亚砷酸对肺癌细胞凋亡及LRP基因表达影响的体外研究

目的观察亚砷酸(As2O3)对人肺腺癌的诱导凋亡作用及对LRP基因表达的影响及可能机制.方法选用人肺腺癌A549细胞系,应用体外细胞培养法,流式细胞术检测As2O3对人肺腺癌的诱导凋亡作用;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测LRPmRNA的表达.结果不同浓度的As2O3均可诱导A549细胞凋亡.1.0μmol/L、2.0μmol/L的As2O3可下调LRPmRNA的表达.结论As2O3诱导肿瘤细胞凋亡作用主要是通过下调LRPmRNA表达有密切关系.     

莱菔硫烷对结肠癌细胞的生长抑制及诱导作用

目的探讨植物化学保护剂莱菔硫烷(SFN)对结肠癌细胞的生长抑制及诱导作用的抗肿瘤机制.方法①体外培养人结肠腺癌细胞株Caco-2,观察10-100μmol/L的SFN对Caco-2增殖动力学的影响,MTT法检测细胞生长抑制率.②采用RT-PCR及Western blot检测SFN诱导Caco-2细胞葡萄糖醛酸转移酶UGTlA及其同工型的表达,高效液相色谱法测定UGTlA的催化活性.③扫描电镜观察SFN诱导细胞凋亡的形态变化;流式细胞仪检测凋亡率.结果①30～100μmol/L的SFN对细胞增殖均有抑制作用,呈剂量和时间依赖效应.②10～35μmol/L SFN处理组UGT1AmRNA相对系数与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).UGT1AmRNA表达量与SFN的剂量呈正相关(r=0.79,P＜0.01);25μmol/L SFN处理组与对照组之间UGT1A1(P=0.006)、UGT1A8(P=0.017)、UGT1A10(P=0.008)表达的差异具有统计学意义;10～30μmol/L SFN作用于Caco-2细胞24h,随着浓度的增加,UGT1A蛋白带的灰度值比值增加.与对照组相比,P＜0.05;在SFN处理组对杂环胺N-OH-PhIP的葡萄糖醛酸结合能力明显增高.③扫描电镜观察,25μmol/L处理组无明显改变,50μmol/L、75μmol/L、100μmol/L处理组发生明显的细胞形态结构变化,典型者出现凋亡小体;流式细胞仪检测结果示随着SFN浓度增高,凋亡率增加,与对照组相比差异有显著性意义(P＜0.01).结论①植物化学保护剂莱菔硫烷对结肠腺癌细胞株Caco-2的生长增殖具有抑制作用,呈剂量租时间依赖效应;②小剂量的莱菔硫烷能诱导UGT1A及其同工型UGT1A1、1A8、1A10mRNA表达,UGT1A蛋白表达增加,对杂环胺的葡萄糖醛酸结合能力增强;③大剂量的莱菔硫烷诱导结肠腺癌细胞凋亡.     

去甲肾上腺素在正常及去肾上腺大鼠海马调节机体细胞免疫功能中的作用

用噻唑蓝 (MTT)比色分析法检测了在正常及去肾上腺大鼠双侧海马内微量注射去甲肾上腺素 (Noradrenline,NA)对刀蛋白 (ConA)刺激的脾淋巴细胞增加增殖反应的影响 结果 :(1 )在正常大鼠 ,NA(4μl,6 0× 1 0 -3 mol/L)、β1 受体激动剂Dobutamine(Dob,4μl,6 0× 1 0 -3 mol/L)和 β2 受体激动剂Metaproternol(Met,4μl,8 0× 1 0 -3 mol/L)均可抑制ConA刺激的脾淋巴细胞增殖反应 其中NA的作用最强 ,Met次之 ,Dob的作用最弱 ;α及 β受体阻断剂酚妥拉明 (Phen ,2 μl,2 0× 1 0 -3 mol/L)和心得安 (Prop,2 μl,2 0mol/L)均可部分阻断NA的免疫抑制作用 ,且Prop的作用更强 (2 )在去肾上腺组 ,NA的免疫抑制作用不明显 提示 :海马内NA对机体的细胞免疫功能具有明显的抑制作用 ,此作用是由α及β受体共同介导 ,其中 ,β受体的作用大于α受体 ,β2 受体的作用大于 β1 受体 此外 ,保持肾上腺结构和功能完整在NA调节机体细胞免疫功能作用中具有重大意义     

吡格列酮对正常MC3T3-E1成骨细胞增殖、凋亡以及功能蛋白表达的影响

目的 探讨不同浓度吡格列酮(PIO)对正常糖浓度培养下MC3T3-E1小鼠早期成骨细胞增殖、凋亡及功能蛋白分泌表达的影响.方法 体外培养MC3T3-E1细胞,分为正常对照组、不同浓度PIO干预组(5 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L、40 μmol/L),分别干预24、48 h.CCK-8检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RIA法和ELISA法分别检测相关功能蛋白骨钙素(OCN)、碱性磷酸酶(ALP),RT-PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、成骨因子runt相关基因2(Runx2)及骨形成蛋白-2(BMP-2)mRNA表达水平.结果 (1)与对照组比较,MC3T3-E1细胞增殖能力在5μmol/L PIO干预组增加显著(P<0.05)、在PIO大于5 μmol/L～10 μmol/L干预组则降低(P<0.05).干预时间由24 h延长至48 h,各组细胞增殖能力呈不同程度增加,但在20、40 μmol/L PIO干预的两组增加无统计学差别.(2)对照组及各PIO浓度干预干预24 h,细胞凋亡率分别为:1.97%、0.43%、13.0%、48.30%、81.00%;(3)随着PIO浓度从0～40μmol/、L范围内的增加,MC3T3-E1细胞的PPARγmRNA表达水平呈增加趋势(P<0.05);Runx2 mRNA表达量在5 μmol/L PIO浓度组时较对照组增加,在剂量较高时(PIO≥10 μmol/L)随浓度升高表达下降.(4)细胞功能蛋白ALP、OCN的分泌及BMP-2的表达在5 μmol/L PIO浓度组时最高,PIO≥10 μmol/L时,上述蛋白量逐渐下降(P<0.05);随干预时间从24～48 h延长,各PIO浓度干预组ALP以及BMP-2量增加(P<0.05),而OCN无显著改变(P>0.05).结论 PIO对正常糖浓度培养的MC3T3-E1细胞具有双向作用:低浓度促进细胞增殖,高浓度则促进凋亡.PPARγ适当激活可促使成骨细胞通过Runx2增加功能蛋白的合成;过度激活,则表现出细胞毒性.     

大鼠酒精性肝纤维化星状细胞模型的建立

目的探讨建立离体的大鼠酒精性肝纤维化星状细胞模型.方法检测采用不同浓度乙醛干预大鼠第二代肝星状细胞24小时的光密度值.结果乙醛浓度以1.25倍递增,25μmol/L为起始浓度,取对数浓度对增殖效应呈现规则的生长曲线,其刺激浓度(EC50)为71μmol/L.结论选用乙醛浓度为71μmol/L作用于HSC 24h作为以后的实验大鼠酒精性肝纤维化的细胞模型的浓度.     

白藜芦醇逆转过氧化氢引起的心肌细胞损伤研究

目的研究白藜芦醇是否能够逆转过氧化氢(H_2O_2)引起的心肌细胞损伤。方法培养心肌H9C2细胞,应用不同浓度过氧化氢(100μM、200μM、300μM、400μM)构建细胞损伤模型,并用25μM、50μM、100μM白藜芦醇处理损伤的心肌细胞,6小时后进行后续实验。应用MTT检测细胞活性;应用实时定量聚合酶链式反应(PCR)检测凋亡相关基因Bax、BCl_2的表达情况;应用乳酸脱氢酶(LDH)含量检测试剂盒检测上清中LDH水平;应用丙二醛(MDA)含量检测试剂盒检测MDA水平;应用超氧化物歧化酶(SOD)含量检测试剂盒检测SOD水平。结果不同浓度过氧化氢降低心肌细胞活性,其中400μM最显著;此外,25μM、50μM、100μM白藜芦醇能够提高H_2O_2引起的心肌细胞活性降低;PCR实验结果表明,25μM、50μM、100μM白藜芦醇能够逆转H_2O_2引起的Bax基因表达上调,而逆转H_2O_2引起的BCl_2基因表达下调;试剂盒检测实验结果表明,25μM、50μM、100μM白藜芦醇能够逆转H_2O_2引起的心肌细胞分泌LDH、MDA,而提高H_2O_2引起的心肌细胞分泌SOD减少。结论白藜芦醇能够逆转过氧化氢引起的心肌细胞损伤。     

齐墩果酸氮杂环衍生物合成及对非小细胞肺癌A549作用研究

目的:开展齐墩果酸氮杂环衍生物合成及抗非小细胞肺癌A549作用研究。方法:以齐墩果酸为原料,通过氧化、鲍奇还原胺化、缩合等反应合成齐墩果酸氮杂环衍生物。采用CCK-8试剂盒、流式Annexin V-FITC/PI双染色法和Caspase-3试剂盒分别检测A549细胞的增殖抑制作用、细胞凋亡及Caspase-3的变化。结果:成功合成齐墩果酸氮杂环衍生物3-N-(3,5,6-三甲基吡嗪-2-甲酰基)-齐墩果酸,产率为71.2%。齐墩果酸氮杂环衍生物对A549细胞具有抑制作用且呈量效关系,IC50为110μmol·L~(-1),CC50为146μmol·L~(-1)。齐墩果酸氮杂环衍生物能诱导A549细胞株的凋亡,显著增强A549细胞中Caspase-3的活性。结论:合成的齐墩果酸氮杂环衍生物结构为3-N-(3,5,6-三甲基吡嗪-2-甲酰基)-齐墩果酸,该化合物对A549细胞株具有增殖抑制作用。诱导A549细胞株凋亡与增强Caspase-3的酶活性可能是其机制。     

硒镉对番茄根尖细胞的遗传学效应

为研究硒镉联合作用对番茄根尖细胞遗传学效应,用不同硒浓度和100μmol/L镉联合处理番茄根尖24 h、48 h、72 h、96 h,统计有丝分裂指数、染色体畸变率和微核率.结果表明:单一镉处理时番茄根尖细胞有丝分裂指数下降,染色体畸变率和微核率增加,且随时间的延长而毒害加深.硒镉处理时,硒浓度低于1.0μmol/L时番茄根尖细胞有丝分裂指数增加,染色体畸变率和微核率下降,高于1.0μmol/L时番茄根尖细胞有丝分裂下降,染色体畸变率和微核率升高,但浓度过高时,微核率随着镉处理时间的延长反而有所降低,表现出低浓度硒对镉的毒害有缓解作用,高浓度硒与镉协同毒害作用.     

镉诱导大鼠骨组织及成骨细胞金属硫蛋白基因表达

目的 探讨镉(Cd)对大鼠骨组织及体外培养成骨细胞中金属硫蛋白mRNA表达的影响.方法 应用皮下注射的方法对Sprague-Dawley雄性大鼠进行连续Cd染毒(0～1.5 mg/kg bw)12周,5d/w,收集血样、尿样及骨组织,分别测定体内镉负荷;应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测骨组织中金属硫蛋白(MT)基因表达;同时,应用混合酶消化法分离大鼠颅盖骨成骨细胞,进行原代培养,并以不同浓度的Cd(0～2.0 μmol/L)作用24 h以及1.0 μmol/L Cd作用不同时间(24～72 h)后,应用RT-PCR,观察成骨细胞MT mRNA表达的变化.结果 大鼠镉染毒后体内镉负荷显著增加,呈明显剂量-效应关系;镉染毒能够诱导大鼠骨组织MT基因表达,各剂量染毒大鼠骨组织MT基因表达均明显高于对照组,P＜0.05.体外实验结果同样表明,镉作用能诱导成骨细胞MT表达,并随着染镉剂量的增加,MT基因表达也明显增高,特别是在0.5 μmol/L和2.0 μmol/L组,和对照组相比差异有显著意义(P＜0.01);1.0 μmol/L CdCl2作用不同时间后均能诱导成骨细胞MT表达,但表达量并不随锅作用时间而出现明显改变.结论 镉能诱导骨组织及体外培养成骨细胞MT表达,MT可能镉在致骨损伤中有一定保护作用.     

通用干扰素与胸腺肽融合基因构建与表达研究

临床上将干扰素(IFN)和胸腺肽(THYα1)联合使用远大于各自单独使用的效果,根据细胞因子协同作用的特点,本文通过DNA重组技术将两者构成一个融合基因。本实验用PCR技术将化学合成的胸腺肽α1基因与干扰素基因通过PCR拼接、扩增并克隆到PGEM-T载体中,构建克隆质粒PGEM-IFNTHY。为使IFNTHY基因在原核细胞中表达,克隆质粒经酶切、插入到表达载体pET28 a中。将重组质粒转化至表达宿主BL21(DE3)中,经诱导,SDS-PAGE和W esterb lot检测显示,pET28 IFNTHY基因得到了表达;微量细胞病变抑制法和玫瑰花结法显示表达产物有活性。     

人α-干扰素基因在小菜蛾(Px)细胞中的表达

苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒 (Autographacalifornicanuclearpolyhedrosisvirus ,AcN PV)是杆状病毒基因工程的理想材料 本文采用一种新型的细胞系———Px细胞系为受体细胞 ,pAc373-IFN -α为转移载体 ,利用AcNPV这种表达载体成功地在Px细胞中表达了人α -干扰素基因     

二氧化钼-石墨烯修饰电极对多巴胺、尿酸检测方法研究

将MoO_2/RGO纳米复合材料滴涂于玻碳电极表面以构筑电化学传感器并将其用于多巴胺和尿酸的测定中,结果表明:MoO_2和石墨烯的协同作用能够促进多巴胺和尿酸的电化学反应,并且二者的氧化峰电位差大于120 mV,该传感器检测DA的线性范围为2～220μmol/L,UA的线性范围为9～300μmol/L,检出限分别为0.68μmol/L和1.06μmol/L(S/N=3)。制备的MoO_2/RGO/GCE成功用于人体尿液的检测。设计的传感器具有较宽的线性范围,较低的检测限,优异的重现性、稳定性、选择性,可以用于实际样品中DA和UA的检测。     

苦豆子碱对耐多药大肠杆菌AcrAB-ToLC蛋白表达量影响

本文通过微量肉汤稀释法筛选出了2株耐环丙沙星(CIP)、头孢噻肟(CTX)、阿米卡星(AN)、氨苄西林(AM)药物的多重耐药性大肠杆菌,测定了苦豆子碱对大肠埃希菌多重耐药菌株的MIC值为12.5mg/mL,MH肉汤稀释棋盘式法测定环丙沙星联合苦豆子碱、CCCP MIC值,通过计算部分抑菌浓度指数判断环丙沙星联合苦豆子碱呈协同作用,优化试验确定最适宜的逆转条件对耐药性大肠埃希菌进行逆转,对编码外排泵系统中AcrA、AcrB、AcrR、ToLC蛋白基因进行克隆、测序,同时应用实时定量PCR检测苦豆子碱对多重耐药菌株作用前后AcrA、AcrB、AcrR、ToLC蛋白的mRNA表达量影响。数据分析发现作用前后编码大肠杆菌外排泵系统AcrA、AcrB、AcrR、ToLC蛋白基因碱基序列未发生变化,但苦豆子碱作用后外排泵系统中AcrA、AcrB蛋白mRNA表达量下降,负调控蛋白AcrR mRNA表达量上升。苦豆子碱从整体上可以抑制耐多药大肠埃希氏菌AcrAB-ToLC的蛋白mRNA表达量,使大肠杆菌多药外排泵AcrAB-ToLC的蛋白mRNA表达量下降,从而恢复大肠杆菌对抗生素的相对敏感性。实验结果为深入研究苦豆子碱逆转耐药性大肠杆菌其它机制提供了依据和参考.     

IFN-γ诱导HaCaT细胞ICAM-1表达的条件优化

细胞间黏附分子-1(ICAM-1)是白细胞和角质细胞之间相互作用的必需因子,角质细胞中ICAM-1表达的上调与多种皮肤炎症相关.本研究为了优化γ-干扰素(IFN-γ)诱导HaCaT细胞ICAM-1表达的条件,用不同浓度的IFN-γ诱导HaCaT细胞不同时间,流式细胞仪检测ICAM-1表达.结果发现选用1 000U/mL的剂量诱导HaCaT细胞24h ICAM-1的表达是最高的.从而表明IFN-γ可以上调ICAM-γ的表达,为后期药物治疗皮肤炎症奠定基础.     

内科住院患者的血浆同型半胱氨酸水平及其相关影响因素分析

目的描述内科住院患者血浆同型半胱氨酸(Hcy)水平及分布特点,分析Hcy与相关因素的关系。方法横断面调查我院2014年12月~2015年1月住院的262例内科患者。采用酶法检测血浆Hcy水平,使用SPSS 13.0软件对检测指标进行处理。结果内科患者Hcy水平平均值为17.50±9.36μmol/L,与正常参考值15μmol/L比较有显著差异(P=0.000),其中男性hcy平均水平为19.38±11.06μmol/L,高于女性15.40±6.42μmol/L,男女Hcy均值差异有统计学意义(P=0.001)。使用单样本t检验方法分析神经内科、肾内科、呼吸内科、心血管内科、内分泌科、肿瘤科、消化内科不同专科住院患者Hcy水平,结果显示神经内科和肾内科患者的Hcy平均值高于参考值(15μmol/L),差异有统计学意义(P0.01)。以Hcy为因变量,以年龄及血脂各项指标为自变量,多因素逐步回归分析提示Hcy与高密度脂蛋白间有显著负相关关系(r=-0.263)。结论内科住院患者Hcy平均水平高于正常值,Hcy存在性别差异,神经内科和肾内科患者的Hcy平均水平较高,Hcy水平与血脂中高密度脂蛋白水平成负相关关系,降低Hcy可能成为治疗动脉粥样硬化的靶点之一。     

血清胆固醇与炎症因子和冠心病斑块稳定性的相关性分析

目的:探讨血清胆固醇?炎症因子和冠心病斑块稳定性的相关关系?方法:2013年7月~2014年5月南京医科大学第一附属医院收治的冠心病患者107例,其中55例稳定性心绞痛(stable angina pectoris,SAP)患者为SAP组,52例急性冠状动脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)患者为ACS组,并选取相同时期非冠心病患者96例为对照组?主要观察总胆固醇(total cholesterol,TC)?低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)?总胆红素(total bilirubin,TBil)?超敏C反应蛋白(high sensitive C reactive protein,hs-CRP)?肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α?白介素(interleukin,IL)-6等炎症因子和斑块稳定性的相关关系?结果:ACS组TC和LDL-C分别为(6.38 ± 1.17)mmol/L和(5.63±1.12)mmol/L,均高于SAP组[TC(4.51 ± 1.06)mmol/L?LDL-C(4.42 ± 1.05)mmol/L],且均高于对照组,差异具有统计学意义(P < 0.05);ACS组TBil为(6.28 ± 0.74)μmol/L,SAP组TBil为(9.96 ± 1.02)μmol/L,均低于对照组,差异具有统计学意义(P < 0.05)?ACS组Hs-CRP?IL-6和TNF-α分别为(19.06 ± 3.72)mg/L?(57.35 ± 4.14)pg/L和(38.11 ± 2.64)pg/L,均高于SAP组[hs-CRP(11.31 ± 2.15)mg/L?IL-6(29.60 ± 3.08)pg/L和TNF-α(26.82 ± 2.13)pg/L],且均高于对照组,差异具有统计学意义(P < 0.05)?结论:冠心病患者血中TC?LDL-C?IL-6?TNF-α和Hs-CRP等明显增高,并与斑块稳定性呈正相关?     

麦冬药材中6种麦冬皂苷的质量分数测定

建立HPLC法同时测定麦冬药材中penogenin-3-O-α-L-吡喃鼠李糖(1-2)-β-D-葡萄糖苷、去木糖-14-hydro sprengerinin C、麦冬皂苷Ra、penogenin-3-O-α-L-吡喃鼠李糖(1-2)-β-吡喃木糖(1-4)-β-D-葡萄糖苷、14-hydro sprengerinin C和慈溪麦冬皂苷A 6种麦冬皂苷的质量分数。色谱条件为lunna NH2色谱柱(4. 6 mm×150 mm,5μm),流动相乙腈-水(90∶10),流速1. 0m L/min,检测波长208 nm,柱温为室温。该条件下上述6种麦冬皂苷线性范围分别为0. 96～9. 60μg/m L,0. 92～9. 20μg/m L,0. 97～9. 70μg/m L,0. 94～9. 40μg/m L,1. 04～10. 40μg/m L,0. 92～9. 20μg/m L。在相应线性范围内线性相关系数均大于0. 999 1;方法回收率为98. 59%～101. 77%,RSD为1. 15%～1. 98%。所建方法可用于麦冬药材及相关制剂中麦冬皂苷的测定。     

养阴化瘀剔络方对血管内皮细胞的增殖及损伤保护作用研究

目的研究养阴化瘀剔络方对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)增殖作用的影响和对过氧化氢(H2O2)损伤HUVEC的保护作用。方法250μmol/LH2O2诱导HUVEC细胞损伤,用四甲基偶氦唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活数量,用比色法测细胞培养液中过氧化物丙二醛(MDA)含量。结果养阴化瘀方对正常HUVEC细胞增殖作用无明显影响,对H2O2诱导的内皮细胞损伤有明显抑制作用,对上清中H2O2诱导的HUVEC细胞损伤产生的MDA含量有—定降低作用。结论养阴化瘀剔络方对于H2O2诱导的HUVEC细胞损伤有明显的保护作用,对正常HUVEC增殖无影响。     

老年人慢性肺心病血清中B亚基含量的检测

目的以脑肌酸肌酶单克隆抗体(BCK-McAb)酶联免疫吸附法(ELISA)对血清肌酸肌酶B亚基含量进行检测.并探讨正常老年人和老年人慢性肺心病血清肌酸肌酶B亚基含量变化的临床意义.方法ELISA检测B亚基含量,动力学法检测CK、CK-MB的活性.结果血清CK-B亚基含量在慢性肺心病急性发作期为x=(327.80±201.18)ng/50μL,缓解期和正常对照组分别为x=(5.4×10-4±3.2×10-4)ng/50μL和x=(6.8×10-4±2.4×10-4)ng/50μL.急性发作期与缓解期和正常人血清B亚基含量差异显著(P＜0.05).结论BCK单克隆抗体酶联免疫吸附法可检测血清中微量B亚基.当慢性肺心病急性发作期CK活力尚在正常范围时,B亚基含量已明显升高.应用BCK-McAb ELISA检测血清中B亚基含量精确而灵敏,为临床病程变化、疗效判断及预后提供了快速灵敏的诊查途径.     

尼古丁对PDLFs细胞乙酰胆碱受体(nAChR)表达的影响

目的探讨尼古丁诱导的牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament fibroblasts,PDLFs)凋亡的信号转导机制。方法本研究用1μg/ml,10μg/ml和100μg/ml不同浓度的尼古丁干预PDLFs细胞24h后,采用RT-PCR方法检测尼古丁乙酰胆碱受体(nAChR)的表达变化。结果不同浓度的尼古丁试验组(1μg/ml、10μg/ml和100μg/ml)作用于PDLFs细胞24h后,nAChR的mRNA表达水平显著增加,与正常对照组比较差异具有统计学意义(P0.05),且随着尼古丁剂量的增加,nAChR的基因表达水平随之增高(r=0.948,F=254.231,P=0.000)。结论尼古丁致PDLFs细胞凋亡可能是通过nAChR起作用的。