大白菜RAPD扩增体系的优化研究

以大白菜 341 1 - 7自交系为材料 ,使用 PE公司生产的 Thermal Cycler480型 PCR仪 ,对影响大白菜 RAPD扩增的因素进行了研究 ,确定了模板 ,Mg2 +,d NTPs,引物和 Taq DNA聚合酶的适宜浓度和最佳的循环次数 .实验结果表明 ,在 2 5μL反应体系中使用 2 0— 60 ng的模板 DNA,1 .5— 2 .0 mmol/L 的 Mg2 +,0 .1 5— 0 .2 5 mmol/L d NTPs,0 .8— 1 .0 μmol/L随机引物 ,1 .0— 1 .5 U Taq DNA聚合酶 ;在 94℃下预变性 5 min后执行 94℃ 1 min,37℃ 1min,72℃ 2 min,35个循环 ,最后 72℃再延伸 5 min的条件下 ,大白菜的 RAPD扩增效果较好     

珊瑚菜ITS序列的PCR扩增与测序分析

为加强珍稀濒危物种珊瑚菜遗传多样性的研究和种质资源的保护工作,本实验对珊瑚菜ITS基因片段的PCR扩增条件进行了优化和产物的测序分析.结果显示:珊瑚菜ITS基因片段的PCR扩增最佳反应体系为Buffer 2. 50μL,d NTP 0. 50μL,引物ITS1和ITS4各1. 00μL,Taq DNA polymerase 0. 15μL,模板DNA 2. 00μL,dd H2O 17. 85μL,总体积25. 00μL.最佳扩增程序为94℃预变性5. 0 min,94℃变性50 s,50℃退火50 s,72℃延伸1 min 45 s,37个循环,后72℃延伸10 min.在最佳扩增条件下获得了清晰、稳定的目的条带,测序后获得长度为628 bp的核苷酸序列,通过GenBank的BLAST比对验证,确定为ITS序列,其中包括完整的ITS1序列和5. 8S r DNA序列以及ITS2的部分序列.     

茶树TRAP反应体系的建立及正交设计优化

TRAP标记技术因操作简单、重复性好、效率高等特点得到广泛应用,但该技术在茶树中的研究报道较少,且茶树TRAP-PCR体系优化尚未见报道.笔者采用正交设计的方法,对茶树TRAP-PCR反应中Mg2+、Taq酶、dNTP、固定引物、随机引物5个因素进行了优化研究,建立了茶树TRAP-PCR最佳反应体系.该20μL反应体系含有2μL 10×PCR Buffer (Mg2+ free),50 ng模板DNA,1.75 mmo/L Mg2+,0.50 U Taq酶,0.20 mmol/L dNTP,0.20 mmol/L随机引物和0.20 mmol/L固定引物.根据优化结果,利用最佳反应体系,选用16个茶树品种对TRAP标记多态性进行了初步研究.     

Fenton试剂处理猪场养殖废水的实验研究

采用Fenton高级氧化技术对猪场养殖废水进行了氧化处理,探讨了反应时间、pH值、温度、H2O2和FeSO4的投加量等因素对猪场养殖废水CODCr去除率的影响,确定了最佳的处理条件.试验结果表明,当[H2O2]=40 mmol/L,[ Fe2+]=4mmol/L,pH= 3.5,30℃条件下,反应40 min后,猪场养殖废水的CODcr的去除率达到最大值,为87.2%.     

白鲢RAPD的扩增条件及重复性的研究

当PCR反应体系中Mg2 +浓度为 2 5mmol/L、dNTPs浓度为 2 0 0 μmol/L、引物浓度为0 2 μmol/L、TaqDNA聚合酶为 1 5U、DNA模板为 2 5ng(反应总体积 2 5μl)时 ,可得到比较稳定的RAPD谱带 分别从白鲢 (Hypophthalmichtysmolitrix)血液、肌肉、肝脏、生殖腺等组织提取模板DNA ,其RAPD结果是一致的     

麦冬药材中6种麦冬皂苷的质量分数测定

建立HPLC法同时测定麦冬药材中penogenin-3-O-α-L-吡喃鼠李糖(1-2)-β-D-葡萄糖苷、去木糖-14-hydro sprengerinin C、麦冬皂苷Ra、penogenin-3-O-α-L-吡喃鼠李糖(1-2)-β-吡喃木糖(1-4)-β-D-葡萄糖苷、14-hydro sprengerinin C和慈溪麦冬皂苷A 6种麦冬皂苷的质量分数。色谱条件为lunna NH2色谱柱(4. 6 mm×150 mm,5μm),流动相乙腈-水(90∶10),流速1. 0m L/min,检测波长208 nm,柱温为室温。该条件下上述6种麦冬皂苷线性范围分别为0. 96～9. 60μg/m L,0. 92～9. 20μg/m L,0. 97～9. 70μg/m L,0. 94～9. 40μg/m L,1. 04～10. 40μg/m L,0. 92～9. 20μg/m L。在相应线性范围内线性相关系数均大于0. 999 1;方法回收率为98. 59%～101. 77%,RSD为1. 15%～1. 98%。所建方法可用于麦冬药材及相关制剂中麦冬皂苷的测定。     

应用PCR-RFLP技术检测二甲基精氨酸二甲胺水解酶2基因-449G/C多态性的实验研究

目的确定聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(Polymerase chain reaction-restricted fragment length polymorphism,PCR-RFLP)技术检测二甲基精氨酸二甲胺水解酶2(dimethyl arginine dimethylamine hydrolase 2,DDAH2)基因-449G/C的最适实验条件。方法对影响DDAH2基因PCR反应的主要因素进行研究。结果最适变性温度为95℃,最适退火温度为58℃,最适引物浓度为0.25μmol/L,最适2X Power Taq PCR Master Mix浓度为12.5μl,酶切体系为15.5μl体系中加5.0μl产物用5U的限制性内切酶Sma I消化。结论应用PCR-RFLP技术建立的DDAH2基因-449G/C位点多态位点检测方法简便、经济、快速。     

太湖新银鱼线粒体Cytb基因PCR扩增条件的优化

为建立适宜太湖新银鱼（NeosalanxtaihuensisChen）线粒体DNA细胞色素b（Cytb）基因PCR的反应体系和扩增程序，利用正交设计LI6（4^5）表，对反应体系的模板DNA、dNTPs、Primers、TaqDNA聚合酶的浓度和退火温度进行五因素四水平优化筛选和扩增程序的优化，确立了最优反应体系和扩增程序。在设定的PCR扩增条件中dNTPs浓度对扩增结果的影响最大，这极显著水平；引物浓度、退火温度对扩增结果的影响显著；TaqDNA聚合酶的浓度对扩增结果的影响最小，不显著。25pL的反应体系中，在退火温度为50℃、引物浓度为0．5μmol／L、Taq酶浓度为2．5U／μL、模板浓度为5ng／μL、dNTPs浓度为2．5mmol／L的条件下，太湖新银鱼线粒体Cytb基因扩增效果为最佳，电泳条带清晰、规则。     

几种化学因子对水稻抗白叶枯病诱导作用比较

比较了水杨酸 (SA) ,对氨基苯酚 (p -AP)、硝酸镍、百草枯 (PQ)、氧化铜和铜试剂对水稻幼苗抗白叶枯病的诱导抗病作用、它们的最佳诱导浓度和最佳诱导时期 .它们的最佳诱导浓度分别为 0 .0 5mmol/L、0 .5mmol/L、2 .2mmol/L、0 .1 5mg/L、0 .3mmol/L和 0 .5mmol/L .除SA和PQ的最佳诱导期分别为处理后第 2天和第 4天外 ,其余因子均在处理后第 3天 .在最佳浓度下 ,SA、p -AP、硝酸镍、PQ、氯化铜和铜试剂的相对诱导效果 (局部抗性 )分别为 1 9.7%、3 9.5%、69.6%、4 6.1 %、1 2 .3 %和 1 8.9% .硝酸镍、PQ和P -AP均有明显的系统诱导抗病作用 .三种因子均在处理后第 4天表现出最大的系统诱导抗病效果 ,相对诱导效果分别为 4 2 .9%、3 5.5%和 2 7.6% .并且 ,在处理后第 8天这种诱导作用也较明显 .     

侧柏叶改性类芬顿法降解甲基橙的实验研究

采用侧柏叶提取液与硫酸亚铁溶液制备改性类芬顿反应催化剂,并利用该催化剂催化降解甲基橙溶液.考察了溶液pH值、催化剂浓度、反应温度、甲基橙初始浓度、H2O2加入量以及反应时间对甲基橙溶液降解效果的影响.结果表明:60mL、150mg/L甲基橙溶液,pH在3~10之间,催化剂用量为32.5mg,0.1mmol/L H2O2加入量为5mL,温度为55℃,反应时间40min,甲基橙的降解率都在99%以上.而且催化剂经8次使用,其催化效果仍然较好.通过催化剂的紫外及红外表征,探讨了催化剂降解甲基橙的机理.     

铂族金属及钴、镍高效液相色谱分离分析

本文报道以新试剂2—(6—甲基-2苯并噻唑偶氮)-5—二乙氨基酚作柱前衍生试剂,以甲醇/水=82/18(v/v),含20mmol/L pH5.0醋酸盐缓冲溶液,12mmol/L水扬酸,5mmol/L TBA·Br作流动相.柱温35℃,流速1.0mL/min,检测波长575nm,反相高效液相色谱定量分离和测定了Os(Ⅳ)、Rh(Ⅲ)、Ru(Ⅲ)、Pd(Ⅱ)、Pt(Ⅱ)、Co(Ⅱ)和Ni(Ⅱ)等7个元素.当S/N=3时,各金属离子的检出限分别为(ng):2.79,0.31,8.20,1.14,9.45,0.27,0.040.方法应用于合成样的分析,标准回收率在95.0—104.0%之间.     

功能化聚氯乙烯树脂对Cu~(2+)的吸附性能

以聚氯乙烯为原料,依次与二乙烯三胺、二硫化碳和氯乙酸反应,合成了含氮、氧、硫配位原子的功能化聚氯乙烯树脂,探讨了该树脂在不同的吸附时间、Cu2 浓度、pH值、温度等条件下对Cu2 的吸附行为.结果表明,树脂对Cu2 具有较快的动力学吸附速率;在30℃,pH值为5.7、Cu2 的初始浓度为16.03 mmol/L时,该树脂对Cu2 的吸附量为0.78 mmol/g.吸附过程符合Freundlich吸附等温式,吸附的活化能为34.83 kJ/mol.用0.2 mol/L的HNO3溶液作为洗脱剂洗脱吸附Cu2 后的树脂,洗脱率可达96.5%.     

电渗透用于强化海藻糖载入红细胞的实验研究

海藻糖是一种有效的冻干保护剂,实验采用电渗透的方法强化海藻糖载入红细胞,在不同电压、脉宽、频率和细胞外海藻糖浓度的条件下对红细胞进行电渗透.实验结果表明,当电压300 V、脉宽1 ms、频率4 次/min、细胞外海藻糖浓度800 mmol/L时,细胞内海藻糖浓度达到(63.68±2.14)mmol/L.电渗透后红细胞形态正常,细胞膜的渗透脆性略有降低,电渗透致溶血率为17%,ATP酶活性与新鲜红细胞无显著差异.     

4-氨基吡啶树脂吸附镨的研究

研究了 4 -氨基吡啶树脂在HAc -NaAc体系中对镨的吸附及解吸的行为 ,结果表明在pH =2 .63时 ,树脂对镨的吸附最好 ,表观吸附速率常数k2 98=9.0 5× 10 -4S-1,其静态饱和吸附容量为 14 5 .5 2mg/gresin ,用 0 .1mol/L、0 .5mol/L、1mol/L、2mol/L、3mol/L、4mol/L的HCl作解吸剂 ,均能达到满意的效果     

去甲肾上腺素在正常及去肾上腺大鼠海马调节机体细胞免疫功能中的作用

用噻唑蓝 (MTT)比色分析法检测了在正常及去肾上腺大鼠双侧海马内微量注射去甲肾上腺素 (Noradrenline,NA)对刀蛋白 (ConA)刺激的脾淋巴细胞增加增殖反应的影响 结果 :(1 )在正常大鼠 ,NA(4μl,6 0× 1 0 -3 mol/L)、β1 受体激动剂Dobutamine(Dob,4μl,6 0× 1 0 -3 mol/L)和 β2 受体激动剂Metaproternol(Met,4μl,8 0× 1 0 -3 mol/L)均可抑制ConA刺激的脾淋巴细胞增殖反应 其中NA的作用最强 ,Met次之 ,Dob的作用最弱 ;α及 β受体阻断剂酚妥拉明 (Phen ,2 μl,2 0× 1 0 -3 mol/L)和心得安 (Prop,2 μl,2 0mol/L)均可部分阻断NA的免疫抑制作用 ,且Prop的作用更强 (2 )在去肾上腺组 ,NA的免疫抑制作用不明显 提示 :海马内NA对机体的细胞免疫功能具有明显的抑制作用 ,此作用是由α及β受体共同介导 ,其中 ,β受体的作用大于α受体 ,β2 受体的作用大于 β1 受体 此外 ,保持肾上腺结构和功能完整在NA调节机体细胞免疫功能作用中具有重大意义     

Al3+,Cr3+及Cd2+对日本三角涡虫摄食和运动行为的影响

以涡虫完全解体为死亡标准,在室温(26±1℃)下研究了Al3+,Cr3+及Cd2+分别对日本三角涡虫(Duge-sia japonica)的急性毒性,并运用图像分析技术对不同实验条件下三角涡虫的摄食和运动行为进行了定量分析.结果表明:在急性毒性实验处理96 h后,在cAl3+≥0.75 mmo/L,cCr3+≥0.2 mmol/L,cCd2+≥0.006 mmol/L时,涡虫全部死亡,且致死时间与药品浓度呈正相关;在cAl3+=0.15～0.65 mmol/L,cCr3+=0.05～0.15 mmol/L,cCd2+=0.002～0.005 mmol/L处理下均未有涡虫致死现象,但对涡虫的摄食和运动行为均有一定影响;随Al3+浓度的增高和处理时间的延长,实验组涡虫的活动范围和摄食率都降低;较低浓度的Cr3+对涡虫的运动和摄食行为具有促进作用,而较高浓度的Cr3+则有抑制作用;较低浓度的Cd2+对涡虫的运动和摄食率的影响不大,而较高浓度Cd2+实验组涡虫的爬行速度和摄食率均下降.     

催化动力学光度法测定S~(2-)的研究

依据 S2 - 能催化碱性品红褪色的指示反应 ,建立了测定微量 S2 - 的催化动力学分析法 .在 p H9.2 0的硼砂缓冲介质中 ,室温 ( 1 0℃ )下 ,本法线性测定范围为 0 .0 3— 2 .0 0 mg/L,检测下限为 0 .0 1 6μg/m L ,除 SO2 - 3外 ,其余离子不影响测定 .SO2 - 3的干扰可加入甲醛除去 .用本法测定了水样和模拟样品中 S2 -的含量 ,结果令人满意 .     

固体酸SnCl4·5H2O/C催化合成乙酸异戊酯

研究以固体酸SnCl4 ·5H2 O/C催化合成乙酸异戊酯 ,确定了酯化优化条件。实验结果表明 ,异戊醇用量为 0 .16mol,醇酸摩尔比为 1∶1.3情况下 ,催化剂用量为反应物质量的 2 .0 %～ 2 .5 %,带水剂苯 13ml,反应时间 12 0min ,反应温度为 10 2～ 116℃ ,酯化率可达 97.2 2 %。     

复方黑木耳汁食疗降血脂的效果观察

目的观察复方黑木耳汁食疗降低血脂的临床效果。方法选取我科68例高脂血症的患者,将干黑木耳约30g浸泡后+生姜3片+红枣5粒(去核)+水约1000ml,用豆浆机榨成汁连续食用3个月,比较食疗前后患者血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量。结果患者食疗三个月后TC,TG和LDL-C的含量由治疗前的6. 99±0. 39mmol/L,2. 87±0. 17mmol/L和3. 02±0. 22mmol/L分别下降到5. 18±0. 27mmol/L,1. 74±0. 10mmol/L和1. 47±0. 14mmol/L;而HDL-C含量则由食疗前的1. 58±0. 12mmol/L上升到3. 22±0. 08mmol/L,食疗前后比较差异有统计学意义(P 0. 05)。结论食用复方黑木耳汁可以降低患者血脂水平,值得借鉴与推广。     

气相色谱质谱法测定化妆品中三种香豆素类物质的含量

建立了测定三种香豆素类物质——香豆素,6-甲基香豆素,7-甲氧基香豆素——在化妆品中含量的气相色谱质谱法。采用甲醇超声提取,气相色谱法分离测定。色谱柱为HP-5柱,流动相为高纯氮气,流速为1.5ml/min,分流比为10∶1,气化室温度为240℃,程序升温,初温100℃,保留1min,以5℃/min的速率升至120℃,继续以20℃/min的速率升至250℃,保留1min。总分析时长12.5min。检测器温度为280℃。结果为三种被测物在1～50μg/mL范围内均与对应的峰面积呈良好线性关系(r>0.9999)。在添加浓度为1.1,2.0,5.0μg/mL时,回收率在90.0%～102.8%之间,精密度RSD<2.7,最低检出限为香豆素0.3μg/mL(S/N=3.0),6-甲基香豆素0.3μg/mL(S/N=3.2),7-甲氧基香豆素0.5μg/mL(S/N=5.0)。最后使用质谱进行验证。该法简便、快速、准确,可用于化妆品中的此三种物质含量的检测。