D-柠檬烯对人胃癌MGC803细胞增殖和凋亡的影响

目的研究D-柠檬烯对人胃癌MGC803细胞生长抑制和凋亡的影响。方法噻唑蓝(MTT)法比色检测细胞生长情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率;激光共聚焦检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量和caspase- 3蛋白的表达。结果D-柠檬烯对人胃癌MGC803细胞生长抑制作用呈剂量依赖关系;流式细胞仪检测发现D-柠檬烯可引起MGC803细胞凋亡,且呈时间依赖性;激光共聚焦显微镜荧光检测发现D-柠檬烯处理的细胞内ROS明显升高(P<0.05),caspase-3蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论D-柠檬烯能够有效地抑制癌细胞的生长以及诱导凋亡。这种作用机制可能是使MGC803细胞内产生大量的活性氧。也可能与细胞内caspase-3基因的表达变化有关。     

血管紧张素Ⅱ预处理提高骨髓间充质干细胞抗凋亡能力

目的:研究血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)预处理是否能提高骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的抗凋亡能力,探讨AngⅡ对MSCs预适应保护作用的可能机制?方法:用AngⅡ预处理大鼠MSCs细胞,采用H2O2或缺氧联合无血清(hypoxia and serum deprivation,Hypoxia/SD)的方法诱导细胞凋亡?用乳酸脱氢酶(lactate dehyarogenase,LDH)检测法?四唑盐比色法(MTT)和Hoechst 33342染色测定细胞活力和凋亡率;用Annexin V-FITC法定量检测细胞凋亡率;对MSCs进行罗丹明-123染色,用流式细胞术检测线粒体跨膜电位?结果:AngⅡ预处理MSCs能够明显减轻H2O2或Hypoxia/SD诱导的细胞损伤,显著提高细胞活力;逆转由Hypoxia/SD引起的线粒体跨膜电位的降低;ERK1/2阻断剂U0126和Akt阻断剂LY294002都能明显减弱AngⅡ对MSCs的预适应保护作用,增加细胞凋亡率?结论:AngⅡ对MSCs具有预适应保护作用,且主要通过Akt?ERK1/2途径发挥其抗凋亡能力?     

凋亡通路蛋白表达对过氧化氢诱导PC12细胞凋亡的影响

目的探讨过氧化氢（H2O2）诱导PC12细胞凋亡的机制。方法 MTT测定细胞存活率,荧光染色观察细胞形态,透射电镜观察细胞的超微结构,流式细胞仪测定细胞凋亡率,Western blotting技术和流式细胞仪检测Bcl-2和Bax蛋白的表达,分光光度计测定Caspase-3释放率。结果 0.25 mM的H2O2可诱导PC12细胞凋亡,细胞的形态发生改变,细胞核受损,细胞内Bcl-2蛋白的表达降低、Bax蛋白的表达增加,Caspase-3被激活。结论 H2O2诱导了PC12细胞凋亡,其作用机制与细胞内Bcl-2、Bax蛋白的表达及Caspase-3活性密切相关。     

吡格列酮对正常MC3T3-E1成骨细胞增殖、凋亡以及功能蛋白表达的影响

目的 探讨不同浓度吡格列酮(PIO)对正常糖浓度培养下MC3T3-E1小鼠早期成骨细胞增殖、凋亡及功能蛋白分泌表达的影响.方法 体外培养MC3T3-E1细胞,分为正常对照组、不同浓度PIO干预组(5 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L、40 μmol/L),分别干预24、48 h.CCK-8检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RIA法和ELISA法分别检测相关功能蛋白骨钙素(OCN)、碱性磷酸酶(ALP),RT-PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、成骨因子runt相关基因2(Runx2)及骨形成蛋白-2(BMP-2)mRNA表达水平.结果 (1)与对照组比较,MC3T3-E1细胞增殖能力在5μmol/L PIO干预组增加显著(P<0.05)、在PIO大于5 μmol/L～10 μmol/L干预组则降低(P<0.05).干预时间由24 h延长至48 h,各组细胞增殖能力呈不同程度增加,但在20、40 μmol/L PIO干预的两组增加无统计学差别.(2)对照组及各PIO浓度干预干预24 h,细胞凋亡率分别为:1.97%、0.43%、13.0%、48.30%、81.00%;(3)随着PIO浓度从0～40μmol/、L范围内的增加,MC3T3-E1细胞的PPARγmRNA表达水平呈增加趋势(P<0.05);Runx2 mRNA表达量在5 μmol/L PIO浓度组时较对照组增加,在剂量较高时(PIO≥10 μmol/L)随浓度升高表达下降.(4)细胞功能蛋白ALP、OCN的分泌及BMP-2的表达在5 μmol/L PIO浓度组时最高,PIO≥10 μmol/L时,上述蛋白量逐渐下降(P<0.05);随干预时间从24～48 h延长,各PIO浓度干预组ALP以及BMP-2量增加(P<0.05),而OCN无显著改变(P>0.05).结论 PIO对正常糖浓度培养的MC3T3-E1细胞具有双向作用:低浓度促进细胞增殖,高浓度则促进凋亡.PPARγ适当激活可促使成骨细胞通过Runx2增加功能蛋白的合成;过度激活,则表现出细胞毒性.     

尿铜蓝蛋白检测临床应用评价

目的建立铜蓝蛋白酶联免疫吸附方法,开展临床糖尿病、糖尿病肾病尿铜蓝蛋白检测并评价其意义.方法对本院内科诊断的720名患者按所患疾病分组,分别收集尿样,采用酶联免疫吸附测定方法,检测尿中铜蓝蛋白和微量白蛋白分泌率,对结果进行统计分析比较.结果 (1)糖尿病病人、糖尿病肾病病人的尿铜蓝蛋白分泌率(ceruloplasmin excretion rate CER)和尿微量白蛋白分泌率(albumin excretion rate AER)的变化趋势呈一致性,二者正相关,r=0.8;(2)临床应用结果表明,对糖尿病肾病早期诊断的真阳性率为:CER达84%,AER达71%;假阴性率CER 16%,AER 29%.(3)糖尿病组、糖尿病肾病组、高血压组CER均值分别为(262±104)ng/min、(549±149)ng/min、(188±70)ng/min.结论 (1)尿铜蓝蛋白检测是糖尿病肾病早期诊断的敏感指标;(2)尿铜蓝蛋白与微量白蛋白呈正相关性;(3)尿铜蓝蛋白检测有助于提高糖尿病肾病早期诊断的真阳性率并降低其早期诊断的假阴性率.     

阿司匹林对人结肠癌耐药细胞株Caco-2增殖和凋亡的影响

目的研究阿司匹林对人结肠癌耐药细胞株Caco-2增殖和凋亡的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定阿司匹林对Caco-2增殖抑制的影响,流式细胞术（FCM）法检测细胞凋亡指数,电镜等技术。结果不同浓度的阿司匹林对人结肠癌耐药细胞株Caco-2有较强的抑制作用,且呈剂量及时间依赖性。结论阿司匹林能够显著抑制人结肠癌耐药细胞株Caco-2增殖及诱导凋亡。     

莱菔硫烷对结肠癌细胞的生长抑制及诱导作用

目的探讨植物化学保护剂莱菔硫烷(SFN)对结肠癌细胞的生长抑制及诱导作用的抗肿瘤机制.方法①体外培养人结肠腺癌细胞株Caco-2,观察10-100μmol/L的SFN对Caco-2增殖动力学的影响,MTT法检测细胞生长抑制率.②采用RT-PCR及Western blot检测SFN诱导Caco-2细胞葡萄糖醛酸转移酶UGTlA及其同工型的表达,高效液相色谱法测定UGTlA的催化活性.③扫描电镜观察SFN诱导细胞凋亡的形态变化;流式细胞仪检测凋亡率.结果①30～100μmol/L的SFN对细胞增殖均有抑制作用,呈剂量和时间依赖效应.②10～35μmol/L SFN处理组UGT1AmRNA相对系数与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).UGT1AmRNA表达量与SFN的剂量呈正相关(r=0.79,P＜0.01);25μmol/L SFN处理组与对照组之间UGT1A1(P=0.006)、UGT1A8(P=0.017)、UGT1A10(P=0.008)表达的差异具有统计学意义;10～30μmol/L SFN作用于Caco-2细胞24h,随着浓度的增加,UGT1A蛋白带的灰度值比值增加.与对照组相比,P＜0.05;在SFN处理组对杂环胺N-OH-PhIP的葡萄糖醛酸结合能力明显增高.③扫描电镜观察,25μmol/L处理组无明显改变,50μmol/L、75μmol/L、100μmol/L处理组发生明显的细胞形态结构变化,典型者出现凋亡小体;流式细胞仪检测结果示随着SFN浓度增高,凋亡率增加,与对照组相比差异有显著性意义(P＜0.01).结论①植物化学保护剂莱菔硫烷对结肠腺癌细胞株Caco-2的生长增殖具有抑制作用,呈剂量租时间依赖效应;②小剂量的莱菔硫烷能诱导UGT1A及其同工型UGT1A1、1A8、1A10mRNA表达,UGT1A蛋白表达增加,对杂环胺的葡萄糖醛酸结合能力增强;③大剂量的莱菔硫烷诱导结肠腺癌细胞凋亡.     

齐墩果酸氮杂环衍生物合成及对非小细胞肺癌A549作用研究

目的:开展齐墩果酸氮杂环衍生物合成及抗非小细胞肺癌A549作用研究。方法:以齐墩果酸为原料,通过氧化、鲍奇还原胺化、缩合等反应合成齐墩果酸氮杂环衍生物。采用CCK-8试剂盒、流式Annexin V-FITC/PI双染色法和Caspase-3试剂盒分别检测A549细胞的增殖抑制作用、细胞凋亡及Caspase-3的变化。结果:成功合成齐墩果酸氮杂环衍生物3-N-(3,5,6-三甲基吡嗪-2-甲酰基)-齐墩果酸,产率为71.2%。齐墩果酸氮杂环衍生物对A549细胞具有抑制作用且呈量效关系,IC50为110μmol·L~(-1),CC50为146μmol·L~(-1)。齐墩果酸氮杂环衍生物能诱导A549细胞株的凋亡,显著增强A549细胞中Caspase-3的活性。结论:合成的齐墩果酸氮杂环衍生物结构为3-N-(3,5,6-三甲基吡嗪-2-甲酰基)-齐墩果酸,该化合物对A549细胞株具有增殖抑制作用。诱导A549细胞株凋亡与增强Caspase-3的酶活性可能是其机制。     

骨髓增生异常综合征骨髓细胞凋亡率增加的研究

应用末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT)介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)、碘化丙锭染色后流式细胞仪分析两种方法观察35例骨髓增生异常综合征(MDS)、10例正常人的凋亡率.MDS中难治性贫血(RA)、环形铁粒幼细胞性难治性贫血(RAS)、难治性贫血伴原始细胞增多(RAEB)凋亡率显著高于正常人(P<0.01),难治性贫血伴原始细胞增多-转变型(RAEB-T)凋亡率无明显增高,与正常对照组无明显差异(P>0.05).说明MDS中RA、RAS、RAEB存在凋亡过度,提示凋亡过度为MDS无效造血机制之一,病情演变至RAEB-T时转为凋亡障碍.抗凋亡疗法可试用于早期MDS.     

亚砷酸对肺癌细胞凋亡及LRP基因表达影响的体外研究

目的观察亚砷酸(As2O3)对人肺腺癌的诱导凋亡作用及对LRP基因表达的影响及可能机制.方法选用人肺腺癌A549细胞系,应用体外细胞培养法,流式细胞术检测As2O3对人肺腺癌的诱导凋亡作用;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测LRPmRNA的表达.结果不同浓度的As2O3均可诱导A549细胞凋亡.1.0μmol/L、2.0μmol/L的As2O3可下调LRPmRNA的表达.结论As2O3诱导肿瘤细胞凋亡作用主要是通过下调LRPmRNA表达有密切关系.     

一种基于毛细管进样的无鞘液流式细胞分析技术

流式细胞技术对荧光素着色细胞的形态和生物学性状进行定性或定量大群体快速检测,以往的细胞驱动方式是鞘液包裹带动式,近年来诞生了一种毛细管进样的无鞘液驱动流式细胞分析技术,可以对微量细胞进行绝对计数、CD3/CD4,CD8淋巴细胞计数艾滋病检测、细胞表面抗原等蛋白表达分析、细胞凋亡早期Nexin,线粒体膜电位分析、凋亡中期多种caspase分析和凋亡晚期TUNEL分析、细胞周期、细胞毒性、细胞增值和细胞示踪分析,是一种灵活易用的、低消耗的、便于实验人员自己常规操作的分析系统。     

老年冠心病患者红细胞免疫功能与CRP、HCY的临床探讨

目的探讨老年冠心病(CHD)患者外周血红细胞免疫功能与C-反应蛋白(CRP)、同型半胱氨酸(HCY)的变化及临床意义.方法采用"郭峰改良法"透 射比浊法、酶联免疫分析检测49例老年CHD患者外周血红细胞C3b受体花环率(RBC-C3bRR)、红细胞免疫复合花环率(RBC-ICR)、CRP和HCY,并与32例健康老年人作比较.结果CHD组的RBC-C3bRR与对照组无明显差异,RBC-ICR、CRP及HCY则明显高于对照组,尤以不稳定型心绞痛组(UAP)为甚(P＜0.01).结论老年CHD存在严重的EIF低下,免疫机制和炎症因子CRP、HCY可能是急性冠脉综合症(ACS)发病中的一个重要因素,并可能与斑块的不稳定性有关.     

流式细胞仪检测重组毕赤酵母发酵过程中的细胞活性

建立了流式细胞仪检测重组巴斯德毕赤酵母(P.p astoris)细胞活性的方法,并在高密度发酵过程中得到应用。使用碘化丙锭染色法测定细胞活性,发现甲醇诱导时酵母细胞活性开始下降,随着细胞密度的增加,由于细胞胁迫和甲醇的影响,细胞活性明显下降,活细胞率最大下降了14%。与此同时,细胞生长减缓,目的蛋白发生降解,表明细胞活性与发酵过程中细胞的生长和目的蛋白生成等参数密切相关。实验证明:流式细胞仪可作为检测毕赤酵母发酵过程中细胞活性参数的一个便捷精确的有力工具。     

CSA对SfaMNPV诱导SL-1细胞凋亡的影响

检测线粒体膜通透性转运孔(MPT)的开放抑制剂环孢菌素A(CSA)对芹菜夜蛾核型多角体病毒(Syngrapha falcifera multiplenuclear polyhedrosis virus,SfaMNPV)诱导诱导斜纹夜蛾(Spodoptera litura Cells,SL-1)细胞凋亡的影响。用不同浓度CSA和SfaMNPV单独或联合处理SL-1细胞,通过细胞形态学观察、DNA凝胶电泳法、PI染色流式细胞仪鉴定细胞凋亡,应用罗丹明123(Rh123)染色流式细胞仪测定线粒体跨膜电位(ΔΨm)。CSA明显抑制了SfaMNPV诱导的SL-1细胞凋亡,CSA还抑制了SfaMNPV诱导的SL-1细胞线粒体膜电位(ΔΨm)下降。CSA抑制了SfaMNPV诱导SL-1细胞的ΔΨm下降,可能是亲环素-D(CyP-D)与CSA的结合导致MPT的关闭,从而抑制细胞凋亡。     

新辅助化疗对大肠癌肿瘤细胞凋亡的影响

目的研究新辅助化疗对人体大肠癌细胞凋亡的影响,以评价其临床疗效及指导临床应用。方法应用TUNEL法检测化疗前后大肠癌患者病理标本石蜡切片癌组织内肿瘤细胞凋亡指数的变化情况。结果 TUNEL法原位凋亡细胞检测结果显示:化疗前肿瘤细胞凋亡指数最高为5.2%,最低为0.9%,平均为3.28%±1.15%,化疗后肿瘤细胞凋亡指数最高为9.3%,最低为1.4%,平均为5.37%±2.07%,化疗前后两组比较有统计学差异(P0.05)。结论新辅助化疗可以使大肠癌肿瘤细胞凋亡率增加。     

银杏内酯B对于实验性脑出血后神经保护作用研究

目的探讨银杏内酯B对于脑出血后脑水肿、脑细胞凋亡及脑代谢的影响,从多角度进一步探讨银杏内酯B的神经保护机制。方法将50只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为干预组(n=21)、对照组(n=21)、假手术组(n=8),采用Ⅶ型细菌胶原酶构建大鼠实验性脑出血模型,在脑出血造模后第3天行脑含水量检测;在第3天采用TUNEL法行细胞凋亡检测;在造模成功后,分别在第1天、第3天、第7天,对3组大鼠行氢质子磁共振波谱成像(~1H-MRS),并对图像进行处理及定量分析。结果脑组织含水量对照组[(82.52±0.86)%]与干预组[(81.45±0.54)%]比较,具有显著性差异(P0.05)。脑细胞凋亡检测,干预组(52.47±2.66)与对照组(44.22±3.11)比较,具有显著性差异(P0.05)。~1H-MRS检测结果表明,银杏内酯B 3天亚组和7天亚组的N-乙酰天门冬氨酸(NAA)较对照组明显升高(34.56±2.76比26.78±3.26,62.66±2.79比56.34±1.32;P0.05),乳酸(Lac)明显降低(56.78±3.22比66.47±3.56,50.33±4.05比55.78±4.07,均P0.05),而胆碱复合物(Cho)、肌酸(Cr)差异无统计学意义(P0.05)。结论银杏内酯B可以通过降低脑组织含水量、减少细胞凋亡、改善脑代谢等多途径发挥神经保护作用。     

新城疫病毒诱导体外培养喉癌细胞凋亡

目的 为探讨新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)对体外培养喉癌细胞的杀伤作用及其与喉癌细胞凋亡的关系.方法 本实验利用新城疫病毒弱毒疫苗株La Sota接种于体外培养的喉癌细胞系(Hep-2),不同时间后,在光镜、电镜下对细胞形态、结构进行观察,并收集细胞采用流式细胞术对细胞凋亡情况进行了检测.结果 接毒后48小时,开始出现部分Hep-2细胞脱壁;60h后出现细胞溶解、聚集,部分死亡细胞悬浮于培养液中;电镜下可见细胞间大量堆积的病毒粒子,细胞核出现染色质浓缩、集边、核膜扩张、胞浆浓缩等变化;还可见完整细胞膜包围的凋亡小体出现.另外,在接毒后48h流式细胞仪的DNA直方图上,出现细胞凋亡峰,凋亡细胞百分数随着接毒时间的延长而增加.结论 新城疫病毒感染可大量杀伤体外培养的喉癌细胞,并可诱导其发生凋亡性坏死.     

糖尿病性心肌病患者血清sFas与外周血淋巴细胞凋亡

目的探讨细胞凋亡在糖尿病性心肌病发病过程中是否发挥作用。方法选取30例糖尿病性心肌病患者和30例体检健康的正常对照组。采用流式细胞仪测定PBMC凋亡。采用ELISA法测定血清sFas水平。结果糖尿病性心肌病组患者PBMC凋亡百分率为(31.8±6.1)%较正常对照组的(21.2±4.1)%明显增高(P0.05),血清sFas水平(6.6±1.1μg/ml)较正常对照组(3.4±0.6μg/ml)明显升高(P0.05)。糖尿病性心肌病患者PBMC凋亡百分率与血清sFas均随心衰程度的加重而升高,两者呈正相关(r=0.64)。结论心肌细胞凋亡在糖尿病性心肌病的发生、发展中发挥着作用。血清sFas有助于判断糖尿病性心肌病心衰程度。     

SMND-309对缺氧缺糖诱导的SH-SY5Y神经细胞凋亡的影响

体外培养人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,利用缺氧、缺糖诱导细胞凋亡,采用SRB法测定细胞活力,比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)活性,Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡,Western blotting测定凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax含量.结果显示SMND-309能显著抑制SH-SY5Y细胞的凋亡,降低细胞损伤程度并提高细胞活力(P<0.05或P<0.01),这与其上调胞内抗凋亡蛋白Bcl-2表达密切相关,但对促凋亡蛋白Bax的表达影响不明显.     

脑缺血后神经元Caspase-3 mRNA表达的研究进展

脑缺血损伤过程中神经元存在两种死亡形式:坏死(necrosis)和凋亡(apoptosis)。细胞的死亡形式取决于细胞类型及其受到的损伤的性质和强度。轻度、短时间的缺血刺激常表现为凋亡。凋亡是指细胞程序性死亡过程,涉及一系列基因的激活和其表达调控的改变。内源性凋亡调节基因的表达可能在决定缺血性神经细胞的生死命运中起重要作用。Caspase是涉及细胞凋亡的蛋白酶, 参与缺血缺氧性脑损伤的病理过程。 1．Caspase-3的生物学特性