基因工程药物质控方法(ELISA和HPLC)研究及应用

目的:1.建立适用于重组人生长激素(rh-GH)生产质量控制的大肠杆菌蛋白残留(ECP)测定方法。2.完成对重组人激素H1(rh-H1)的重要质量控制项目:含量、纯度、肽图的检定。方法:采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)对rh-GH产品中的ECP残留进行检测,并按照中国药典、生物制品规程及ICH有关要求进行方法学验证。采用反相高效液相色谱法对rh-H1进行了含量测定、纯度检查和肽图分析。结果:1.根据研究所得真实可靠的方法学评价结果,建立并规范了可用于rh-GH常规生产工艺控制的宿主蛋白残留检测方法。2.对三批rh-H1原液检定结果分别为,含量:100.5%、101.1%、99.8%;纯度:98.0%、98.4%、97.8%;肽图:三批原液肽图均与对照品一致。表明该产品的此三项指标均符合规定。     

肺表面活性蛋白B的构效关系研究进展

肺表面活性物质是分布于肺泡内衬的一类磷脂蛋白复合物。而由于磷脂具有两亲性,能与肺表面活性物质中的特异性蛋白相互作用而在肺泡中排列形成磷脂单分子层,从而发挥其降低气液界面表面张力的作用。肺表面活性蛋白B(surfactant protein B,SP-B)是肺表面活性蛋白最为重要的特异性蛋白,它的异常常常引起肺部各种疾病,因此SP-B在肺功能维持和修复中起着不可替代的作用。SP-B具有类似于阿米巴穿孔肽超蛋白家族成员的结构,属于鞘脂激活蛋白样蛋白超家族蛋白(SAPLIPs)。通过分析脂质-蛋白相互作用和SP-B的构效关系特点,为基于类似物的药物开发提供理论依据。     

小鼠脂肪细胞糖尿病药物筛选模型的优化及应用

糖尿病已经成为世界范围内危害人类健康的主要疾病之一,对糖尿病的研究和治疗具有重要意义,本文首先建立并优化小鼠脂肪细胞糖尿病药物筛选模型,然后使用临床抗糖尿病药物对该模型进行考察,并对海糖平(H)和杉糖平(S)两种降糖新药进行了筛选。通过Western-blot法检测GLUT4(葡萄糖转运蛋白4)以确定药物的药效。结果表明,用临床抗糖尿病药物考察模型能客观反映该药物药效。在此模型上,对杉糖平和海糖平的各个馏分进行初步筛选,发现两种药物的一些有效成分。     

新冠疫情下探讨湿热和紫外消毒对血药浓度检测的影响

考察湿热和紫外消毒法对人血中6种药物(他克莫司、西罗莫司、环孢素、万古霉素、丙戊酸和霉酚酸)浓度的影响,为医院血药浓度检测人员在防控新冠病毒的工作提供参考。收集150例患者血液样本(每种药物各25例),均分3份后,分别采用不消毒(对照组)、56℃水浴30 min(湿热组)和紫外线(254 nm,8 W)照射30 min(紫外组)消毒处理,用酶放大免疫分析法测定药物浓度,并用多种统计学方法对结果进行分析。结果显示:除丙戊酸和霉酚酸外,2种消毒组和对照组间他克莫司、西罗莫司、环孢素、万古霉素的浓度无显著性差异且一致性良好。因此使用酶放大免疫分析法测定他克莫司、西罗莫司、环孢素、万古霉素的血药浓度时,可考虑对样本进行湿热或紫外消毒,以降低检测人员的职业暴露风险。     

糖尿病并发高血压患者肾功能与C肽水平的相关性研究

目的研究糖尿病并发高血压患者肾功能与C肽水平的相关性。方法选取2016年7月至2018年12月期间收治的80例糖尿病并发高血压患者设定为研究组,选取同期在我院进行健康体检的80名健康人设定为对照组。利用酶联法测定两组人群的肾功能;利用化学发光法检测两组人群的C肽水平,并研究糖尿病并发高血压患者肾功能与C肽水平的相关性。结果研究组患者BUN、Cr、UA水平显著高于对照组,比较差异具有统计学意义(P0.05)。研究组患者C肽水平显著低于对照组,比较差异具有统计学意义(P0.05)。糖尿病并发高血压患者肾功能与C肽水平呈负相关性。结论检测C肽水平为糖尿病并发高血压患者诊治提供依据。     

肽-HLA-A2融合蛋白用于四聚体(Tetramer)的改造

目的对蛋白四聚体(Tetramer)进行改造,简化其制备过程,提高制备效率,节约成本.方法利用基因工程技术,将肽-HLA-A2和BirA酶的底物肽(BSP)形成一个融合蛋白,该融合蛋白在原核中以包涵体的形式被表达,对表达的包涵体蛋白进行稀释复性、酶切和纯化后,再在BirA酶的作用下对其生物素化,最后将其连接到荧光素标记的亲和素上,即形成了改造的Tetramer.结果获得了可溶性的蛋白四聚体.结论该方法制备过程简单,蛋白复兴效率高,成本低,值得继续深入研究.     

靶向木瓜样蛋白酶的抗SARS-CoV-2药物虚拟筛选

利用与急性呼吸综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2)具有高度同源性的人冠状病毒类木瓜蛋白酶(human coronavirus papain-like protease)晶体,对木瓜样蛋白酶(PLpro)进行同源模建,再通过该模建的蛋白对已上市或已进入临床试验的药物运用分子对接的方法进行虚拟筛选和动力学模拟研究,以找到对SARS-CoV-2引起的新冠肺炎疾病(COVID-19)可能具有治疗作用的药物。经过筛选,共确定了11种与SARS-CoV-2 PLpro结合较好的候选药物。分子动力学模拟和结合自由能分析结果表明:疏水性相互作用在候选药物与PLpro的结合过程中具有重要作用,并且发现替诺福韦艾拉酚胺(Tenofovir alafenamide)具有对COVID-19治疗的潜力。虚拟筛选是一种快速且经济的药物筛选的方法,用此方法筛选得到的替诺福韦艾拉酚胺可能可以作为候选药物对COVID-19进行治疗。     

骨肽对成骨细胞骨形成蛋白2表达影响的实验研究

目的 研究骨肽对成骨细胞骨形成蛋白2（BMP2）表达影响.方法 体外分离培养成骨细胞,0.02mg/ml,0.08mg/ml,0.32mg/ml三个剂量浓度骨肽分别作用24小时,应用流式细胞术检测成骨细胞增殖情况.以上三个剂量浓度骨肽再分别作用成骨细胞24小时、48小时、72小时,收集细胞上清利用酶联免疫法（ELISA法）检测BMP2表达含量.结果 三个尽剂量浓度作用24小时均可引起成骨细胞增殖,并存在剂量依赖性.骨肽各浓度组在24小时、48小时均可引起BMP2表达增高,其中0.08mg/ml剂量组作用48小时效果最为显著.结论 骨肽可促进成骨细胞BMP2蛋白表达,从而发挥促进成骨细胞增殖和分化的作用.     

尿铜蓝蛋白检测临床应用评价

目的建立铜蓝蛋白酶联免疫吸附方法,开展临床糖尿病、糖尿病肾病尿铜蓝蛋白检测并评价其意义.方法对本院内科诊断的720名患者按所患疾病分组,分别收集尿样,采用酶联免疫吸附测定方法,检测尿中铜蓝蛋白和微量白蛋白分泌率,对结果进行统计分析比较.结果 (1)糖尿病病人、糖尿病肾病病人的尿铜蓝蛋白分泌率(ceruloplasmin excretion rate CER)和尿微量白蛋白分泌率(albumin excretion rate AER)的变化趋势呈一致性,二者正相关,r=0.8;(2)临床应用结果表明,对糖尿病肾病早期诊断的真阳性率为:CER达84%,AER达71%;假阴性率CER 16%,AER 29%.(3)糖尿病组、糖尿病肾病组、高血压组CER均值分别为(262±104)ng/min、(549±149)ng/min、(188±70)ng/min.结论 (1)尿铜蓝蛋白检测是糖尿病肾病早期诊断的敏感指标;(2)尿铜蓝蛋白与微量白蛋白呈正相关性;(3)尿铜蓝蛋白检测有助于提高糖尿病肾病早期诊断的真阳性率并降低其早期诊断的假阴性率.     

联合应用LY294002和表柔比星对骨肉瘤细胞株MG63的研究

目的探究使用表柔比星联合磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路抑制剂LY294002对体外培养骨肉瘤细胞MG63的影响。方法以不同浓度及组合的药物处理MG63细胞,利用CCK-8法检测细胞增殖状况;利用流式细胞术检测药物对MG63凋亡率;采用免疫蛋白印迹法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3等凋亡相关蛋白表达。结果 CCK-8检测结果显示,与对照组相比表柔比星(EPI)和LY294002对MG63的生长均有抑制作用,两者联合使用的抑制作用更加显著并呈现剂量依赖性。流式细胞术的结果表明LY294002(20μM)的凋亡率为(32. 1±3)%,EPI(10μM)的凋亡率为(21. 5±2)%,两者合用于细胞后可显著引起细胞凋亡,细胞凋亡率为(65. 2±5)%(P 0. 01)。免疫蛋白印记法结果显示随着两药联用的浓度增加,活化的凋亡蛋白Cleaved PARP,Cleavedcaspase-3表达显著增加(P 0. 01)。结论LY294002可以增强表柔比星对MG63细胞的生长抑制作用并且促进其凋亡,机制可能是通过半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶依赖性的细胞凋亡途径发挥作用。     

论当代人文社科学术期刊编辑视野的转移

当代期刊编辑理论研究,已经逐渐淡化了对期刊本身的功能、基本属性,办刊特色等的讨论,因为编辑学的理论发展,已经解决了这些基本问题。对于人文社科学术理论刊物,现在更多的是在关注人文社会科学的编辑出版与全球化背境下当代人文社会科学发展的关联性;当代学术批评与编辑的选择性思维方式;当代学术期刊的编辑过程及编辑活动与学术评价的关系;当代网络化条件下的学术活动与编辑活动的关联研究等与文科期刊相关的更为重大的理论课题。     

论共同犯罪中止的认定标准

当前对于共同犯罪案件如何认定犯罪中止,司法机关在办理中是仁者见仁,法学人士在讨论研究中是智者见智。共同犯罪中止的认定,应以行为人自动停止犯罪并有效地阻止其他共犯利用其先前行为继续实施犯罪或防止危害结果的发生为标准。     

代位权行使效力的研究

关于代位权行使的效力, 有入库规则说、平等受偿说、优先受偿说等几种观点。从立法目的、法律功能、法律成本和效率、其他债权人利益的保护、中国司法解释的性质和来源来说, 中国应选择优先受偿说的观点, 赋予代位债权人优先受偿权, 建立代位权上优先受偿权的现代理念。     

民国时期武术的科学化变革

作为现代武术发展史上的一个高峰,民国武术置身于当时人们追求＂科学＂的话语背景之中。以＂传统＂为特征的国术（武术）与当时的＂科学＂话语形成了较大的反差与抵牾。国术界要实现以武图强的远大抱负,国术的＂科学化＂问题首当其冲。鲁迅与陈铁生的论战围绕国术是否有提倡的必要展开,一方面为国术的科学化做了舆论上的铺垫,另一方面也促使国术界开始反思传统武术的痼疾。进而,国术界从理论和实践两个方面展开了国术科学化的改造,其实质是确立发展国术的合理性和合法性,为国术的进一步发展铺平了道路。     

从美国修订《1930年关税法》看我国外贸战略转型

2012年3月,美国参议院通过修订《1930年关税法》的法案,以便对中国、越南等“非市场经济国家”征收反补贴税。近几年,中美之间的贸易争端处于高发期,金融危机加剧了我国外贸出口中遭受的贸易摩擦。应尽快转变原有增长方式,提高产品附加值、降低对少数国家的路径依赖,开拓多元化市场、促进内外贸一体化,以实现我国外贸战略的转型升级。     

提单之债的性质及其诉权的构造

在不签发提单的情况下,利他契约理论能很好地解释海上货物运输合同当事方的权利义务。但在签发提单的情况下,该理论就不敷使用。借助罗马法中的准契约理论,既能对提单下的义务转让进行合理解释,也能解决在实务中诉权的确定之难。     

还本售房合同的法律效力分析

本文通过对案件的深刻剖析,论述了认定合同的依据、广告行为的效力、公司与股东的责任以及公司主体的混同等重要问题并提出了自己的观点。     

确定性的毁灭——黑格尔《精神现象学》开端试析

从某种意义上说,<精神现象学>是黑格尔哲学的"秘密起源".本文将首先说明黑格尔为什么要以"感性确定性"作为<现象学>的开端;其次,我们将阐明黑格尔本人对"感性确定性"的辩证分析过程;最后,我们将指出黑格尔在此处用语言瓦解感性确定性时所犯的错误,并就此提出我们的见解.     

当代中国马克思主义大众化论纲

中国社会转型和经济全球化的双重背景凸显了推进当代中国马克思主义大众化的迫切性和必要性,推进当代中国马克思主义大众化需要新的理念和新的目标定位,创新方式是推进当代中国马克思主义大众化的关键,找准着力点是提升当代中国马克思主义大众化绩效的实践路径.     

中国古典美学意象概念的主体间性

相对于现代美学的主体间性而言,中国古典美学的主体间性是前主体性的主体间性,即主客体尚未充分分化、主体未获得完全独立状态的主体间性。中国美学的意象概念就是这种古典主体间性的体现。意象概念的形成经历了意与象的合成过程,体现了“天人合一”的哲学境界。意象通过审美感兴而产生,突破物我、人我的屏障,达到了主体间性的审美境域。