珊瑚菜ITS序列的PCR扩增与测序分析

为加强珍稀濒危物种珊瑚菜遗传多样性的研究和种质资源的保护工作,本实验对珊瑚菜ITS基因片段的PCR扩增条件进行了优化和产物的测序分析.结果显示:珊瑚菜ITS基因片段的PCR扩增最佳反应体系为Buffer 2. 50μL,d NTP 0. 50μL,引物ITS1和ITS4各1. 00μL,Taq DNA polymerase 0. 15μL,模板DNA 2. 00μL,dd H2O 17. 85μL,总体积25. 00μL.最佳扩增程序为94℃预变性5. 0 min,94℃变性50 s,50℃退火50 s,72℃延伸1 min 45 s,37个循环,后72℃延伸10 min.在最佳扩增条件下获得了清晰、稳定的目的条带,测序后获得长度为628 bp的核苷酸序列,通过GenBank的BLAST比对验证,确定为ITS序列,其中包括完整的ITS1序列和5. 8S r DNA序列以及ITS2的部分序列.     

大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)RPS24基因cDNA克隆及序列分析

本研究运用RT-PCR技术,首次从大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)的肌肉组织总RNA中成功克隆了RPS24(Ribosomal Protein S24)基因的表达序列,并对其进行了测序及初步分析.结果表明:大熊猫RPS 24基因的表达序列全长为431bp,开放阅读框(ORF)为399bp,编码132个氨基酸的蛋白质,该蛋白的分子量为15.3251kD,pI为10.92,含有7种类型共14个功能位点:即1个N-糖基化位点、2个cAMP和cGMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点、6个蛋白激酶C磷酸化位点、1个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、3个N-酰基化位点、1个酰胺化位点及1个RPS 24e sig-nature.进一步分析发现,大熊猫RPS 24基因与已报道的人、牛、苏门答腊猩猩、褐家鼠和小家鼠5个哺乳动物物种的表达序列及其编码的氨基酸序列具有很高的相似性:编码序列同源性分别为94.1%、92.4%、94.7%、89.9%和90.4%;与人RPS 24蛋白的氨基酸序列同源性为98.48%,其余均为99.24%.     

四川兽类新纪录——秦岭鼢鼠线粒体Cyt b基因的克隆及其比较研究

为揭示2003年在王朗采集的鼢鼠标本王03001号是否为秦岭鼢鼠四川兽类新纪录,以鼢鼠标本王0300号的肌肉组织为研究材料,运用PCR技术对其线粒体Cyt 6基因进行克隆和测序.结果表明该基因的长度为1140bp,编码380个氨基酸的蛋白质,所编码的蛋白质含有2个N-糖基化位点,1个蛋白激酶C磷酸化位点,4个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点,6个N-豆蔻化位点.再以已研究的鼢鼠6个种18个体Cyt b基因序列及氨基酸序列为基础数据,把中华竹鼠(Rhizomys sinensis)作为外群,结合本研究的结果构建系统发育树,所得结果不支持王03001号标本为秦岭鼢鼠.     

甘蓝多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白BoPGIP基因的克隆及序列分析

PGIP是一种特异性结合和抑制真菌内切PG活性的细胞壁结合蛋白,在植物分子抗病育种中占有十分重要的地位.甘蓝PGIP基因的克隆和序列分析,将为进一步通过转基因技术培育抗病甘蓝新品种奠定基础.本研究通过同源序列克隆法,根据GenBank已登录的青花菜BoPGIP1(Accession:JF325875)基因全长序列设计基因特异性引物,利用PCR扩增技术从甘蓝中克隆基因,利用生物信息学的方法对其编码蛋白的结构和功能进行了预测.将获得的PGIP基因命名为BoPGIP.该基因DNA全长为1065bp,包含1个内含子和2个外显子.外显子全长975 bp,编码342个氨基酸,分子量为36.2 kD,等电点是6.26.该基因属于PGIP基因家族,具有典型的LRR结构域;功能位点分析显示编码蛋白序列中包括4个N-糖基化位点(65～68,106～109,130～133,254～257),1个蛋白激酶C磷酸化位点(189～191),5个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点(73～76,78～81,151～154,182～185,304～307)和4个N-豆蔻酰化位点(157～162,188～193,236～241,273～278);N末端具有一明显跨膜区域和一个典型信号肽序列;二级结构中包含31.79％helix,13.89sheet和54.32％loop,二级结构以无规则卷曲为主.通过对所克隆的甘蓝BoPGIP基因分析可知,该基因属于PGIP基因家族的新成员,基因的克隆及序列分析为进一步验证甘蓝BoPGIP的功能奠定了基础.     

利用线粒体COI基因序列对中国叶甲科3亚科9属系统分化的研究

测定分析了叶甲科(Chrysomelidae)昆虫3亚科14种的线粒体细胞色素氧化酶亚基I(COI)基因片段。在获得的462bp序列中,204个核苷酸位点为多态性位点(约占44.1%),序列间碱基差异平均值为17.4%。A+T含量为64.6%,碱基转换呈现明显的TC偏向性,颠换的发生主要以TA为主,转换/颠换(R值)为0.9。采用NJ、MP、ML等建树方法重建叶甲科3亚科的系统发育树,结果表明:(1)跳甲亚科和叶甲亚科的亲缘关系更近,萤叶甲亚科与前两者的关系较远。(2)萤叶甲亚科中瓢萤叶甲属的位置比较特殊,它总是先和叶甲亚科聚在一起,然后再与跳甲亚科相聚。(3)克萤叶甲属和守瓜属的亲缘关系较近。     

姜荷花叶绿素降解酶基因PAO的分离及特征

姜荷花是国内新兴的一种热带花卉,其不育苞片尖端带有由叶绿素形成的绿色沉着,严重影响观赏效果.获得叶绿素降解关键酶基因信息有利于后期通过分子育种手段来改良苞片的颜色.为了获得叶绿素降解的关键酶基因PAO信息,本试验在前期通过姜荷花全长转录组测序获得大量转录组信息的基础上,进行筛选分析,获得了2条PAO基因,分别命名为PAO1和PAO2.PAO1基因(Gen Bank:MT077180),c DNA序列全长1 794 bp,开放阅读框1 611 bp(10 bp～1 620 bp),编码一条536AA的氨基酸序列.PAO2基因(Gen Bank:MT077181),c DNA序列全长1 843 bp,开放阅读框1 611 bp (10 bp～1 620 bp),编码一条536AA的氨基酸序列.PAO1和PAO2的氨基酸序列,仅存在4个氨基酸残基的差异.采用Blast,Translate tool(Ex PASy),Clustal Omega,Find Conserved Domains(NCBI),ProtParam,TMHMM Server,SOPMA,SWISS-MODEL,Clustal X(1.81),MEGA4.1等预测和分析了这2个基因编码蛋白氨基酸的一级结构(包括氨基酸序列的组成、保守区、理化特征等)、二级结构、三级结构及分子系统进化关系.PAO1和PAO2的核苷酸与蛋白氨基酸序列与其他物种的PAO基因都具有很高的同源性,两者都包含PLN02518的保守区.分子系统进化分析表明,姜荷花的PAO1和PAO2组成的小类,与小果野芭蕉PAO(XP_009398041.1)的亲缘关系最为接近,然后与禾本科植物的PAO聚为一大类.本研究为后期通过分子手段改良姜荷花不育苞片的颜色提供基础,并为进一步丰富和探索叶绿素降解代谢理论提供铺垫.     

半夏属植物凝集素基因片段克隆与序列分析

半夏属植物凝集素同其他天南星科植物凝集素一样,有3个甘露糖专一结合位点,且具显著的抗虫性.本研究根据已知掌叶半夏凝集素基因表达序列的相关信息设计引物,采用RT-PCR方法,分别从滴水珠、石蜘蛛、盾叶半夏、掌叶半夏、三叶半夏中克隆出长约530bp的凝集素基因片段.使用Genesean软件、ORF finder软件、Ex2PASy Proteomics Server软件对5个凝集素基因片段进行分析,结果表明:克隆出的滴水珠、石蜘蛛、盾叶半夏、掌叶半夏、三叶半夏凝集素基因片段分别编码107、171、170、170、170个氨基酸,在它们所编码的肽链中,都具有酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、蛋白激酶C磷酸化位点和N-糖基化位点三类不同的功能位点.但由于编码序列碱基的突变,引起肽链中的氨基酸发生变化,从而导致这五种植株的凝集素基因存在较高的多态性以及存在功能位点的差异.其凝集素基因多态性及功能位点的差异对凝集素功能的影响需进一步分析.本实验为克隆五种植物凝集素基因的表达序列与结构基因以及深入研究半夏属凝集素的功能提供了有意义的参考资料.     

不同表面消毒方法对核桃叶内生菌分离效果的比较

为了比较几种表面消毒方法对核桃叶内生菌分离种类及数量的影响,分别采用组织块法和稀释梯度法对内生真菌及内生细菌进行分离计数.真菌通过形态学鉴定到属,细菌通过形态学及16S rDNA序列分析鉴定到属、种.结果表明,无论是内生真菌还是内生细菌二氧化氯方法处理下获得的内生菌种类最多.即二氧化氯法获真菌6株,鉴定为5个属,细菌37株,鉴定为11个属种(其中包括1个放线菌属);次氯酸钠法获真菌8株,鉴定为3个属,细菌4株,鉴定为3个属种;升汞法获真菌3株,鉴定为3个属,细菌1株,为未知种.从分离内生菌的数量上比较,二氧化氯方法分离获得的细菌数显著性的多于其他2种方法,由多到少依次为二氧化氯法、次氯酸钠法、升汞法.分析本研究结果认为,二氧化氯表面消毒更适合进行内生菌多样性研究,但不同的表面消毒方法会获得不同的机会菌株.     

基于NCBI核酸数据库资源的黑曲霉微卫星序列的筛选

为了筛选黑曲霉微卫星序列,丰富黑曲霉的基因组资料,从而为开发黑曲霉多态性高的微卫星标记提供参考,本研究利用生物信息学方法在黑曲霉基因组中查询微卫星序列,并对其基因组中微卫星数量、丰度进行了研究.利用SSRHunter 1.3在长度为2704975 bp的黑曲霉基因组中找到了171个微卫星序列.结果表明:在黑曲霉微卫星序列所有重复类型中,以两碱基重复数目最多,为92个,占重复序列总数目的 53.80%;其次是三碱基重复,为70个,占40.94%;再次是四碱基9个,占5.26%.在两碱基重复序列中,AG重复类型最多(24.56%),GC最少(1.17%).三碱基重复序列中,共发现10种重复类别,其中以ACC重复类型最多(7.01%),最少的是AAT,ATC和GCC,占1.75%.四碱基重复中,共发现8种重复类别,除GGAT重复序列为2个(1.17%)外,其他分别各有1个(0.58%).同时选取黑曲霉中二碱基的重复次数在七次以上的微卫星序列和三碱基的重复次数在六个以上的微卫星序列,利用Primer Premier5.0软件来设计引物,为后续微卫星标记的筛选奠定基础.     

南蛇藤内生真菌Y4的分子鉴定及其抑菌活性研究

采用ITS序列分析对从南蛇藤中分离到的一株内生真菌Y4进行了鉴定,并对其液体发酵产物的抑菌活性和化学成分进行了初步研究.结果表明,Y4是子囊菌门的炭疽菌属(Colletetrichum)真菌,其菌丝体乙醇提取物的正丁醇相萃取物对7种植物病原真菌都有较强的抑菌活性,其抑菌活性成分可能为生物碱、内酯、香豆素和有机酸.     

从12SrRNA部分基因序列探讨鳄的系统发生关系

本文用常规方法测定了雅卡凯门鳄（caiman yacane）、新几内亚鳄（crocodylus novaeguineae）等2种鳄类的约400bp的mtDNA12SrRNA基因片段的部分序列，所测序列与GenBank中的其他18种鳄类的12SrRNA基因相应片段同源序列一起经Clustal X1．8软件进行比对，并以乌龟（chinemys reevesii）为外群，用ClustalX（1．8），Mega2软件以及paup软件将这20种鳄的12SrRNA基因部分序列进行比对后构建了20种鳄的进化关系树，并分别用NJ树，MP树探讨它们之间的系统发生关系。其结果显示：食鱼鳄属Gavialis与马来假食鱼鳄属Tomistoma的亲缘关系较近，构成姐妹群并位于鳄科分支的基部。非洲窄吻鳄（Crocodylus cataphractus）与骨喉鳄（Osteolaemus retraspis）形成姐妹群，它们的亲缘关系比与其它真鳄类的关系更近，赞同非洲窄吻鳄应从鳄属中独土出来归属于长吻鳄属Mecistops的观点，因此鳄科包括鳄属、骨喉鳄属和长吻鳄属，它们的关系为（鳄属（骨喉鳄属，长吻鳄属））。鼍科4属中凯门鳄属与黑鳄属关系最近，接下来的是古鳄属、鼍属，而且鼍属是鼍科中起源最早的类群。扬予鳄（Alligator sinensis）与密河鳄（Alligator mississippiensis）较近的亲缘关系得到支持，但它们并没有形成姐妹群关系。     

中国瘿蚊科——新记录属一新记录种

介绍了幼体生殖现象,记述了首次发现幼体生殖现象的瘿蚊科Cecidomyiidae、鼓瘿蚊亚科Porri-corldyinac、异瘿蚊族Heteropezilli一中国新记录属：幼瘿蚊属Miastor Meincrt。1864及一中国新记录种：首幼瘿蚊Miastor metraloas Mcincrt,1864．依据已有记载和中国标本,对属和种的特征进行了重新描述,绘制了鉴别特征图。并拟定了新记录属种的中文名称．     

抚州农田杂草的多样性及其防除

抚州农田杂草有61科、128属、237种，其中以旱地杂草最多。文章分析了杂草的危害，介绍了一些防除的方法。     

“类哲学”理论研究

高清海先生认为,人是哲学研究的真正主题,马克思的实践观点突破了传统物种观点的限制,实现了认识人的根本转变.人的历史发展要依次经历群体本位、个体本位和类本位这样三个发展阶段,这同时也就是人作为主体的三种形态,人只有经历前两个阶段的充分发展之后,才能真正达到人的自觉的类本位阶段,人的自我意识也才能达到充分的自觉.高清海先生关于人学研究的最为重要的理论成果就是“类哲学”理论,它作为成熟形态的人的成熟理论体现的是人的自我意识已经达到充分自觉的状态.“类哲学”理论是高清海先生关于马克思人类解放思想的当代解读,它的提出具有多方面的重大意义.     

四川灵芝属资源研究

报道了四川灵芝属（Ganoderma）26个已知种，其中灵芝亚属（Subgen·Ganderma）21种；粗皮灵芝亚属（Subgen·Trachyderma）1种；树舌亚属（Subgen·Elfvigia）4种。讨论了一些未知种类的特征。所研究的标本保藏于绵阳农业专科学校真菌标本室（MYHM）。     

廉江“茗皇”茶的生物学特性及其生物碱成分分析

对廉江市茗皇茶业有限公司出产的＂茗皇＂茶的生物碱进行提取,并采用高效液相色谱法对生物碱成分进行分析.将＂茗皇＂茶的茶碱、咖啡碱的含量与国内部分茶叶品种的相应生物碱含量进行了比较.还对＂茗皇＂茶茶树金萱（台茶12号）的叶和花进行了形态及微形态特征方面的观察.结果显示：金萱物种属于山茶属短蕊茶组,其生物碱的含量水平较高.     

基于形态学特征探讨榕属(Ficus)部分植物的系统发育

本研究以桑科榕属的11种植物为研究对象,以桑科波罗蜜属的波罗蜜作为外类群,通过观测每种植物的茎、叶、表皮毛、气生根、气孔器、花等24种形态学特征,并对这些特征进行编码.用PAUP*4.0b10软件包对所得形态性状数据进行聚类分析,得到3种拓扑结构一致的系统树,即邻接树(NJ)、UPGMA树和最大简约树(MP),并对这些类群之间的系统发育关系进行了分析.     

湛江棕榈科植物的RAPD分析

采用RAPD法对湛江地区棕榈科5属12种植物进行了基因组DNA多态性分析．从100个随机引物中筛选出10个有效引物．共获得RAPD位点72个，其中多态性位点72条，占全部位点数的i00％．特有位点43个，占全部位点数的59．7％．利用PAUP4．0b10软件包选择UPGMA法对所得到RAPD数据矩阵进行聚类分析，UPGMA聚类树与有关文献表型分类结果不尽一致．研究结果不支持夏威夷椰子（Chamaedoreasei，rizii Burr．）置于竹节椰属（Chamaedorea Willd．）的观点，对于其分类地位有待进一步确定．     

不同入药部位中药元素含量的比较

用t检,比较了《兽药典》中113味以花果仁入药中药、101味以茎叶入药中药、105味以根须入药中药及48味其它入药中药11种无机元素含量,结果首次表明：茎叶类中药Zn含量显著高于花果仁、根须及其它三类中药;花果仁类中药P含量显著高于茎叶、根须二类中药;其它入药中药类Fe、Cu的含量显著高于花果仁、茎叶及根须类三类中药。     

江津市畜禽寄生虫区系调查

对江津市猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅、兔进行了寄生虫区系的调查 ,共剖检畜禽 4 94头 (只 ) ,粪检 5 0 0 0余头 (只 ) ,收集虫体样本 14 6 6 9条 ,鉴定为 134种 ,其中吸虫 33种 ,绦虫 2 6种 ,线虫 2 3种 ,棘头虫 3种 ,蜘蛛昆虫 19种 ,检出 2 8种艾美尔属卵囊、住白细胞虫属 1种和小袋纤毛虫 1种 ,隶属于 5门 8纲 17目 4 9科 6 9属。调查结果分析显示 ,江津市各种畜禽感染寄生虫较为普遍 ,畜禽的寄生虫感染率为 6 7.8% ,蠕虫感染率为 6 5 .9% (感染率范围为 2— 10 0 % ) ,多为多虫种混合感染 ,但各种畜禽感染的寄生虫虫种不一致。本次调查整理出江津市畜禽寄生虫名录 ,为畜禽寄生虫病的防制提供了科学依据