miR-432在神经胶质瘤中的表达及作用

目的探讨microRNA-432(miR-432)在神经胶质瘤患者中的表达及临床意义。方法采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)实验检测神经胶质瘤患者癌症组织和非胶质瘤患者脑组织中miR-432的表达水平,并检测神经胶质瘤患者和非胶质瘤患者血清中miR-432的表达情况;应用Lipo2000试剂将miR-432类似物(miR-432mimic)、miR-432抑制剂(miR-432inhibitor)和其各自阴性对照(mimic-NC或inhibitor-NC)转染进胶质瘤细胞系U87细胞中,qRT-PCR实验检测转染后细胞中miR-432的表达水平,CCK-8实验检测细胞活力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果 miR-432在神经胶质瘤组织中表达显著低于正常脑组织(P=0. 0019),且其在神经胶质瘤患者血清中的表达显著低于非神经胶质瘤患者(P=0. 0228)。胶质瘤细胞系U87细胞转染miR-432mimic后,miR-432的表达显著升高,而转染miR-432inhibitor后miR-432的表达显著降低,差异均具有统计学意义(P=0. 0018和0. 0161);与mimic-NC相比,miR-432mimic显著抑制U87细胞活力和迁移能力;而与inhibitor-NC相比,miR-432inhibitor显著提高U87细胞活力和迁移能力。结论 miR-432具有抑制胶质瘤细胞的活力和迁移能力的作用,有望成为胶质瘤的潜在治疗靶点。     

miR-188在心肌梗死患者中的表达及临床意义

目的探讨microRNA-188(miR-188)在急性心肌梗死患者中的表达及其临床意义。方法采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)实验检测心肌梗死患者心脏组织和对照组患者心脏组织中miR-188的表达情况,并检测两组患者血清样本中miR-188的表达;应用转染试剂X-treme将miR-188类似物、miR-188抑制剂和其阴性对照(negative control,NC)分别转染进心肌细胞中,qRT-PCR实验检测miR-188转染效率,MTT实验检测细胞增殖情况,台盼蓝染色检测细胞存活率。结果 miR-188在心肌梗死患者心脏组织中表达显著低于对照组患者中的表达(P=0.0109),且其在心肌梗死患者血清样本中的表达显著低于对照组患者中的表达(P=0.0065)。在转染miR-188类似物的心肌细胞中,miR-188的表达显著升高,在转染miR-188抑制剂的心肌细胞中,miR-188的表达显著降低,差异均具有统计学意义(P=0.0193和0.0062);MTT结果显示,miR-188类似物显著提高心肌细胞增殖能力,miR-188抑制剂显著降低心肌细胞增殖能力;台盼蓝结果显示,miR-188类似物显著升高心肌细胞存活率,而miR-188抑制剂降低心肌细胞存活率。结论 miR-188能够提高心肌细胞的增殖能力和存活率,有望成为心肌梗死的生物标记物和潜在治疗靶点。     

miR-144在骨质疏松患者护理过程中的变化和对骨质疏松的作用研究

目的研究miR-144在骨质疏松患者护理过程中的表达变化情况及其对骨质疏松的作用。方法采用实时定量聚合酶链式反应(real time qPCR)方法检测miR-144在骨质疏松患者中的表达及其在接受护理干预过程中的表达变化;采用CCK-8实验检测miR-144对人骨髓间充质干细胞(BMSCs)活性的影响;采用碱性磷酸酶(ALP)染色检测miR-144对人BMSCs成骨分化能力的影响。结果与正常对照组相比,骨质疏松患者血清中miR-144的表达显著降低;骨质疏松患者接受护理干预过程中,患者血清中miR-144的表达逐渐增高;CCK-8实验结果表明,miR-144 mimic显著提高人BMSCs活性,而miR-144 inhibitor显著抑制人BMSCs活性;ALP染色结果表明,miR-144 mimic显著促进人BMSCs向成骨方向分化,而miR-144 inhibitor显著抑制人BMSCs向成骨方向分化。结论 miR-144在骨质疏松患者中表达降低,护理干预后miR-144的表达显著升高,且其能够调控人BMSCs活性和成骨分化能力。     

miR-188在脆性骨折患者中的表达及其对骨折愈合的调控作用

目的探讨miR-188在脆性骨折患者骨组织和血液中的表达,并研究miR-188对人成骨细胞及骨折愈合的影响。方法应用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测脆性骨折患者骨组织和非脆性骨折患者中miR-188的表达水平,并检测脆性骨折患者接受治疗过程中血液miR-188的表达变化。应用CCK-8和MTT实验检测miR-188对人成骨细胞活性和增殖能力的影响。应用TUNEL染色检测miR-188对成骨细胞凋亡的影响,并用qRT-PCR探究miR-188对成骨细胞凋亡相关基因的影响。应用qRT-PCR检测miR-188对成骨细胞骨形成相关基因I型胶原蛋白(collagen-1)、碱性磷酸酶(ALP)和骨形成蛋白4(BMP4)表达的影响。结果 qRT-PCR实验结果证明,miR-188在脆性骨折患者的骨组织和血液中的表达显著升高,差异具有统计学意义(P 0. 05)。此外,在脆性骨折患者接受治疗过程中,miR-188的表达逐渐降低。CCK-8实验表明,miR-188能够显著降低成骨细胞活性。MTT实验结果显示,过表达miR-188能够抑制成骨细胞增殖。TUNEL染色显示,转染miR-188能够促进成骨细胞发生凋亡。此外,qRT-PCR结果显示,miR-188能够增加促凋亡基因Bax的表达,而降低抑凋亡基因Bcl2的表达。qRT-PCR结果表明,miR-188能够减少成骨细胞骨形成相关基因collagen-1,ALP和BMP4的表达。结论 miR-188在脆性骨折患者的骨组织和血液中的表达显著升高,且miR-188能够调控成骨细胞活性、增殖、凋亡及骨形成,进而参与骨折愈合过程。     

重症肌无力患者血清miRNAs的表达及临床意义

目的探讨重症肌无力患者血清miRNAs的表达情况,为重症肌无力的早期诊断及治疗提供依据。方法分析健康对照组(n=60)和重症肌无力组(n=60)的呼吸肌耐力、肺活量、最大通气量、肌无力水平评分等四项指标,进行统计分析;此外,收集健康对照组和重症肌无力组血清样本,进行实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR),检测血清中miRNAs的表达情况;收集重症肌无力患者治疗前后血清样本,进行qRT-PCR反应,检测血清中miRNAs的表达是否发生变化。结果与健康志愿者相比,miR-107、miR-25、miR-20b在重症肌无力患者血清中表达降低,而miR-451、miR-29b和miR-27a表达升高;与治疗前相比,miR-107、miR-25、miR-20b在重症肌无力患者治疗后血清中表达呈升高趋势,miR-451和miR-27a无差异,miR-29b表达显著降低。结论 miR-107和miR-29b在重症肌无力患者中呈差异性表达,可能参与重症肌无力的发生和发展,可作为早期诊断及治疗重症肌无力的新靶点。     

综合护理干预对老年妇科肿瘤患者癌症相关基因表达的影响

目的探讨综合护理干预对老年妇科肿瘤(乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌)患者癌症相关基因表达的影响,进一步探讨综合护理干预对老年妇科肿瘤的影响。方法选取2018年2月至2019年2月在我院接受治疗的180例妇科肿瘤患者为研究对象,其中乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌患者各60例,各种癌症患者分为对照组和试验组,各30例。妇科肿瘤患者入院后进行手术切除,对照组患者接受常规护理,试验组患者接受综合护理干预。收集患者血清,应用实时定量聚合酶链式反应检测患者血清癌症相关基因表达变化。结果与正常对照组乳腺癌患者(n=30)相比,试验组乳腺癌患者(n=30)血清中lncRNA PRNCR1、lncRNA LINC01787基因表达显著降低,而lncRNA XOXC-AS3、lncRNA LINC01614、miR-375、miR-210基因无变化, miR-3922和miR-101基因的表达显著上升;与正常对照组宫颈癌患者(n=30)相比,试验组宫颈癌患者(n=30)血清中lncRNA FTH1P3、lncRNA SNHG16等基因表达显著降低,而lncRNA GHET1、miR-574无变化,lncRNA WT1-AS、miR-145、miR-877、miR-140的表达显著上升;与正常对照组卵巢癌患者(n=30)相比,试验组卵巢癌患者(n=30)血清中lncRNA CACS15基因表达显著降低,lncRNA LINC00152、lncRNA KCNQ10T1、miR-124、miR-205无变化,lncRNA PCAT-1、miR-137、miR-6076的表达显著上升。结论综合护理干预对老年妇科肿瘤(乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌)患者癌症相关基因的表达具有一定的影响,能够调控癌症相关基因的表达。     

miR-149-3p对糖尿病大鼠心肌细胞胰岛素抵抗的作用

目的探讨miR-149-3p对糖尿病大鼠心肌细胞胰岛素抵抗的干预作用及其机制。方法应用高脂饲料联合链脲佐菌素方法构建糖尿病大鼠模型,提取心肌组织总RNA,检测miR-149-3p的表达情况。培养H9c2心肌细胞,体外应用高糖高脂诱导H9c2细胞胰岛素抵抗模型,检测miR-149-3p的表达情况。应用miRNA转染技术将miR-149-3p转染进H9c2心肌细胞,并检测葡萄糖摄取。应用生物信息学实验、real time qPCR实验和western blot实验确定fat mass and obesity associated(FTO)是否为miR-149-3p的靶点。结果糖尿病模型组大鼠腹腔注射糖耐量实验中2h血糖显著高于对照组,且其血浆TC、TG和FFA水平均显著高于对照组。此外,糖尿病模型组大鼠心肌中miR-149-3p的表达显著降低;过表达miR-149-3p能够抑制胰岛素刺激的葡萄糖摄取,敲减miR-149-3p以能够促进胰岛素刺激的葡萄糖摄取。生物信息学实验、real time qPCR实验和western blot实验证明FTO是miR-149-3p的直接靶点。结论 miR-149-3p通过下调FTO抑制糖尿病大鼠心肌细胞胰岛素抵抗。     

甲型H1N1流行性感冒患者中miRNAs的表达研究

目的探讨甲型H1N1流行性感冒患者中miRNAs表达及其临床意义。方法 2016年3月至2018年6月期间于我院就诊的168例患者作为本实验的研究对象,分为甲型H1N1流感患者组(n=86)和对照组(n=82),收集两组患者血清,检测miRNAs的表达变化。结果与对照组相比,miR-196a-5p、miR-21和miR-221在甲型H1N1流感患者血清中表达升高,miR-203、miR-502表达降低,miR-101、miR-221、miR-24、miR-27a、miR-326无差异性表达。此外,与治疗前相比,miR-196a-5p、miR-203、miR-221、miR-502在甲型H1N1流感患者治疗后没有显著差异,miR-21在甲型H1N1流感患者治疗后显著降低。结论 miR-21在甲型H1N1流行性感冒患者血清中表达升高,可以作为预测、诊断、治疗甲型H1N1流行性感冒的重要指标。     

miR-590调控老年骨质疏松患者BMSCs成骨分化的研究

目的探讨miR-590在老年骨质疏松患者中的表达及其对BMSCs成骨分化的作用。方法收集老年骨质疏松患者(n=35)和骨质正常人(n=35)血清样本,检测miR-590的表达情况;培养老年骨质疏松患者骨髓间充质干细胞(BMSCs)及正常BMSCs,成骨诱导21天后进行碱性磷酸酶(ALP)染色、茜素红(ARS)和实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)实验,检测成骨分化能力;并向老年骨质疏松患者BMSCs转染miR-590 mimic、mimic-NC、miR-590 inhibitor及inhibitor-NC,成骨诱导21天后检测成骨分化能力。结果 qRT-PCR实验表明,miR-590在老年骨质疏松患者血清和BMSCs中表达显著升高。此外,ALP染色、ARS和qRT-PCR实验表明,过表达miR-590抑制老年骨质疏松患者BMSCs的向成骨方向分化,而敲减miR-590促进老年骨质疏松患者BMSCs的向成骨方向分化。结论 miR-590抑制老年骨质疏松患者BMSCs成骨分化,敲减miR-590可能成为临床治疗老年骨质疏松的新方法。     

胃癌患者外周血中CK19mRNA的表达及其临床意义

目的探讨靶基因CK19mRNA在胃癌患者外周血中的表达,以及与胃癌生物学行为的相关性。方法采用RT—PCR方法检测66例胃癌患者外周血的CK19mRNA,10例正常健康志愿者外周血为阴性对照;10例胃癌肿瘤组织为阳性对照。结果66例胃癌患者外周血中CK19mRNA性率为59．09％（39／66）,并与胃癌临床分期和有无淋巴结转移呈显著相关（P〈0．05）。而健康成人外周血则呈现阴性。结论应用RT-PCR方法检测胃癌患者外周血中的CK19mRNA具有较高敏感性和特异性。有望成为判断胃癌患者转移和复发以及疗效评估的一种肿瘤标志物。     

UFCI基因在乳腺细胞系中的表达分析

泛素结合酶UFC1是一个新鉴定的类似泛素结合酶E2的基因。目前,对UFC1的功能研究报道还比较少,有待更进一步的研究和探讨。采用半定量RT-PCR技术分别检测一系列的乳腺细胞系MCF7、HBL100、MDA-MB231和MDA-MB-453中UFC1基因的转录水平,结果显示,在正常的HBL100乳腺细胞系中的表达最高,而在乳腺癌细胞系MCF7,MDA-MB231,MDA-MB-453中的表达明显降低。UFC1在乳腺细胞系中的差异表达的结果为将UFC1作为新的靶分子引入乳腺癌的临床预防和治疗提供实验依据。     

CEA mRNA在胃癌患者外周血中的表达及临床意义

目的探讨靶基因CEA mRNA在胃癌患者外周血中的表达以及与胃癌生物学行为的相关性。方法采用RT—PCR方法检测66例胃癌患者外周血的CEA mRNA,10例正常健康志愿者外周血为阴性对照;10例胃癌肿瘤组织为阳性对照。结果66例胃癌患者外周血中CEA mRNA阳性率为65．15％（43／66）,并与胃癌临床分期和浸润深度呈显著相关（P〈0．05）。而健康成人外周血则呈现阴性。结论应用RT—PCR方法检测胃癌患者外周血中的CEA mRNA具有较高敏感性和特异性,并有望成为判断胃癌患者转移和复发以及疗效评估的一种肿瘤标志物。     

血清miR-34a水平与阿尔茨海默病及认知功能障碍的相关性

目的探讨阿尔茨海默病(AD)患者血清miR-34a水平的意义及其与认知功能障碍的相关性。方法收集2018年10月至2020年1月于南阳市第二人民医院就诊的老年AD患者和轻度认知功能障碍(MCI)患者各60例,纳入同期体检健康老年人60例为对照组。采用定量反转录酶-聚合酶连锁反应(qRT-PCR)检测三组受试者血清miR-34a水平;检测其他实验室指标LDL-C、HDL-C、Hcy、TG和TC的水平,采用Pearson相关系数、Logistic回归和ROC曲线分析miR-34a和AD患者认知障碍的关系。结果 AD组和MCI组患者血清中miR-34a显著高于对照组,且AD组高于MCI组(P0.05)。miR-34a与Hcy、TG和TC水平成正相关,与MMSE和MoCA评分成负相关。miR-34a是认知功能障碍及MCI进展为AD的独立影响因素,其诊断认知功能障碍及鉴别MCI和AD的曲线下面积分别为0.967和0.765。结论 miR-34a在AD患者血清中高表达,且与认知功能成负相关,对于认知功能障碍和AD具有一定的诊断价值。     

TNF-α-NF-кB对成骨细胞分化过程中BMP-2-Smadl信号通路的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)-NF-кB信号通路通过骨形态发生蛋白-2(BMP-2)-Smadl信号通路对成骨细胞分化影响的分子机制.方法 应用BMP-2体外诱导鼠肌源细胞 C2C12 向成骨细胞分化模型,瞬时转染表达其下游效应物,通过实时RT-PCR 以及蛋白电泳和免疫印迹技术(Western-blot),检测其下游效应物Smadl与核转录因子(NF-кB)及其抑制剂(IкBα),研究 TNF-α和NF-кB对BMP-2-Smadl信号通路的影响.结果 TNF-α能够将Smadl(BMP-2的下游效应物)的活性从对照组的2.04倍降低至0.63倍.NF-кB过表达则将Smadl活性从2.04倍降低至0.39倍.蛋白质印迹实验可见,TNF-α能明显降低BMP2活化的C2C12细胞中磷酸化Smadl的含量,而RT-PCR研究发现其并不能改变Smadl的mRNA丰度.结论 TNF-α抑制成骨细胞分化其分子机制是通过TNF-α激活NF-кB而降低BMP-2信号通路中磷酸化的Smadl,进而抑制BMP-2-Smadl通路活性而发挥作用.提示持续性的炎症反应能直接抑制成骨细胞的分化和骨形成.     

结直肠癌组织与血清血管内皮生长因子相关性研究

目的探讨结直肠癌组织与血清血管内皮生长因子(VEGF)的相关性。为结直肠癌的预后判断和治疗后随访寻求一种简便、易测、可靠、无创的检测方法。方法分别应用免疫组化法和ELISA法,测定35例结直肠癌患者的组织和血清VEGF,并与53例非结直肠癌患者作比较。结果①结直肠癌组血清VEGF水平(813.14±511.87)μg/L明显高于对照组(241.40±164.08)μg/L,差异显著(P<0.001);②血清VEGF水平与性别、年龄、肿瘤部位及组织类型无明显相关性(P>0.05);③有淋巴结、肝脏及远处转移者血清和组织VEGF水平比无转移者显著增高(P<0.05:P<0.001);④血清与组织VEGF之间密切相关(P=0.000)。结论①血清和组织VEGF测定能够反映结直肠癌的发展和预后;②结直肠癌患者组织与血清VEGF水平密切相关,血清VEGF可替代组织VEGF的检测。     

血清人附睾分泌蛋白4表达水平诊断子宫内膜癌的价值初探

目的 探讨血清人附睾分泌蛋白4(human epididymis secretory protein 4,HE4)表达水平鉴别诊断子宫肿瘤的临床价值.方法 采用酶联免疫法(EIA)检测子宫内膜癌患者(n=23)、子宫良性肿瘤患者(n=47)和健康对照者(n=30)的血清HE4表达水平,并采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评价血清HE4表达水平诊断子宫内膜癌的效能.结果 子宫内膜癌组、子宫良性肿瘤组与健康对照组比较,血清HE4表达水平均有显著差异(P<0.05).ROC曲线分析结果表明,血清HE4表达水平在144.8pmol/L时诊断子宫内膜癌的Youden指数最大为0.657,曲线下面积为0.827,其敏感度和特异度分别为73.1%和83.4%.结论 血清HFA表达水平是诊断子宫内膜癌的有效工具,其敏感度和特异度相对较高,可有助干临床早期诊断子宫肿瘤.     

Smad4在胃癌组织中表达的研究

目的检测Smad4在胃癌组织及其相应正常胃粘膜组织中的表达分布,并分析其与胃癌患者临床病理学特征之间的关系。方法选取39例经外科手术切除及组织病理学证实的胃癌患者癌组织标本及相应正常胃粘膜组织,应用冰冻切片免疫组化染色方法,在蛋白水平进行检测。结果正常胃粘膜细胞浆中都有Smad4阳性表达,39例胃癌患者癌组织中22例有Smad4阳性表达(56.4%),两者之间差异有显著性(P&lt;0.05)。Smad4蛋白的表达与癌细胞的分化程度及浸润程度相关,分化程度越低、浸润程度越重,其阳性表达率越低(P&lt;0.05);而Smad4蛋白的表达与年龄、性别、TNM分期、淋巴结转移、远处转移无相关性。结论Smad4的表达下降与胃癌的发生有关,而且与癌细胞的分化程度及浸润程度密切相关,Smad4可能作为胃癌诊断和预后的分子标志。     

bFGF和MRP-1在胃癌中的表达及意义

目的研究胃癌(GC)组织中碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)和多重耐药蛋白1(MRP-1)的表达规律及其相互关系。方法用免疫组织化学染色(SP法)检测慢性浅表性胃炎(CSG)25例、胃黏膜肠上皮化生(IM)45例、异型增生(Dys)50例和GC 65例组织标本中b FGF、MRP-1阳性表达情况。RT-PCR技术检测MRP-1mRNA的表达情况。均数的比较采用t检验,两样本率的比较用χ2检验,两因素的相关分析用直线相关分析。结果在CSG→IM→Dys→GC的过程中,b FGF,MRP-1的表达呈逐步递增趋势,b FGF,MRP-1的阳性表达率GC组与Dys组、IM组,差异均具有统计学意义(P0.05)。MRP-1与MRP-1mRNA表达强度呈正相关(r=0.598,P0.05)。结论胃癌形成过程中,b FGF,MRP-1,MRP-1mRNA表达逐渐上调。     

化疗对乳腺癌患者CD44V6表达的影响及意义

目的:本文旨在研究乳腺癌患者血、癌组织、淋巴结中CD44V6的表达及化疗对CD44V6表达的影响和意义。方法:用免疫组化方法检测癌组织CD44V6的表达,用流式细胞术检测血和淋巴结中CD44V6的表达。结果:乳腺癌组织中的淋巴细胞(t=4.71,P<0.05)和阳性淋巴结(t=5.11,P<0.05)的CD44V6的表达与对照相比显著增高,而患者外周血淋巴细胞CD44V6的表达也有所升高,但无统计学意义(t=0.98,P>0.05)。乳腺癌细胞的CD44V6的表达强阳性,且阳性率100%,而良性乳腺组织呈阴性表达。化疗后癌细胞的CD44V6的表达仍是100%,血和淋巴结中淋巴细胞的CD44V6的表达有所下降,但无意义,只有癌组织中淋巴细胞的CD44V6的表达水平显著下降(t=4.13,P<0.05)。结论:乳腺癌具有淋巴转移的巨大潜能,CD44V6的表达与预后密切相关,而且与淋巴转移的关系更为密切。化疗通过对肿瘤的杀伤可抑制CD44V6的表达的增高,在一定程度上抑制转移。提示:CD44V6的可作为监测乳腺癌患者淋巴转移的指标之一。     

尼古丁对PDLFs细胞乙酰胆碱受体(nAChR)表达的影响

目的探讨尼古丁诱导的牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament fibroblasts,PDLFs)凋亡的信号转导机制。方法本研究用1μg/ml,10μg/ml和100μg/ml不同浓度的尼古丁干预PDLFs细胞24h后,采用RT-PCR方法检测尼古丁乙酰胆碱受体(nAChR)的表达变化。结果不同浓度的尼古丁试验组(1μg/ml、10μg/ml和100μg/ml)作用于PDLFs细胞24h后,nAChR的mRNA表达水平显著增加,与正常对照组比较差异具有统计学意义(P0.05),且随着尼古丁剂量的增加,nAChR的基因表达水平随之增高(r=0.948,F=254.231,P=0.000)。结论尼古丁致PDLFs细胞凋亡可能是通过nAChR起作用的。