通用干扰素与胸腺肽融合基因构建与表达研究

临床上将干扰素(IFN)和胸腺肽(THYα1)联合使用远大于各自单独使用的效果,根据细胞因子协同作用的特点,本文通过DNA重组技术将两者构成一个融合基因。本实验用PCR技术将化学合成的胸腺肽α1基因与干扰素基因通过PCR拼接、扩增并克隆到PGEM-T载体中,构建克隆质粒PGEM-IFNTHY。为使IFNTHY基因在原核细胞中表达,克隆质粒经酶切、插入到表达载体pET28 a中。将重组质粒转化至表达宿主BL21(DE3)中,经诱导,SDS-PAGE和W esterb lot检测显示,pET28 IFNTHY基因得到了表达;微量细胞病变抑制法和玫瑰花结法显示表达产物有活性。     

基因工程概述

前言基因工程是一门按照设计改造DNA，进而改变生物遗传特性的新技术，它是将DNA片断插入到质体、病毒等载体中，经由载体转移到宿主细胞中扩增和表达，从而按照人的意志，定向培育生物新品种、新类型乃至创造自然界从未有过的新生物。基因工程是生物工程中遗传工程的最重要的内容。生物工程包括了发酵工程、酶工程、农业工程、遗传工程等。遗传工程又分为常规育种、细胞融合、人工诱变、基因工程等。基因工程同其它新学科一样，是数十年无数科学家奋斗努力的结果，它的产生有着坚实的理论基础和技术准备。在理论上，四十年代发现生物主…     

基于报告基因能筛选下调p66~(shc)基因转录的药物普筛系统的建立

将p66shc基因的启动子序列克隆到含有荧光素酶报告基因和新霉素抗性基因的pGL3B-neo载体中,然后将重组质粒pGL3B-neo-p66shc转染入人的肺癌细胞A549中,通过单集落分离法得到含有重组质粒的稳定细胞系A549/p66shc。利用这个以报告基因为基础的药物普筛系统,筛选了数百种中药提取物及单体化合物,发现抑制率达到50%以上的2种中药提取物和8种单体化合物。     

基因工程技术的应用现状

基因工程是通过DNA重组技术,获得具有特殊生物遗传性状和功能的遗传工程生物体。基因工程技术广泛应用于农业、医学,食品工业等。但是这种人为改变生物体遗传特性的生物技术是否能安全地被利用,从而更好地造福人类呢?本文就基因工程的应用现状和存在问题作一综合阐述。     

建立一个基于报告基因的靶标筛药系统筛选上调ABCA1基因转录的中药提取物

ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)具有催化外周细胞过量胆固醇和磷脂外向流出的功能。本实验将ABCA1启动子序列克隆到含有荧光素酶报告基因和新霉素抗性基因的pGL3B-neo载体中,并将得到的重组质粒pGL3B-neo/ABCA1转染入人肝癌细胞(hepG2)。通过稀释培养法最终得到含有重组质粒的稳定细胞系SABCA1。利用这个报告基因为基础的药物筛选系统,筛选了100多种中药提取物。通过荧光素酶活性测试,相对活性达到180%以上的有4种中药提取物,并最终挑选能明显激活ABCA1基因启动子的鬼箭羽水提组分进一步研究,得出半数有效浓度(EC50)为48.06 mg/L。此外,利用基于apoA1基因的药物筛选系统验证得出鬼箭羽水提组分也能促进apoA1基因的表达。     

生命科学及仪器若干概念简析

基因工程是以分子遗传学为理沦基础,以分子生物学和微生物学的现代方法为手段,将不同来源的基因(DNA分子),按预先设计的蓝图,在体外构建杂种DNA分子,然后导入活细胞,以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品(药品)。基因工程技术为基因结构和功能的研究提供了有力手段。     

生物世纪的八个福音

生物技术新药．基因治疗基因工程疫苗·植物的细胞与组织培养植物基因工程·动物基因工程·动物克隆技术分子标记辅助育种和基因克隆随着分子生物学的发展，人们在本世纪70年代初创立和发展了重组DNA技术。这一技术结合动植物细胞和组织培养、酶的固定化、现代化生物反应器和计算机技术的应用以及产品分离、纯化等技术的迅速发展，形成了现代生物技术。它包括四个方面，即基因工程。细胞工程、酶工程和发酵工程。以重组DNA为核心的现代生物技术的创立和发展为生命科学注入了新的活力，它所提供的实验方法和手段极大地促进了传统生物学科…     

微生物发酵生产赖氨酸的研究进展

赖氨酸是用发酵法生产的一种人体及动物必需氨基酸,被广泛地用于医药、营养食品和饲料等方面。文章概括了近几年用全球微生物发酵生产赖氨酸的概况,并介绍了由基因重组、基因扩增的方法,包括用可检测识别的染色体DNA重组,利用可检测识别的杂交质粒进行目的基因重组,用PCR技术扩增目标基因的重组等生物技术进行的赖氨酸生产菌株的研究进展。对ε-聚赖氨酸这种新型防腐剂、乳化剂、食疗剂的微生物发酵生产菌的选育及其生产和应用进行了综述。     

以MDR1基因启动子为靶点的药物筛选模型的建立

通过构建以MDR1启动子为启动序列的荧光素酶报告基因载体,建立基于双荧光素酶报告基因系统的多药耐药抑制剂筛选模型。从HCT-8细胞中提取DNA并克隆含有MDR1基因启动子的序列。将该序列重组到荧光素酶报告基因载体pGL-3-Basic的启动区域中,从而构建报告基因载体pGL-MDR1。将pGL-MDR1和pRL-TK载体共转染到HCT-8和HCT-8/VCR细胞中,建立用于筛选多药耐药抑制剂的方法。通过调节不同载体的比例来优化转染效率。通过MDR1基因激活剂(热诱导)和抑制剂(EGCG)来验证该方法。通过直接测序法验证了pGL-MDR1含有MDR1基因启动子序列且没有出现碱基突变。在n(pGL-MDR1)∶n(pRL-TK)=5∶5时,转染效率最高并具有最高的荧光素酶活性。通过MDR1基因激活处理后表现为时间依赖性地激活MDR1基因的表达,而MDR1基因抑制剂的作用则相反。     

肝细胞靶向性Asor-PLL-DNA复合物的构建

目的 :构建肝细胞靶向性Asor PLL DNA复合物。方法 :将携带外源基因的质粒与脱唾液酸糖蛋白结合在一起 ,形成一种可溶性的蛋白 核酸复合物。结果 :该复合物能通过脱唾液酸糖蛋白受体介导的内吞作用 ,以非病毒感染的方式 ,将外源基因导入肝细胞并得以表达。结论 :和传统的重组病毒介导的基因转移方式相比 ,该复合物具有更高的靶向性、安全性 ,该系统的建立为以肝细胞为靶组织的外源基因介导的肝脏相关疾病的基因治疗提供实验基础。     

您的基因检测了吗？——未来健康早管理

什么是基因? 近年来,人们常常听到“DNA”和“基因”这两个词,例如通过DNA进行亲子鉴定、破案,转基因的动物和植物等等。那DNA是什么呢?DNA是脱氧核糖核酸的简称,它遍布于人体每一个细胞内,是人类遗传信息的化学载体。而基因     

人乳头瘤病毒16型(湖北株)E7基因逆转录病毒重组体的构建和鉴定

将目的基因ＨＰＶ１６（湖北株）Ｅ７ 和逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ 采用平端－ 粘端连接在体外进行重组,经过筛选后获得阳性重组体－ 该重组体的鉴定采用双酶切和ＰＣＲ,结果表明重组体构建正确,命名为ｐＬ（Ｅ７ － ＨＢ）ＳＮ     

20年后的新兴行业

美国《福布斯》杂志网站日前对20年后的行业盛衰情况做出了一些有趣的预测,一些新的行业将会诞生。基因测试者:未来的招聘老板会让基因测试者收集和分析雇员的DNA,以确定他们有没有某种才华的基因以及其他影响生产力的不良基因,     

植物遗传工程的载体

高等植物的遗传工程,旨在用分子生物学和细胞生物学的方法,把外源遗传物质——目的基因或含有目的基因的DNA片段,通过载体或其它技术导入受体细胞并使之发生遗传转化,再利用植物细胞的全能性来获得转化了的植株。本文主要介绍近年来,寻求植物遗传工程载体系统的研究概况。     

人α-干扰素基因在小菜蛾(Px)细胞中的表达

苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒 (Autographacalifornicanuclearpolyhedrosisvirus ,AcN PV)是杆状病毒基因工程的理想材料 本文采用一种新型的细胞系———Px细胞系为受体细胞 ,pAc373-IFN -α为转移载体 ,利用AcNPV这种表达载体成功地在Px细胞中表达了人α -干扰素基因     

LiAc/ssDNA/PEG法高效转化酵母

用LiAc（醋酸锂）处理酿酒酵母（saccharomycescerevisiae）Y153，在鱼精载体DNA（ssDNA或dsDNA）和PEG（聚乙二醇）作用下，用穿梭质粒pUT332、pZR333、pZR334成功地进行了转化，腐草霉素抗性基因及血红蛋白基因（Vgb）在酵母转化子中得到表达，在各种转化参数（质粒浓度、载体DNA浓度、LiAc浓度等）优化后，转化率可达10~5个转化子／μgDNA     

DNA疫苗技术

随着生物技术的发展,DNA疫苗的研究也进展迅速.DNA疫苗就是将重组的带有外源的抗原基因的质粒或病毒DNA直接注射到动物体内,从而使外源基因在活体内表达,产生的相应的抗原激活机体的免疫系统,引起免疫反应.DNA疫苗多价疫苗相对于一二代疫苗具有更加安全、稳定、可同时诱导广泛的体液免疫和细胞免疫应答及不受母源抗体的影响等一系列优点.随着对DNA疫苗研究的不断进步,DNA疫苗在21世纪第三代疫苗免疫预防方面将会发挥越来越重要的作用.本文着重介绍DNA疫苗的进展与动态.     

链霉菌查尔酮合成酶基因克隆及原核表达载体构建

根据Genbank数据库已知的链霉菌的查尔酮合成酶基因的保守区设计chs基因特异简并引物,土壤总DNA为模板,利用PCR技术扩增得到该l条chs基因编码区,通过TA克隆、测序和同源比对及进化分析表明:该基因为放线菌来源chs基因.分别在该基因5’末端和3’末端分别引入的限制酶NcoI和EcoR I酶切位点,利用上述2种限制酶分别酶切导入到psimple-T/chs载体和原核表达pET32a,凝胶回收目的片段后,将二者连接并转化大肠杆菌感受态细胞,转化子经菌液PCR筛选、双酶切鉴定后,3730测序结果表明,该基因全长编码区为1089 bp,推测该基因编码全长为362个氨基酸残基,等电点(PI)为5.41、分子量为3 965道尔顿含有CHS保守功能区的酸性蛋白质.分析表明,该基因与Streptomyces lividans来源的查尔酮合成酶RppA基因核苷酸相似性高达93％,氨基酸序列相似性高达87.70％.测序结果表明,该基因已经成功插入到pET32a载体中.     

生物技术的起源及其产业化

以DNA重组技术(基因工程)和杂交瘤技术为代表的生物技术正以迅猛之势席卷全球,各国竞相作为高技术优先发展,中国将生物技术列在“863计划”的首位重点发展。在短短的二十年中,生物技术在世界范围内已取得令人瞩目的成就,产生了巨大的社会效益和经济效益。现在,一个新的产业——生物技术产业已经形成。追溯其发展的轨迹,对于科技的发展有很多启示。