柴油残留物,能检出的直链烷烃种类明显较多。结论:通过研究直链烷烃和烷基蒽成分,能排除燃烧介质成分对柴油残留物检验的影响。针对纸板燃烧介质,应增加检材提取量。     

红外线无损指纹显现仪与茚三酮显现打印纸上汗潜指纹比较研究

目的:结合红外线无损指纹显现法与茚三酮显现法,研究对打印纸上汗潜指纹显现的最佳效果。方法:制作遗留时间为1天至5天的打印纸上的汗潜指纹样本,分别用红外线无损指纹显现仪和茚三酮显现。结果:单独使用红外线无损指纹显现仪、茚三酮显现的效果与先用红外无损指纹显现仪处理再经茚三酮显现相近,先用茚三酮处理后再经红外线无损指纹显现仪显现,指纹显现效果最优。     

圆偏振在物证摄影中的应用

现场勘查中,取证人员在光滑金属客体表面指印痕迹拍照提取时,经常会遇到反射光晕强、痕迹图像反差弱的问题。该文就光滑金属客体表面的汗潜指纹,分别运用圆偏振光和线偏振光作为拍摄光源进行了拍摄比较,论证了圆偏振光摄影在解决这一拍照难题上的可行性。     

充分挖掘低拷贝检材在案件侦破中的价值

低拷贝检材常无法进行针对性提取,得到理想分型的难度较大。该文分别采用增加循环数、细胞富集、低模板试剂盒扩增等方法,提高该类检材的检出率。联合应用新技术、新方法,正确应用低拷贝检材检验结果,可提高低拷贝检材在案件侦破中的应用价值。     

樟脑类化学品的检验与研究

目的:检验检材中的樟脑类化学品成分,研究樟脑类化学品定性分析方法。方法:采用乙酸乙酯溶液分别提取检材奶粉和井水中的樟脑类化学品,建立GC/MS分析方法检验其樟脑类化学品成分。结果:检材奶粉中检出樟脑成分,检材井水中检出龙脑成分。结论:采用乙酸乙酯溶液能提取检材中的樟脑类化学品,建立的GC/MS分析方法可有效对樟脑类化学品进行定性分析。通过报道此类案件,提醒技术人员注意生活常用低毒化学品及临床药物等作为。     

DNA检验技术在DVI中的作用——厦门“6.7”公交车放火案DNA检验

目的:该文主要对DNA检验技术在DVI中的作用进行总结归纳,并提出改进措施。方法:对厦门"6.7"公交车放火案及国内大型灾难事件中DNA检验的回顾分析。结果及结论:随着DNA检验技术的发展,其在DVI中的作用越来越重要。但除了检验技术本身的作用外,各个部门的配合和接力,各种技术手段的协作和共享,样本的采集、相关数据的分析、结果的比对解释以及实验室能力储备等也发挥着重要作用。     

男性Amelogenin基因异常分析

目的:探讨男性个体牙釉质蛋白基因(Amelogenin)异常时的性别判定。方法:利用chelex-100法提取男性个体血样,分别用Ampf STR Identifile、PowerPlex?16 HS、Goldeneyetm 20A和Ampf STRYfiler Kit试剂盒扩增,AB3130xl基因荧光分析仪进行检测。结果:Amelogenin基因分型为X,Ampf STR Yfiler Kit试剂盒扩增检测获得了Y-STR分型。结论:男性Amelogenin基因异常时需用其它方法判定性别。