D-柠檬烯对人胃癌MGC803细胞增殖和凋亡的影响

目的研究D-柠檬烯对人胃癌MGC803细胞生长抑制和凋亡的影响。方法噻唑蓝(MTT)法比色检测细胞生长情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率;激光共聚焦检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量和caspase- 3蛋白的表达。结果D-柠檬烯对人胃癌MGC803细胞生长抑制作用呈剂量依赖关系;流式细胞仪检测发现D-柠檬烯可引起MGC803细胞凋亡,且呈时间依赖性;激光共聚焦显微镜荧光检测发现D-柠檬烯处理的细胞内ROS明显升高(P<0.05),caspase-3蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论D-柠檬烯能够有效地抑制癌细胞的生长以及诱导凋亡。这种作用机制可能是使MGC803细胞内产生大量的活性氧。也可能与细胞内caspase-3基因的表达变化有关。     

血清饥饿法诱导人角质细胞HaCaT细胞周期同步化的研究

探讨血清饥饿法对人表皮细胞HacaT细胞周期的影响.采用无血清和低血清浓度的DMEM培养基饥饿HacCaT细胞,分别培养6h,12h,22h时,用倒置显微镜观察细胞形态,并且收集各组细胞,用流式细胞仪分析细胞周期各个时相细胞百分比.结果发现HaCaT细胞系在含0.2?S的DMEM培养基中培养12h,细胞仍然贴壁生长,并且可以使G0/G1期细胞百分率达到66.5%.因此,血清饥饿法可以应用于人表皮细胞HaCaT同步于G0/G1期,从而为后期药物筛选打下基础.     

COX-2抑制剂对PC-3细胞的放射增敏作用研究

目的应用选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398作用于胰腺癌细胞株PC-3,观察其放射增敏作用,并对其可能增敏机制进行初步探讨。方法体外培养胰腺癌细胞株PC-3;以流式细胞术(FCM)单抗标记技术检测PC-3细胞的COX-2表达水平;以MTT实验检测细胞增殖抑制情况及NS-398对细胞放射敏感性的影响;以FCM分析细胞周期变化,以RT-PCR分析细胞周期相关蛋白P21表达变化。结果 FCM显示PC-3细胞存在COX-2的异常高表达;MTT实验显示NS-398可显著增强PC-3细胞的放射敏感性;FCM显示NS-398联合放射组G0-G1期比率上调;RT-PCR显示NS-398联合放射组细胞内P21mRNA表达上调。结论选择性COX-2抑制剂NS-398可增强胰腺癌细胞PC-3的放射敏感性,其机制可能与上调P21mRNA表达,进而诱导细胞周期阻滞于G0-G1期相关。     

联合应用LY294002和表柔比星对骨肉瘤细胞株MG63的研究

目的探究使用表柔比星联合磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路抑制剂LY294002对体外培养骨肉瘤细胞MG63的影响。方法以不同浓度及组合的药物处理MG63细胞,利用CCK-8法检测细胞增殖状况;利用流式细胞术检测药物对MG63凋亡率;采用免疫蛋白印迹法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3等凋亡相关蛋白表达。结果 CCK-8检测结果显示,与对照组相比表柔比星(EPI)和LY294002对MG63的生长均有抑制作用,两者联合使用的抑制作用更加显著并呈现剂量依赖性。流式细胞术的结果表明LY294002(20μM)的凋亡率为(32. 1±3)%,EPI(10μM)的凋亡率为(21. 5±2)%,两者合用于细胞后可显著引起细胞凋亡,细胞凋亡率为(65. 2±5)%(P 0. 01)。免疫蛋白印记法结果显示随着两药联用的浓度增加,活化的凋亡蛋白Cleaved PARP,Cleavedcaspase-3表达显著增加(P 0. 01)。结论LY294002可以增强表柔比星对MG63细胞的生长抑制作用并且促进其凋亡,机制可能是通过半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶依赖性的细胞凋亡途径发挥作用。     

蜂毒注射液对前列腺癌细胞凋亡的影响研究

目的研究蜂毒注射液(FD)对前列腺癌细胞凋亡的影响及可能机制。方法实验设立空白对照组和蜂毒注射液不同浓度组,用MTT方法检测前列腺癌细胞活性,Annexin V/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡,同时用流式细胞术检测细胞内Ca2+浓度。结果与对照组比较,作用24小时、48小时、72小时后,FD8μg/ml,12μg/ml,16μg/ml,20μg/ml,24μg/ml组活性降低,8μg/ml作用24小时后细胞凋亡增多(P0.05),4μg/ml,8μg/ml作用24小时,细胞内Ca2+浓度增高。结论蜂毒注射液可以诱导前列腺细胞凋亡,其作用可能与细胞内Ca2+超载相关。     

流式细胞仪检测重组毕赤酵母发酵过程中的细胞活性

建立了流式细胞仪检测重组巴斯德毕赤酵母(P.p astoris)细胞活性的方法,并在高密度发酵过程中得到应用。使用碘化丙锭染色法测定细胞活性,发现甲醇诱导时酵母细胞活性开始下降,随着细胞密度的增加,由于细胞胁迫和甲醇的影响,细胞活性明显下降,活细胞率最大下降了14%。与此同时,细胞生长减缓,目的蛋白发生降解,表明细胞活性与发酵过程中细胞的生长和目的蛋白生成等参数密切相关。实验证明:流式细胞仪可作为检测毕赤酵母发酵过程中细胞活性参数的一个便捷精确的有力工具。     

骨肽对成骨细胞骨形成蛋白2表达影响的实验研究

目的 研究骨肽对成骨细胞骨形成蛋白2（BMP2）表达影响.方法 体外分离培养成骨细胞,0.02mg/ml,0.08mg/ml,0.32mg/ml三个剂量浓度骨肽分别作用24小时,应用流式细胞术检测成骨细胞增殖情况.以上三个剂量浓度骨肽再分别作用成骨细胞24小时、48小时、72小时,收集细胞上清利用酶联免疫法（ELISA法）检测BMP2表达含量.结果 三个尽剂量浓度作用24小时均可引起成骨细胞增殖,并存在剂量依赖性.骨肽各浓度组在24小时、48小时均可引起BMP2表达增高,其中0.08mg/ml剂量组作用48小时效果最为显著.结论 骨肽可促进成骨细胞BMP2蛋白表达,从而发挥促进成骨细胞增殖和分化的作用.     

盐酸贝那普利对缺氧复氧损伤培养乳鼠心肌细胞凋亡的干预作用

目的探讨盐酸贝那普利对缺氧复氧乳鼠心肌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法用原代培养的乳鼠心肌细胞建立缺氧复氧损伤模型,分为空白对照组（C组）、缺氧复氧损伤模型组（H/R组）、盐酸贝那普利组（B组）及缺氧复氧损伤＋盐酸贝那普利组（H/R＋B组）,流式细胞仪检测早期凋亡细胞及坏死细胞,相关软件分析。检测四组乳酸脱氢酶LDH活性、丙二醛MDA含量、超氧化物歧化酶SOD活力、肌酸激酶同功酶CKMB含量以及细胞凋亡率。结果H/R组LDH、MDA、SOD及心肌细胞凋亡率明显高于C组和B组;H/R＋B组LDH、MDA、SOD水平及心肌细胞凋亡率显著低于H/R组,以上差异均有统计学意义（P〈0.01）。结论离体培养的乳鼠心肌细胞建立的缺氧复氧损伤模型可诱导心肌细胞的凋亡。盐酸贝那普利可明显抑制这种凋亡的发生,其机制可能与其参与抗氧化、清除自由基作用有关。     

柠檬酸对CHO细胞生长和代谢的影响

研究了重组中国仓鼠卵巢细胞(CHO)批培养过程中柠檬酸对细胞生长和代谢的影响。结果表明:柠檬酸明显抑制了细胞的生长。与对照组相比,添加12 mm o l/L柠檬酸的处理组细胞的葡萄糖比消耗速率(QG lc)降低了37.5%,渗透压提高了10.0%,乳酸生成量与葡萄糖消耗量的比值增加了27.0%,氨生成量与谷氨酰胺消耗量的比值也增加了。在谷氨酰胺代谢过程中,更多的谷氨酰胺经谷草转氨酶途径生成α-酮戊二酸,参与能量代谢。柠檬酸促使细胞更多地被捕获在G 1期,阻碍细胞的DNA合成,抑制细胞增殖,并促进蛋白的表达。     

血管紧张素Ⅱ预处理提高骨髓间充质干细胞抗凋亡能力

目的:研究血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)预处理是否能提高骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的抗凋亡能力,探讨AngⅡ对MSCs预适应保护作用的可能机制?方法:用AngⅡ预处理大鼠MSCs细胞,采用H2O2或缺氧联合无血清(hypoxia and serum deprivation,Hypoxia/SD)的方法诱导细胞凋亡?用乳酸脱氢酶(lactate dehyarogenase,LDH)检测法?四唑盐比色法(MTT)和Hoechst 33342染色测定细胞活力和凋亡率;用Annexin V-FITC法定量检测细胞凋亡率;对MSCs进行罗丹明-123染色,用流式细胞术检测线粒体跨膜电位?结果:AngⅡ预处理MSCs能够明显减轻H2O2或Hypoxia/SD诱导的细胞损伤,显著提高细胞活力;逆转由Hypoxia/SD引起的线粒体跨膜电位的降低;ERK1/2阻断剂U0126和Akt阻断剂LY294002都能明显减弱AngⅡ对MSCs的预适应保护作用,增加细胞凋亡率?结论:AngⅡ对MSCs具有预适应保护作用,且主要通过Akt?ERK1/2途径发挥其抗凋亡能力?     

莱菔硫烷对结肠癌细胞的生长抑制及诱导作用

目的探讨植物化学保护剂莱菔硫烷(SFN)对结肠癌细胞的生长抑制及诱导作用的抗肿瘤机制.方法①体外培养人结肠腺癌细胞株Caco-2,观察10-100μmol/L的SFN对Caco-2增殖动力学的影响,MTT法检测细胞生长抑制率.②采用RT-PCR及Western blot检测SFN诱导Caco-2细胞葡萄糖醛酸转移酶UGTlA及其同工型的表达,高效液相色谱法测定UGTlA的催化活性.③扫描电镜观察SFN诱导细胞凋亡的形态变化;流式细胞仪检测凋亡率.结果①30～100μmol/L的SFN对细胞增殖均有抑制作用,呈剂量和时间依赖效应.②10～35μmol/L SFN处理组UGT1AmRNA相对系数与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).UGT1AmRNA表达量与SFN的剂量呈正相关(r=0.79,P＜0.01);25μmol/L SFN处理组与对照组之间UGT1A1(P=0.006)、UGT1A8(P=0.017)、UGT1A10(P=0.008)表达的差异具有统计学意义;10～30μmol/L SFN作用于Caco-2细胞24h,随着浓度的增加,UGT1A蛋白带的灰度值比值增加.与对照组相比,P＜0.05;在SFN处理组对杂环胺N-OH-PhIP的葡萄糖醛酸结合能力明显增高.③扫描电镜观察,25μmol/L处理组无明显改变,50μmol/L、75μmol/L、100μmol/L处理组发生明显的细胞形态结构变化,典型者出现凋亡小体;流式细胞仪检测结果示随着SFN浓度增高,凋亡率增加,与对照组相比差异有显著性意义(P＜0.01).结论①植物化学保护剂莱菔硫烷对结肠腺癌细胞株Caco-2的生长增殖具有抑制作用,呈剂量租时间依赖效应;②小剂量的莱菔硫烷能诱导UGT1A及其同工型UGT1A1、1A8、1A10mRNA表达,UGT1A蛋白表达增加,对杂环胺的葡萄糖醛酸结合能力增强;③大剂量的莱菔硫烷诱导结肠腺癌细胞凋亡.     

亚砷酸对肺癌细胞凋亡及LRP基因表达影响的体外研究

目的观察亚砷酸(As2O3)对人肺腺癌的诱导凋亡作用及对LRP基因表达的影响及可能机制.方法选用人肺腺癌A549细胞系,应用体外细胞培养法,流式细胞术检测As2O3对人肺腺癌的诱导凋亡作用;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测LRPmRNA的表达.结果不同浓度的As2O3均可诱导A549细胞凋亡.1.0μmol/L、2.0μmol/L的As2O3可下调LRPmRNA的表达.结论As2O3诱导肿瘤细胞凋亡作用主要是通过下调LRPmRNA表达有密切关系.     

凋亡通路蛋白表达对过氧化氢诱导PC12细胞凋亡的影响

目的探讨过氧化氢（H2O2）诱导PC12细胞凋亡的机制。方法 MTT测定细胞存活率,荧光染色观察细胞形态,透射电镜观察细胞的超微结构,流式细胞仪测定细胞凋亡率,Western blotting技术和流式细胞仪检测Bcl-2和Bax蛋白的表达,分光光度计测定Caspase-3释放率。结果 0.25 mM的H2O2可诱导PC12细胞凋亡,细胞的形态发生改变,细胞核受损,细胞内Bcl-2蛋白的表达降低、Bax蛋白的表达增加,Caspase-3被激活。结论 H2O2诱导了PC12细胞凋亡,其作用机制与细胞内Bcl-2、Bax蛋白的表达及Caspase-3活性密切相关。     

唑来膦酸与阿仑膦酸钠治疗老年骨质疏松症的临床对比

目的分析唑来膦酸与阿仑膦酸钠治疗老年骨质疏松症的临床疗效。方法选取2015年1月至2017年1月期间我院收治的老年骨质疏松症患者110例作为临床研究对象,采用随机数字表法将其分为试验组和对照组2组,各55例。对照组患者给予阿仑膦酸钠口服治疗,70mg/次,1次/周,试验组患者给予唑来膦酸治疗,静脉滴注5mg/次,1次/年,疗程为12个月。比较两组患者治疗前后腰椎正位L2-L4、股骨颈、Ward三角、大转子区骨密度改善情况以及骨特异性碱性磷酸酶(BALP)、抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)、Ⅰ型胶原羧基末端肽(CTx)、骨钙素等特异性骨代谢指标变化情况,同时采用视觉模拟评分法(VAS)比较两组患者治疗前后疼痛缓解及Oswestry功能障碍指数变化情况。结果经满疗程治疗后,两组患者腰椎正位L2-L4、股骨颈、Ward三角、大转子区骨密度较治疗前均明显升高(P 0. 05),且试验组患者上述各区骨密度明显高于对照组(P 0. 05),差异具有统计学意义。治疗12个月末,两组患者的血浆BALP、TRACP-5b、CTx以及骨钙素水平均明显降低(P 0. 05),试验组患者血浆BALP、TRACP-5b、CTx、骨钙素水平均明显低于同期对照组水平(P 0. 05),组间差异显著,具有统计学意义。对照组和试验组患者治疗后VAS评分和Oswestry功能障碍指数明显降低(P 0. 05),且试验组患者VAS评分Oswestry功能障碍指数降低幅度明显较同期对照组患者更为显著(P 0. 05),差异具有统计学意义。结论唑来膦酸治疗老年骨质疏松症疗效显著,优于常规阿仑膦酸钠治疗,能明显改善患者骨密度,同时降低外周血碱性磷酸酶水平,减轻患者疼痛症状,安全性好,值得临床推广使用。     

干扰素和异博定逆转乳腺癌细胞耐药作用的研究

目的研究α-干扰素和异博定对体外培养的乳腺癌细胞多药耐药的逆转作用。方法MTT法检测各实验组细胞存活率,计算IC50、耐药倍数和逆转倍数;流式细胞术定量检测细胞表面P170的表达。结果α-干扰素与异博定联合应用使乳腺癌细胞耐阿霉素(ADM)的IC50降低为0.32μmol/L,优于单用异博定(1.23μmol/L)、α-干扰素(2.29μmol/L),逆转倍数由7.25和13.49提高到51.88;且P-170表达均有大幅度下降。结论单独用α-干扰素、异博定均可达到部分逆转乳腺癌耐药细胞(MCF-7/ADR)对ADM的耐药的作用,二者联合使用效果更强。     

阿司匹林对人结肠癌耐药细胞株Caco-2增殖和凋亡的影响

目的研究阿司匹林对人结肠癌耐药细胞株Caco-2增殖和凋亡的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定阿司匹林对Caco-2增殖抑制的影响,流式细胞术（FCM）法检测细胞凋亡指数,电镜等技术。结果不同浓度的阿司匹林对人结肠癌耐药细胞株Caco-2有较强的抑制作用,且呈剂量及时间依赖性。结论阿司匹林能够显著抑制人结肠癌耐药细胞株Caco-2增殖及诱导凋亡。     

新城疫病毒诱导体外培养喉癌细胞凋亡

目的 为探讨新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)对体外培养喉癌细胞的杀伤作用及其与喉癌细胞凋亡的关系.方法 本实验利用新城疫病毒弱毒疫苗株La Sota接种于体外培养的喉癌细胞系(Hep-2),不同时间后,在光镜、电镜下对细胞形态、结构进行观察,并收集细胞采用流式细胞术对细胞凋亡情况进行了检测.结果 接毒后48小时,开始出现部分Hep-2细胞脱壁;60h后出现细胞溶解、聚集,部分死亡细胞悬浮于培养液中;电镜下可见细胞间大量堆积的病毒粒子,细胞核出现染色质浓缩、集边、核膜扩张、胞浆浓缩等变化;还可见完整细胞膜包围的凋亡小体出现.另外,在接毒后48h流式细胞仪的DNA直方图上,出现细胞凋亡峰,凋亡细胞百分数随着接毒时间的延长而增加.结论 新城疫病毒感染可大量杀伤体外培养的喉癌细胞,并可诱导其发生凋亡性坏死.     

谷氨酰胺限制对rCHO细胞生长和代谢的影响

考察了rCHO细胞(Ch inese ham ster ovary,中国仓鼠卵巢细胞)在批培养和谷氨酰胺限制流加培养过程中的生长、代谢特性。实验发现随着谷氨酰胺浓度的下降,谷氨酰胺的比消耗速率以及氨和丙氨酸的比生成速率显著下降。与批培养相比,在谷氨酰胺限制流加培养过程中,培养时间延长,活细胞密度增加,达到2.4&#215;106cells/mL;谷氨酰胺的代谢途径发生改变,代谢副产物生成明显减少,YAmm/G ln由1.04 mm o l/mm o l略微下降到0.92 mm o l/mm o l,YA la/G ln由0.35 mm o l/mm o l下降到0.08 mm o l/mm o l,YX/G ln由0.383&#215;109cells/mm o l增加至0.504&#215;109cells/mm o l,YAmm/X由2.59&#215;1-0 9mm o l/cell下降到1.85&#215;1-0 9mm o l/cell,表明谷氨酰胺代谢的能量利用率显著提高,也证明其参与细胞合成代谢的分率增加。     

IFN-γ诱导HaCaT细胞ICAM-1表达的条件优化

细胞间黏附分子-1(ICAM-1)是白细胞和角质细胞之间相互作用的必需因子,角质细胞中ICAM-1表达的上调与多种皮肤炎症相关.本研究为了优化γ-干扰素(IFN-γ)诱导HaCaT细胞ICAM-1表达的条件,用不同浓度的IFN-γ诱导HaCaT细胞不同时间,流式细胞仪检测ICAM-1表达.结果发现选用1 000U/mL的剂量诱导HaCaT细胞24h ICAM-1的表达是最高的.从而表明IFN-γ可以上调ICAM-γ的表达,为后期药物治疗皮肤炎症奠定基础.     

胰高血糖素样肽-1对胰岛β细胞功能的影响

目的观察胰高血糖素样肽-1（glucoincretin hormone glucagon-likepeptide-1,GLP-1）对RIN-m细胞分泌功能的影响。探讨GLP-1对链脲佐菌素诱导胰岛细胞凋亡的保护机制。方法应用TUNEL法检测RIN-m细胞凋亡的百分率;RT—PCR检测PDX-1,bcl-2／baxmRNA的表达。结果GLP-1在高糖培养下可以延缓RIN-m细胞随体外培养时间延长而出现的胰岛素和胰十二指肠同源盒基因转录因子1（PDX-1）．RNA水平的下降,且其作用具有葡萄糖依赖性。GLP-1可以保护低剂量链脲佐菌素使RIN—m细胞凋亡细胞比例明显减少,凋亡过程中,baxmRNA表达水平明显降低,bcl-2mRNA表达水平明显上升。结论由此推测GLP—1可能通过PDX-1延缓RIN—m细胞胰岛素分泌功能的下降,同时GLP＋1可以保护低剂量链脲佐菌素通过诱导胰岛细胞凋亡导致糖尿病,其中bcl＋2／baxmRNA表达比率变化可能起重要作用。