数字PCR技术在水产病原菌检测中的应用

数字PCR是一种新兴的基因检测方法,是继常规PCR、实时荧光定量PCR之后的第三代PCR基因检测技术.在传统的水产病原菌的分子检测方法中,普通PCR检测结果需要通过琼脂糖凝胶电泳检测、耗时长,并且不能对检测病原进行定量;实时荧光定量PCR技术则需要依赖内参基因进行相对定量分析,难以满足水产病害快速精准检测的需要.数字PCR技术实现了对检测样本的绝对定量分析,具有前所未有的准确度和重现性,为快速准确地进行水产病原菌的检测提供了崭新的技术平台,具有广阔的发展和应用前景.本文主要介绍了数字PCR的产生、原理和分类,并深入探讨了数字PCR技术在水生生物致病菌和水产品食源性致病菌检测中的应用.     

聚合酶链反应(PCR)技术与基因扩增分析仪器(PCR仪)

较为全面地论述了聚合酶链反应(PCR)技术与基因扩增分析仪器(PCR仪)。较为详细地阐述了PCR基本原理、PCR结果的检测与分析、实时定量PCR技术、影响PCR效果的因素、PCR技术的应用、PCR仪器的现状及其发展方向。     

Smart Cycler——世界唯一可同时进行多种PCR反应程序的定量PCR仪

与美国安全局多年合作的Cepheid公司(详见本文后附的公司背景介绍)开发的Smart CyclerDNA扩增仪,是一个以快速,通用,高效闻名的实时荧光定量PCR系统。1998年基于LINL技术的Smart cycler就赢得了美国R&D Top 100称号,LINL技术使得研究人员在30分钟之内即可完成定量DNA分析。     

非典可望快速诊断

卫生部医药生物工程技术研究中心教授何蕴韶 4月 17日向外界表示 :卫生部医药生物工程技术研究中心与广州市疾病控制中心科技人员合作 ,已成功建立荧光定量PCR快速检测冠状病毒的新技术 ,运用这项新技术 ,从采取病人样品到报告结果可在 2小时内完成 ,能够实现对病毒基因的准确定量检测 ,可反映疾病的发生、发展过程。非典可望快速诊断     

钠氢交换体1 mRNA在心衰患者心肌组织中的表达

目的观察钠氢交换体1（sodium—hydrogen exchanger1，NHE1）在心力衰竭患者心肌组织中的表达，探讨NHE1在心衰发生和发展中的作用。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）检测35例心力衰竭患者心肌组织NHE1mRNA的表达水平。结果实时荧光定量PCR（FQ—PCR）检测心功能Ⅰ级组、心功能Ⅱ级组、心功能Ⅲ级组心力衰竭患者心肌组织NHE1mRNA的△Ct值分别为6．29±0．66、5．01±0．60、4．40±0．74。与心功能Ⅰ级组比较，在心功能Ⅱ级组、心功能Ⅲ级组患者心肌组织中NHE1mRNA表达明显高于心功能Ⅰ级组（P〈0．01），同时与心功能Ⅱ级组比较，心功能Ⅲ级组患者心肌组织中NHE1mRNA水平增高，且差异有统计学意义（P〈0．05）。结论心衰患者心肌组织中存在NHE1mRNA的高水平表达，提示NHE1可能在心衰的发生和发展过程中起着重要作用。     

多通道DNA测序仪的新型设计

目前大多数商品化的DNA测序仪的信号检测系统是基于CCD或PMT。基于CCD的系统需要对CCD进行制冷,其造价相对较高且灵敏度相对较低;基于PMT的系统使用机械扫描来实现多通道检测,其工作稳定性相对较低且工作的机械噪音大。本文提出了新型的DNA测序仪,它采用PMT共焦荧光系统,通过f-θ透镜和光学扫描来实现多通道并行检测。在此新系统中采用标准双链DNA样品:pBR322/HaeIII(使用TO染料)进行了毛细管电泳实验,测得系统的检测限可达:1.1841×10-11mol/L。新型DNA测序仪的工作机械噪声相比基于机械扫描的系统要低得多,且工作稳定性和灵敏度也很高。此系统可应用于基于激光诱导荧光的毛细管阵列和多通道微芯片的电泳检测。     

脉动燃烧干燥实时测试分析系统

介绍了自行开发的脉动燃烧干燥实时测试分析系统。采用半无发管和导管引出被测介质与压力传感器连接的方法,解决了高温及谐振波影响测量精度的问题。以Ｃ＋＋作为软件开发工具,编制了数据采集系统软件,实现了多通道实时采集、波形显示、状态检测、频谱分析、数据存贮和打印等功能。     

Taq酶对PCR定量检测结果的影响

聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction,PCR)是一种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的新方法。该方法一改传统分子克隆技术的模式,不通过活细胞,操作简便,在数小时内可使几个拷贝的模板序列甚至一个DNA分子扩增107～108倍,大大提高了DNA的得率。在PCR反应过程中,Taq酶对PCR定量检测结果起到很大的影响。本文重点探讨Taq酶对PCR定量检测结果的影响。     

食品中“双氧水”有了快速检测仪——长春吉大·小天鹅仪器有限公司

在2004年12月9日～10日召开的全国(博鳌)农残药残检测技术论坛上,吉林大学化学学院分析化学系博士生导师、长春吉大·小天鹅仪器有限公司总工程师于爱民教授所作的“农产品有毒有害残留物快速检测新技术与仪器的进展”专题报告,获得与会代表的一致好评。于爱民教授在报告中明确宣布了近期由他主持完成的在食品和保健品中对过氧化氢(双氧水)能进行快速定量检测的方法与仪器,引起许多专家和代表的强烈反响,中国仪器仪表协会、农仪协会副理事长蒋士强、海南省无公害农产品协会会长谢发成、海南省无公害农产品协会常务副会长、中国热带农业科学…     

荧光偏振检测系统上位机软件设计

采用Visual Basic 6.0设计了荧光偏振检测系统的上位机软件。首先介绍了荧光偏振检测系统的总体结构,然后对上位机软件进行了设计,包括串口通信模块、检测操作模块、仪器参数设置模块和系统测试模块的设计。在实际测试中,通过上位机软件对检测样品进行荧光偏振检测,可以看出所设计的上位机软件系统能够正确完成各项功能,对检测数据的分析计算结果表明,荧光偏振检测系统检测灵敏度高,重复性好,软件能够实现所要求的各项功能,可广泛应用于生物大分子的检测。     

基于危险理论的网络风险评估模型

为有效评估网络信息系统的网络风险,提出了一种新的基于危险理论的风险评估模型(DTREM)。在给出网络活动中自体、非自体、免疫细胞的定义,建立由记忆检测器、成熟检测器、未成熟检测器集合构成的入侵检测子模型后,进一步给出了基于危险理论的网络风险定量计算子模型。利用该模型,可以实时定量地计算出主机和网络当前所面临攻击的各类攻击和总体网络风险强度,理论分析和实验结果均表明,该模型为实时网络安全风险评估提供了一种有效的新途径。     

高灵敏和高特异性生物嗅觉传感系统研究

利用微电极植入技术,提出了一种新型的生物嗅觉传感系统,将多通道植入式微电极包埋于大鼠嗅球中,提取出嗅球神经元的气味响应信息。通过分析神经元响应活动从而进行气味检测与区分,发现该系统能够长期稳定地用于气味检测,且灵敏度达到10?10 mol/L。在单分子气味或自然气味检测中,该系统都具有很高的特异性。因此,该系统在实际气味检测(如肺癌呼出气体标志物检测、食品新鲜度检测、爆炸物搜索等)领域具有广泛的应用前景。     

传染性皮下及造血组织坏死病毒对南美白对虾仔虾的人工感染研究

传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)是危害对虾养殖产业的重要病原之一,其分布广泛,危害性大,感染性强,给对虾养殖造成巨大的经济损失.IHHNV对宿主的致病性与宿主的年龄、大小密切相关.本文通过人工投喂的方式对健康南美白对虾仔虾进行室内感染实验,运用普通PCR、荧光定量PCR检测IHHNV感染情况及病毒载量,结果表...     

宽带信号采样的关键技术研究

提出了一种实现宽带信号实时采样的技术原理和应用设计方法;论述了混合滤波器组技术对传统并行交替采样结构进行非均匀采样的校准处理,多通道采样的时钟与触发同步机制,以及分相存储实现大容量采样数据存储等研究内容;给出了系统的可行性设计。     

mRuby2在原核细胞中的表达及纯化

采用PCR技术扩增mRuby2,将其插入原核表达载体p ET30a(+)中,用p ET30a(+)-mRuby2转化BL21(DE3)并诱导重组蛋白表达,用荧光显微镜及SDS-PAGE观察、检测目标蛋白的表达情况,以Ni亲和层析技术纯化重组蛋白。结果表明:构建的重组表达菌株经IPTG诱导后,发酵液颜色随诱导时间延长逐渐转为橙红,离心后的沉淀菌体为深粉红色,在荧光显微镜下,菌体发出明亮的红色荧光。SDS-PAGE检测发现,IPTG诱导5 h,重组蛋白表达量达到峰值。采用Ni螯合亲和层析技术从发酵菌体中分离出纯度大于80%的重组蛋白。由此可见:采用DNA重组技术能在原核系统中成功表达mRuby2编码的荧光蛋白,该重组蛋白亮度高、可视性好,能直观呈现实验结果,便于观察相关实验现象、理解并掌握实验原理,非常适合于生化、分子生物学实验教学。     

NXE-1型锥板式粘度计故障检修分析示例

NXE-1型锥板式粘度计是精密检测仪器,在测量液体粘度方面,有极高的精确度及可靠性,故被广泛应用在临床医学、检验诊断、教学和科研上,同时也广泛应用于石油、化学、食品等领域.该仪器在使用中主机传动系统和采样检测电路较易发生故障.本文介绍了该仪器故障原因、测试及修复方法.     

PCR-ELISA技术及应用

PCR-ELISA技术是PCR技术、探针技术和ELISA技术三者结合的一项技术,是PCR技术的衍生和发展。近几年,PCR-ELISA技术已被应用在检测领域,并取得一定的进展。本文综合相关文献,对该技术工作原理、分类、应用作一介绍。     

基于FPGA的高速图像预处理系统设计

介绍了一种用单片FPGA实现的实时、多任务、高速图像处理系统。该系统承担着提高信噪比、压缩数据量、Stokes参数观测和仪器及观测模式控制等任务。针对一个星载系统,采用了核心逻辑片内冗余、设计了相应的冗余管理线路等可靠性设计技术,采用了放置片内测试和校验模块等可测性设计技术,使系统工作时钟达40 MHz,图像处理速率达100 Mbps。     

分布式SAR系统中运动目标检测定位技术

建立了分布式卫星SAR系统动目标检测定位和测速模型,提出了一种基于改进的ESPRIT算法的多通道动目标检测定位和测速方法。该方法用DPCA技术检测动目标,再利用改进的ESPRIT算法确定动目标数并定位,提取运动参数。理论和仿真结果表明该方法能正确检测动目标并确定运动参数,与传统FFT方法比较,尤其对于成像后在一个方位分辨单元内的多个动目标情况,该方法具有明显优越性。     

激光共聚焦序列图像基于特征的分割方法

采用fluo-4标记的乳鼠心肌细胞钙离子实时激光扫描共聚焦光学切片呈现为点状分布的荧光图像,并且受到噪声的严重干扰,细胞荧光图像在分布上没有连续的边缘;而采用处理静态荧光图像的方法处理这种图像存在很大的困难。该文就心肌细胞Ca2+离子定量研究过程中遇到的问题,提出一种基于马尔可夫场和空间点模式特征聚类相似性测度的自适应图像分割算法。该算法能以统一的标准从不同深度的光学切片中分割出需要分析的细胞钙离子活动区域,对其他利用激光共聚焦技术做动态分析的研究有很好的参考价值。