金属硫蛋白的功能及应用前景

阐述了金属硫蛋白的结构特点及理化性质,介绍了金属硫蛋白的功能和应用前景.     

急性镉负荷对雄性大鼠生殖激素的影响

探讨急性镉负荷对大鼠血浆T、FSH、LH变化的影响及其机制．取雄性成年sD大鼠，随机分为3组，分别按0mg、0．5mg、1．0mg镉／蛞体重腹腔注射染毒，连续7天．在注射后第4和7天，宰杀大鼠，采集血样．结果在整个实验期里，两实验组血浆T水平下降，均低于或显著低于对照组；三组间的FSH和LH水平无明显差异．     

硫氧还蛋白相互作用蛋白在糖尿病及其并发症中的作用

糖尿病是一种以血糖持续升高为特征的常见代谢性疾病,其发病的关键原因之一是胰岛β细胞功能衰竭。硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)可以结合并抑制葡萄糖摄入后胰岛产生的硫氧还蛋白,导致胰岛β细胞抗氧化能力降低。大量研究表明,TXNIP水平升高可使胰岛β细胞凋亡,反之,TXNIP水平下降则可显著促进胰岛β细胞存活。靶向TXNIP不仅可以改善胰岛β细胞胰岛素的分泌和敏感性,还能降低长期罹患糖尿病而导致的多种并发症。因此,调节TXNIP水平可作为降低糖尿病及其并发症发生的新型治疗策略。     

骨肽对成骨细胞骨形成蛋白2表达影响的实验研究

目的 研究骨肽对成骨细胞骨形成蛋白2（BMP2）表达影响.方法 体外分离培养成骨细胞,0.02mg/ml,0.08mg/ml,0.32mg/ml三个剂量浓度骨肽分别作用24小时,应用流式细胞术检测成骨细胞增殖情况.以上三个剂量浓度骨肽再分别作用成骨细胞24小时、48小时、72小时,收集细胞上清利用酶联免疫法（ELISA法）检测BMP2表达含量.结果 三个尽剂量浓度作用24小时均可引起成骨细胞增殖,并存在剂量依赖性.骨肽各浓度组在24小时、48小时均可引起BMP2表达增高,其中0.08mg/ml剂量组作用48小时效果最为显著.结论 骨肽可促进成骨细胞BMP2蛋白表达,从而发挥促进成骨细胞增殖和分化的作用.     

植物的冷调节蛋白及诱导其基因表达的条件

人们发现植物在低温锻炼过程中产生的特异性蛋白--冷调节蛋白(cold regulated proteins,CORPs)与植物的抗寒力密切相关.冷调节基因是一些诱导型表达基因,它们除受低温诱导外,还能接受诸如外源ABA、水分胁迫等外界条件的诱导.在综述这些诱导冷调节基因表达条件的基础上,提出了在低温寒害来临之前有目的地诱导大田植物冷调节基因表达,合成冷调节蛋白,可提高植物抗寒力的新思路.这在农业生产以及园艺植物南树北移工作中具有重要的现实意义.     

烟草硫氧还蛋白基因NtTRX-hl的克隆和功能分析

从烟草中克隆了硫氧还蛋白基因NtTRX-hl并推导出其氨基酸序列,系统进化关系分析表明,NtTRX-hl与小麦、大麦、拟南芥等多种植物的TRX蛋白有很高的同源性.构建高效表达载体,诱导表达重组菌得到分子大小为22.26 kD的融合蛋白,与推测的分子量一致.用胰岛素和二硫苏糖醇作底物进行酶活性测定表明,Nt-TRX-hl具有活性.采用生物信息学的方法和工具分析了NtTRX-hl蛋白的生化参数和亚细胞定位,预测了该蛋白的高级结构.     

莱菔硫烷对结肠癌细胞的生长抑制及诱导作用

目的探讨植物化学保护剂莱菔硫烷(SFN)对结肠癌细胞的生长抑制及诱导作用的抗肿瘤机制.方法①体外培养人结肠腺癌细胞株Caco-2,观察10-100μmol/L的SFN对Caco-2增殖动力学的影响,MTT法检测细胞生长抑制率.②采用RT-PCR及Western blot检测SFN诱导Caco-2细胞葡萄糖醛酸转移酶UGTlA及其同工型的表达,高效液相色谱法测定UGTlA的催化活性.③扫描电镜观察SFN诱导细胞凋亡的形态变化;流式细胞仪检测凋亡率.结果①30～100μmol/L的SFN对细胞增殖均有抑制作用,呈剂量和时间依赖效应.②10～35μmol/L SFN处理组UGT1AmRNA相对系数与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).UGT1AmRNA表达量与SFN的剂量呈正相关(r=0.79,P＜0.01);25μmol/L SFN处理组与对照组之间UGT1A1(P=0.006)、UGT1A8(P=0.017)、UGT1A10(P=0.008)表达的差异具有统计学意义;10～30μmol/L SFN作用于Caco-2细胞24h,随着浓度的增加,UGT1A蛋白带的灰度值比值增加.与对照组相比,P＜0.05;在SFN处理组对杂环胺N-OH-PhIP的葡萄糖醛酸结合能力明显增高.③扫描电镜观察,25μmol/L处理组无明显改变,50μmol/L、75μmol/L、100μmol/L处理组发生明显的细胞形态结构变化,典型者出现凋亡小体;流式细胞仪检测结果示随着SFN浓度增高,凋亡率增加,与对照组相比差异有显著性意义(P＜0.01).结论①植物化学保护剂莱菔硫烷对结肠腺癌细胞株Caco-2的生长增殖具有抑制作用,呈剂量租时间依赖效应;②小剂量的莱菔硫烷能诱导UGT1A及其同工型UGT1A1、1A8、1A10mRNA表达,UGT1A蛋白表达增加,对杂环胺的葡萄糖醛酸结合能力增强;③大剂量的莱菔硫烷诱导结肠腺癌细胞凋亡.     

硫氧还蛋白及其L79K变体酶切后片段自身重新结合为同源二聚体的稳定性和动力学研究

本文选择硫氧还蛋白 (TRX)和硫氧还蛋白变体 (TRXL79K)分别酶切后得到的两个片段 :N片段 (1 -73 )和 C片段 (74-1 0 8)作为研究对象 .在硫氧还蛋白变体中用赖氨酸代替原来 79位的亮氨酸 ,对两组 N片段和 C片段在自然状态下重新结合的稳定性和动力学进行对比 ,得到以下结论 :1 .TRX中处于 β折叠状态的 β4区域 (P76,T77,L78,L79,L80 ,F81和 K82 ) 〔3〕中氨基酸的改变对 N片段和 C片段重新聚合成非共价键聚合物的动力学过程有一定的影响 .2 .79位氨基酸的改变对N片段和 C片段形成非共价键同原二聚体的稳定性有较大的影响 .     

铝、镉、铜互作对不同耐铝大麦基因型糖及蛋白含量的影响

所有胁迫处理均导致耐性品种根系和叶片的蛋白质含量增加,三重复合胁迫时最高.低pH和Cu,Cd,Al复合胁迫使敏感基因型根系蛋白质含量增加而叶片蛋白质含量减少,其它胁迫结果恰好相反.Cu与Cd以及Cu,Cd,Al复合胁迫使耐性品种根系和叶片可溶性糖含量增加,单独Al胁迫使耐性品种根系和叶片可溶性糖含量减少,但对敏感基因型的影响因器官而异.Cu与Cd复合胁迫及单独Al胁迫均使耐性品种根系还原糖含量减少而使叶片还原糖含量增加,但对敏感基因型的影响存在差异;Cu,Cd,Al复合胁迫使敏感基因型根系、叶片和耐性品种根系还原糖含量增加,却使耐性品种叶片还原糖含量减少.各种胁迫处理均使耐性品种根系和叶片总糖含量下降,但敏感品种器官和处理间结果存在显著差异.     

铝、镉、铜互作对不同耐铝大麦基因型糖及蛋白含量的影响

所有胁迫处理均导致耐性品种根系和叶片的蛋白质含量增加,三重复合胁迫时最高.低pH和Cu,Cd,Al复合胁迫使敏感基因型根系蛋白质含量增加而叶片蛋白质含量减少,其它胁迫结果恰好相反.Cu与Cd以及Cu,Cd,Al复合胁迫使耐性品种根系和叶片可溶性糖含量增加,单独Al胁迫使耐性品种根系和叶片可溶性糖含量减少,但对敏感基因型的影响因器官而异.Cu与Cd复合胁迫及单独Al胁迫均使耐性品种根系还原糖含量减少而使叶片还原糖含量增加,但对敏感基因型的影响存在差异;Cu,Cd,Al复合胁迫使敏感基因型根系、叶片和耐性品种根系还原糖含量增加,却使耐性品种叶片还原糖含量减少.各种胁迫处理均使耐性品种根系和叶片总糖含量下降,但敏感品种器官和处理间结果存在显著差异.     

补肾益髓中药对糖皮质激素性骨质疏松症大鼠骨组织Runx2的mRNA及蛋白表达的影响

目的 观察糖皮质激素性骨质疏松症(GIOP)大鼠模型骨组织Runt相关基因2(Runx2)mRNA及蛋白表达,探讨GIOP的发病机制以及补肾益髓中药的疗效及其调控作用.方法 采用后肢肌注地塞米松(2.5 mg/kg,每周2次,连续9w)的方法复制GIOP大鼠模型,按体重分层随机分为正常组、模型空白组、补肾益髓中药组、补中益气颗粒组、血府逐瘀胶囊组、骨疏康颗粒阳性对照组.灌胃给药9w.应用XR-26型双能X线骨密度仪测定股骨骨密度,以评价动物模型的成立及药物疗效.实时定量RT-PCR(Real-Time Quantitative RT-PCR)检测骨组织Runx2 mRNA表达,Western blot检测骨组织Runx2蛋白表达.结果 (1)股骨骨密度:与正常组比较,模型空白组明显降低(P<0.01);与模型空白组比较,补肾益髓中药组明显升高(P<0.01),骨疏康颗粒阳性对照组明显升高(P<0.05),补中益气颗粒组和血府逐瘀胶囊组虽有升高趋势,但无统计学意义(P>0.05).(2)骨组织Runx2 mRNA及蛋白表达:与正常组比较,模型空白组明显降低(P<0.01);与模型空白组比较,补肾益髓中药组明显上调(P<0.01),骨疏康颗粒阳性对照组也有明显上调(P<0.05),补中益气颗粒组和血府逐瘀胶囊组虽有所升高,但无统计学意义(P>0.05).结论 (1)肌注地塞米松可以成功复制GIOP大鼠模型,(2)骨组织Runx2 mRNA及蛋白表达水平降低可能是GIOP的发病机制之一,(3)应用补肾益髓中药具有明显防治效果,疗效优于健脾中药和活血中药,其作用机理与上调骨组织Runx2 mRNA及蛋白表达密切相关.     

基底拉伸应变对小鼠成骨细胞Runx2表达的影响

摘要：目的 研究基底拉伸应变对小鼠成骨细胞系MC3T3一E1细胞Runx2表达的影响。方法 实验随机分为0με、1000με、1500με、2000με、2500με、5000με六组,采用卫生装备研究所自行研制的细胞基底应变加载装置对细胞进行加载,Western blot检测不同应变对成骨细胞Runx2蛋白表达的影响。此外采用Real?time PCR检测0με、2500με、5000με三种强度应变对成骨细胞Runx2 mRNA表达的影响。结果 Western blot结果显示：1500με、2000με、2500με组与0με组相比Runx2蛋白表达显著增强(P<0．01);5000με组与0με组相比Runx2蛋白表达显著降低(P<0．01);Real—timePCR结果显示：2500με组与0με组相比Runx2 mRNA表达显著降低(P<0．01);5000με组与0με组相比Runx2 mRNA表达显著增加(P<0．01)。结论 ①生理强度的拉伸应变可显著增加MC3T3一El细胞Runx2蛋白的表达,并且呈剂量依赖性,超生理强度5000με显著降低Runx2蛋白表达。②同样强度的拉伸应变刺激下,Runx2基因表达与蛋白表达并不一致。     

基底拉伸应变对小鼠成骨细胞Runx2表达的影响

目的 研究基底拉伸应变对小鼠成骨细胞系MC3T3-E1细胞Runx2表达的影响.方法 实验随机分为0 με、1000 με、1500 με、2000 με、2500 με、5000 με六组,采用卫生装备研究所自行研制的细胞基底应变加载装置对细胞进行加载,Western blot检测不同应变对成骨细胞Runx2蛋白表达的影响.此外采用Real-time PCR检测0 με、2500 με、5000 με三种强度应变对成骨细胞Runx2 mRNA表达的影响.结果 Western blot结果显示:1500 με、2000 με、2500 με组与0 με组相比Runx2蛋白表达显著增强(P＜0.01);5000με组与0 με组相比Runx2蛋白表达显著降低(P＜0.01);Real-time PCR结果显示:2500 με组与0 με组相比Runx2 mRNA表达显著降低(P＜0.01);5000 με组与0 με组相比Runx2 mRNA表达显著增加(P＜0.01).结论 ①生理强度的拉伸应变可显著增加MC3T3-E1细胞Runx2蛋白的表达,并且呈剂量依赖性,超生理强度5000 με显著降低Runx2蛋白表达.②同样强度的拉伸应变刺激下,Runx2基因表达与蛋白表达并不一致.     

牛膝提取物对去卵巢大鼠骨密度、骨转换及Ⅰ型胶原蛋白表达的影响

目的 观察牛膝醇提取物对去卵巢骨质疏松大鼠骨密度(BMD)、骨转换和骨组织Ⅰ型胶原蛋白表达的影响.方法 背侧切口切除大鼠双侧卵巢,分为去卵巢组,牛膝提取物高、中、低剂量组和雌激素对照组,另设一假手术组,分别给予基础饲料和不同剂量治疗药物,12w后使用双能X线骨密度仪测量股骨、胫骨和腰椎的骨密度;采用酶联免疫吸附法对骨转换指标血清骨碱性磷酸酶(BAP)、血清骨钙素(BGP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)、尿Ⅰ型胶原氨基末端肽(NTx)/肌酐比值(NTx/Cr)进行测定,并利用Western免疫印迹法检测骨组织Ⅰ型胶原蛋白表达的变化.结果 大鼠去势后骨密度和Ⅰ型胶原蛋白的表达显著下降(P<0.01),骨转换指标有较大变化.牛膝醇提取物高、中剂量组可使去势大鼠骨密度和Ⅰ型胶原蛋白的表达显著提高,改善骨转换指标的变化,且存在一定的剂量-效应关系.结论 牛膝醇提取物能提高去势大鼠的骨密度和Ⅰ型胶原蛋白的表达.     

间歇低氧对大鼠血管内皮细胞生长因子表达的影响

目的观察慢性间歇低氧对大鼠血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达的影响。方法72只雄性Wistar大鼠随机均分为间歇低氧组（IH组）、实验对照组（SC组）和空白对照组（UC组）。IH组大鼠循环给予充入氮气和压缩空气（每一次循环60秒,使舱内最低氧浓度达4%～6%,然后恢复至21%,8h/d）;向SC组舱内循环充入压缩空气,UC组不予任何干预。应用免疫组化法（ELASA）检测各组大鼠分别在3,6,9周末血清VEGF的表达水平。结果IH组大鼠3、6、9周VEGF表达均增加,并且随间歇低氧时间的延长而VEGF水平逐渐升高,从第3周[（193.16±102.13）pg/ml]开始高于SC组[（154.08±89.79）pg/ml]和UC组[（118.13±64.26）pg/ml]水平（P〈0.05,P〈0.01）,第9周末IH组[（256.15±113.58）pg/ml]显著高于SC组[（154.36±90.32）pg/ml]（P〈0.01）,两组均明显高于UC组（P〈0.05）,IH组大鼠VEGF水平与间歇低氧时间呈正相关（P〈0.05）。结论慢性间歇低氧可以诱导大鼠VEGF表达增强,血清VEGF表达增强与血管内皮功能受损有关,提示VEGF对慢性间歇低氧有内皮保护作用。     

雷奈酸锶对糖皮质激素诱导骨质疏松大鼠骨形态计量学的研究

目的 观察雷奈酸锶对糖皮质激素诱导骨质疏松大鼠骨形态计量学的影响.方法 24只3.5月龄SPF级雄性SD大鼠适应性喂养1W后,随机等分为3组:Nrm组:正常对照组;Met组:皮下注射甲强龙(Met)5 ms/(kg·d),每周5次;SrR组:在Met组基础上给予雷奈酸锶900 ms/(kg·d)灌胃.实验期9w.第5腰椎(L<,5>)和右侧股骨用于骨密度测定,右侧胫骨行骨形态计量学分析.结果 Met组L<,5>和股骨BMD显著低于Nrm组;SrR组L<,5>和股骨BMD显著高于Met组.Met组BV/TV,Tb.Th,Tb.N,%Ct.Ar显著低于Nrm组,Tb.sp,%Ma.Ar,ES/BS显著高于Nrm组;SrR组BV/TV,Tb.Th,Tb.N,%Ct.Ar显著高于Met组;Tb.Sp,ES/BS显著低于Met组.结论 给予大鼠SrR 900 mg/(kg·d)灌胃,在提高激素诱导骨质疏松大鼠的骨密度,促进骨形成,降低骨吸收,延缓骨量丢失方面有积极作用;对继发性骨质疏松的预防和治疗有一定前景.     

大气中痕量镉、铅的测定

本文提出在0．05mol／LKCI－0．02mol／LHNO3－0．0025mol／L（CH2）5N4－3×10（－5）mol／LHgCl2体系中，采用微分脉冲阳极溶出伏安技术测定大气中痕量镉、铅，该方法灵敏度高，检测下限达5．0×10（-11）ug／ml（即0．05ppb），样品回收率均在95－105％范围内，十次平行测定结果的相对标准偏差不大于5％。     

亚砷酸对肺癌细胞凋亡及LRP基因表达影响的体外研究

目的观察亚砷酸(As2O3)对人肺腺癌的诱导凋亡作用及对LRP基因表达的影响及可能机制.方法选用人肺腺癌A549细胞系,应用体外细胞培养法,流式细胞术检测As2O3对人肺腺癌的诱导凋亡作用;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测LRPmRNA的表达.结果不同浓度的As2O3均可诱导A549细胞凋亡.1.0μmol/L、2.0μmol/L的As2O3可下调LRPmRNA的表达.结论As2O3诱导肿瘤细胞凋亡作用主要是通过下调LRPmRNA表达有密切关系.     

子宫内膜癌EphB4mRNA和EphrinB2 mRNA的表达及临床意义

目的研究EphB4mRNA和Ephrin B2mRNA在子宫内膜癌中的表达及其意义。方法应用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）分别检测经免疫组化证实有不同级别的EphB4和Ephrin B2蛋白表达的35例子宫内膜癌冰冻标本中的mRNA水平。比较各自与其蛋白表达的相关性及与临床病理因素的关系。结果子宫内膜癌组织中EphB4mRNA和Ephrin B2mRNA的表达均与组织学分级、淋巴结转移及临床分期均显著相关（P〈0.05）.EphB4和Ephrin B2蛋白表达和mRNA表达水平不完全一致。结论 EphB4、Ephrin B与子宫内膜癌的发生发展有关。其联合检测有助于客观评估子宫内膜癌的生物学行为,可用来指导临床用药和预测预后。