凋亡通路蛋白表达对过氧化氢诱导PC12细胞凋亡的影响

目的探讨过氧化氢（H2O2）诱导PC12细胞凋亡的机制。方法 MTT测定细胞存活率,荧光染色观察细胞形态,透射电镜观察细胞的超微结构,流式细胞仪测定细胞凋亡率,Western blotting技术和流式细胞仪检测Bcl-2和Bax蛋白的表达,分光光度计测定Caspase-3释放率。结果 0.25 mM的H2O2可诱导PC12细胞凋亡,细胞的形态发生改变,细胞核受损,细胞内Bcl-2蛋白的表达降低、Bax蛋白的表达增加,Caspase-3被激活。结论 H2O2诱导了PC12细胞凋亡,其作用机制与细胞内Bcl-2、Bax蛋白的表达及Caspase-3活性密切相关。     

联合应用LY294002和表柔比星对骨肉瘤细胞株MG63的研究

目的探究使用表柔比星联合磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路抑制剂LY294002对体外培养骨肉瘤细胞MG63的影响。方法以不同浓度及组合的药物处理MG63细胞,利用CCK-8法检测细胞增殖状况;利用流式细胞术检测药物对MG63凋亡率;采用免疫蛋白印迹法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3等凋亡相关蛋白表达。结果 CCK-8检测结果显示,与对照组相比表柔比星(EPI)和LY294002对MG63的生长均有抑制作用,两者联合使用的抑制作用更加显著并呈现剂量依赖性。流式细胞术的结果表明LY294002(20μM)的凋亡率为(32. 1±3)%,EPI(10μM)的凋亡率为(21. 5±2)%,两者合用于细胞后可显著引起细胞凋亡,细胞凋亡率为(65. 2±5)%(P 0. 01)。免疫蛋白印记法结果显示随着两药联用的浓度增加,活化的凋亡蛋白Cleaved PARP,Cleavedcaspase-3表达显著增加(P 0. 01)。结论LY294002可以增强表柔比星对MG63细胞的生长抑制作用并且促进其凋亡,机制可能是通过半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶依赖性的细胞凋亡途径发挥作用。     

莱菔硫烷对结肠癌细胞的生长抑制及诱导作用

目的探讨植物化学保护剂莱菔硫烷(SFN)对结肠癌细胞的生长抑制及诱导作用的抗肿瘤机制.方法①体外培养人结肠腺癌细胞株Caco-2,观察10-100μmol/L的SFN对Caco-2增殖动力学的影响,MTT法检测细胞生长抑制率.②采用RT-PCR及Western blot检测SFN诱导Caco-2细胞葡萄糖醛酸转移酶UGTlA及其同工型的表达,高效液相色谱法测定UGTlA的催化活性.③扫描电镜观察SFN诱导细胞凋亡的形态变化;流式细胞仪检测凋亡率.结果①30～100μmol/L的SFN对细胞增殖均有抑制作用,呈剂量和时间依赖效应.②10～35μmol/L SFN处理组UGT1AmRNA相对系数与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).UGT1AmRNA表达量与SFN的剂量呈正相关(r=0.79,P＜0.01);25μmol/L SFN处理组与对照组之间UGT1A1(P=0.006)、UGT1A8(P=0.017)、UGT1A10(P=0.008)表达的差异具有统计学意义;10～30μmol/L SFN作用于Caco-2细胞24h,随着浓度的增加,UGT1A蛋白带的灰度值比值增加.与对照组相比,P＜0.05;在SFN处理组对杂环胺N-OH-PhIP的葡萄糖醛酸结合能力明显增高.③扫描电镜观察,25μmol/L处理组无明显改变,50μmol/L、75μmol/L、100μmol/L处理组发生明显的细胞形态结构变化,典型者出现凋亡小体;流式细胞仪检测结果示随着SFN浓度增高,凋亡率增加,与对照组相比差异有显著性意义(P＜0.01).结论①植物化学保护剂莱菔硫烷对结肠腺癌细胞株Caco-2的生长增殖具有抑制作用,呈剂量租时间依赖效应;②小剂量的莱菔硫烷能诱导UGT1A及其同工型UGT1A1、1A8、1A10mRNA表达,UGT1A蛋白表达增加,对杂环胺的葡萄糖醛酸结合能力增强;③大剂量的莱菔硫烷诱导结肠腺癌细胞凋亡.     

SMND-309对缺氧缺糖诱导的SH-SY5Y神经细胞凋亡的影响

体外培养人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,利用缺氧、缺糖诱导细胞凋亡,采用SRB法测定细胞活力,比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)活性,Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡,Western blotting测定凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax含量.结果显示SMND-309能显著抑制SH-SY5Y细胞的凋亡,降低细胞损伤程度并提高细胞活力(P<0.05或P<0.01),这与其上调胞内抗凋亡蛋白Bcl-2表达密切相关,但对促凋亡蛋白Bax的表达影响不明显.     

CSA对SfaMNPV诱导SL-1细胞凋亡的影响

检测线粒体膜通透性转运孔(MPT)的开放抑制剂环孢菌素A(CSA)对芹菜夜蛾核型多角体病毒(Syngrapha falcifera multiplenuclear polyhedrosis virus,SfaMNPV)诱导诱导斜纹夜蛾(Spodoptera litura Cells,SL-1)细胞凋亡的影响。用不同浓度CSA和SfaMNPV单独或联合处理SL-1细胞,通过细胞形态学观察、DNA凝胶电泳法、PI染色流式细胞仪鉴定细胞凋亡,应用罗丹明123(Rh123)染色流式细胞仪测定线粒体跨膜电位(ΔΨm)。CSA明显抑制了SfaMNPV诱导的SL-1细胞凋亡,CSA还抑制了SfaMNPV诱导的SL-1细胞线粒体膜电位(ΔΨm)下降。CSA抑制了SfaMNPV诱导SL-1细胞的ΔΨm下降,可能是亲环素-D(CyP-D)与CSA的结合导致MPT的关闭,从而抑制细胞凋亡。     

吡格列酮对正常MC3T3-E1成骨细胞增殖、凋亡以及功能蛋白表达的影响

目的 探讨不同浓度吡格列酮(PIO)对正常糖浓度培养下MC3T3-E1小鼠早期成骨细胞增殖、凋亡及功能蛋白分泌表达的影响.方法 体外培养MC3T3-E1细胞,分为正常对照组、不同浓度PIO干预组(5 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L、40 μmol/L),分别干预24、48 h.CCK-8检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RIA法和ELISA法分别检测相关功能蛋白骨钙素(OCN)、碱性磷酸酶(ALP),RT-PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、成骨因子runt相关基因2(Runx2)及骨形成蛋白-2(BMP-2)mRNA表达水平.结果 (1)与对照组比较,MC3T3-E1细胞增殖能力在5μmol/L PIO干预组增加显著(P<0.05)、在PIO大于5 μmol/L～10 μmol/L干预组则降低(P<0.05).干预时间由24 h延长至48 h,各组细胞增殖能力呈不同程度增加,但在20、40 μmol/L PIO干预的两组增加无统计学差别.(2)对照组及各PIO浓度干预干预24 h,细胞凋亡率分别为:1.97%、0.43%、13.0%、48.30%、81.00%;(3)随着PIO浓度从0～40μmol/、L范围内的增加,MC3T3-E1细胞的PPARγmRNA表达水平呈增加趋势(P<0.05);Runx2 mRNA表达量在5 μmol/L PIO浓度组时较对照组增加,在剂量较高时(PIO≥10 μmol/L)随浓度升高表达下降.(4)细胞功能蛋白ALP、OCN的分泌及BMP-2的表达在5 μmol/L PIO浓度组时最高,PIO≥10 μmol/L时,上述蛋白量逐渐下降(P<0.05);随干预时间从24～48 h延长,各PIO浓度干预组ALP以及BMP-2量增加(P<0.05),而OCN无显著改变(P>0.05).结论 PIO对正常糖浓度培养的MC3T3-E1细胞具有双向作用:低浓度促进细胞增殖,高浓度则促进凋亡.PPARγ适当激活可促使成骨细胞通过Runx2增加功能蛋白的合成;过度激活,则表现出细胞毒性.     

COX-2抑制剂对PC-3细胞的放射增敏作用研究

目的应用选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398作用于胰腺癌细胞株PC-3,观察其放射增敏作用,并对其可能增敏机制进行初步探讨。方法体外培养胰腺癌细胞株PC-3;以流式细胞术(FCM)单抗标记技术检测PC-3细胞的COX-2表达水平;以MTT实验检测细胞增殖抑制情况及NS-398对细胞放射敏感性的影响;以FCM分析细胞周期变化,以RT-PCR分析细胞周期相关蛋白P21表达变化。结果 FCM显示PC-3细胞存在COX-2的异常高表达;MTT实验显示NS-398可显著增强PC-3细胞的放射敏感性;FCM显示NS-398联合放射组G0-G1期比率上调;RT-PCR显示NS-398联合放射组细胞内P21mRNA表达上调。结论选择性COX-2抑制剂NS-398可增强胰腺癌细胞PC-3的放射敏感性,其机制可能与上调P21mRNA表达,进而诱导细胞周期阻滞于G0-G1期相关。     

三七三醇皂苷和胞二磷胆碱联用对局灶脑缺血再灌注大鼠的脑保护作用

目的研究三七三醇皂苷(PTS)、胞二磷胆碱(CDP-c)联用对大鼠局灶脑缺血/再灌注的神经保护作用。方法用大脑中动脉栓塞法制作短暂性(90min)局部脑缺血/再灌注模型,观察PTS、CDP-c单用及联用7d后,大鼠脑梗死体积、caspase-3表达及凋亡细胞数。结果和对照组相比,PTS组、CDP-c组及两药联用组脑梗死体积较小,caspase-3表达、凋亡细胞数均较少,并有统计学意义。两药联用组和PTS组、CDP-c组相比,脑梗死体积较小、caspase-3表达、凋亡细胞数较少(P<0.05)。PTS组和CDP-c组相比各指标无统计学意义。结论PTS和CDP-c单用对短暂脑缺血/再灌注模型可能具有神经保护作用。PTS与CDP-c联用对短暂性局造脑缺血/再灌注的神经保护可能有协同作用。     

流式细胞仪检测重组毕赤酵母发酵过程中的细胞活性

建立了流式细胞仪检测重组巴斯德毕赤酵母(P.p astoris)细胞活性的方法,并在高密度发酵过程中得到应用。使用碘化丙锭染色法测定细胞活性,发现甲醇诱导时酵母细胞活性开始下降,随着细胞密度的增加,由于细胞胁迫和甲醇的影响,细胞活性明显下降,活细胞率最大下降了14%。与此同时,细胞生长减缓,目的蛋白发生降解,表明细胞活性与发酵过程中细胞的生长和目的蛋白生成等参数密切相关。实验证明:流式细胞仪可作为检测毕赤酵母发酵过程中细胞活性参数的一个便捷精确的有力工具。     

一种基于毛细管进样的无鞘液流式细胞分析技术

流式细胞技术对荧光素着色细胞的形态和生物学性状进行定性或定量大群体快速检测,以往的细胞驱动方式是鞘液包裹带动式,近年来诞生了一种毛细管进样的无鞘液驱动流式细胞分析技术,可以对微量细胞进行绝对计数、CD3/CD4,CD8淋巴细胞计数艾滋病检测、细胞表面抗原等蛋白表达分析、细胞凋亡早期Nexin,线粒体膜电位分析、凋亡中期多种caspase分析和凋亡晚期TUNEL分析、细胞周期、细胞毒性、细胞增值和细胞示踪分析,是一种灵活易用的、低消耗的、便于实验人员自己常规操作的分析系统。     

数字化高灵敏度荧光显微镜在As_2O_3诱导MGC-803细胞核凋亡产生钙振荡研究中的应用

利用数字化高灵敏度荧光显微镜对As2O3诱导MGC-803细胞核凋亡过程中的钙振荡进行研究,通过图像中荧光强度随时间变化的规律反应钙振荡的频率和强度变化。结果证实As2O3诱导MGC-803细胞核凋亡过程中,的确引发了钙振荡,说明核钙参与了凋亡过程,并且钙振荡的频率以低频为主。对两相邻细胞核的钙振荡信号观察分析发现,两核钙强度变化曲线低频部分异常相似,几乎在同一时刻达到最高点和最低点。尽管钙波动的幅度不同,但基本频率相同,由此可初步预测钙信号以频率变化为表达特征。两细胞核凋亡呈同步化趋势,证明在受到As2O3刺激后,细胞核的凋亡不是个别现象。     

阿司匹林对人结肠癌耐药细胞株Caco-2增殖和凋亡的影响

目的研究阿司匹林对人结肠癌耐药细胞株Caco-2增殖和凋亡的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定阿司匹林对Caco-2增殖抑制的影响,流式细胞术（FCM）法检测细胞凋亡指数,电镜等技术。结果不同浓度的阿司匹林对人结肠癌耐药细胞株Caco-2有较强的抑制作用,且呈剂量及时间依赖性。结论阿司匹林能够显著抑制人结肠癌耐药细胞株Caco-2增殖及诱导凋亡。     

茶多酚诱导肿瘤细胞凋亡机理研究综述

对目前国内外有关茶多酚诱导肿瘤细胞凋亡的主要机理——影响细胞周期依赖性激酶活性和细胞间通讯、抑制癌基因/诱导抑癌基因的表达、线粒体靶向性及分泌caspase 3等进行了综合评述,可为进一步探讨茶多酚诱导肿瘤细胞凋亡的机制及研发抗肿瘤药物提供理论依据.     

胰高血糖素样肽-1对胰岛β细胞功能的影响

目的观察胰高血糖素样肽-1（glucoincretin hormone glucagon-likepeptide-1,GLP-1）对RIN-m细胞分泌功能的影响。探讨GLP-1对链脲佐菌素诱导胰岛细胞凋亡的保护机制。方法应用TUNEL法检测RIN-m细胞凋亡的百分率;RT—PCR检测PDX-1,bcl-2／baxmRNA的表达。结果GLP-1在高糖培养下可以延缓RIN-m细胞随体外培养时间延长而出现的胰岛素和胰十二指肠同源盒基因转录因子1（PDX-1）．RNA水平的下降,且其作用具有葡萄糖依赖性。GLP-1可以保护低剂量链脲佐菌素使RIN—m细胞凋亡细胞比例明显减少,凋亡过程中,baxmRNA表达水平明显降低,bcl-2mRNA表达水平明显上升。结论由此推测GLP—1可能通过PDX-1延缓RIN—m细胞胰岛素分泌功能的下降,同时GLP＋1可以保护低剂量链脲佐菌素通过诱导胰岛细胞凋亡导致糖尿病,其中bcl＋2／baxmRNA表达比率变化可能起重要作用。     

改进的模糊C-均值聚类方法

该文针对模糊C-均值算法容易收敛于局部极小点的缺陷,将遗传算法应用于模糊C-均值算法(FCM)的优化计算中,其中对传统遗传算法的编码方案、遗传算子约束条件及适应值函数等方面进行改进,提出了一种基于改进遗传算法的模糊聚类方法。实验表明,将改进的遗传算法与FCM算法结合起来进行聚类分析,可以在一定程度上避免FCM算法对初始值敏感和容易陷入局部最优解的缺陷,使聚类更合理,比单一使用FCM算法进行聚类分析的效果要好。     

GnRH激动剂Triptorelin对人卵巢癌细胞系SKOV3、OVCAR3生长抑制作用的研究

目的观察GnRH受体在人卵巢癌细胞系SKOV3、OVCAR3中的表达，并研究GnRH激动剂（Triptorelin）对卵巢癌细胞生长的抑制作用。方法采用免疫组化SP法检测两种细胞系内GnRH受体的表达，分别应用不同浓度Triptorelin作用于细胞，MTT法检测细胞生长抑制率。结果人卵巢癌细胞系OVCAR3表达GnRHI受体，SKOV3细胞系不表达GnRHⅠ受体，Triptorelin可明显抑制GnRHⅠ受体阳性的OVCAR3细胞生长，对GnRHⅠ受体阴性的SKOV3细胞生长无明显抑制作用。结论GnRH激动剂Triptorelin通过与人卵巢癌细胞株GnRHⅠ受体结合，发挥抗增殖的作用。     

基于FCM的动态结合全局图像阈值分割

全局阈值分割对于小目标物效果不理想,动态阈值容易产生阴影等干扰,但综合考虑全局阈值和动态阈值可以达到比较理想的结果。模糊C均值算法用于灰度图像分割是一种非监督模糊聚类后再标定的过程,该文在不明显增加运算量的前提下,利用模糊C均值自动聚类的功能分别得到全局阈值和动态阈值,完成对阈值矩阵的构造和图像的分割。     

木犀草素对大鼠肝癌细胞CBRH7919的作用机制

从细胞凋亡的角度研究木犀草素对大鼠肝癌细胞CBR．H7919tk／GCV系统的作用机制．采用流式细胞仪技术分析木犀草素砷大鼠肝癌细胞CBRH7919出／GCV自杀基因治疗系统的影响,以及基绿-派诺宁染色、丫啶橙（AO）染色的观察,还用琼脂糖凝胶电泳技术分析了药物对DNA的作用．经过统计学检验：联合组的凋亡率明显高于非联合组;甲基绿-派诺宁染色和丫啶橙（AO）染色出现了较为典型的凋亡形态;琼脂糖凝胶电泳出现明显可辨的梯状条带．综上,木犀草素对CBRH7919墩／GCV系统具有诱导其凋亡的作用．