人骨形成因子7基因慢病毒载体的构建及其在骨髓间充质干细胞中的表达

BMP7是骨形成因子家族的一个成员,它不仅是一个重要的成骨生长因子,而且在糖尿病肾脏损伤保护和逆转中扮演重要的角色。干细胞治疗已经逐渐发展为糖尿病肾病治疗的一种有效手段,骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是BMP7的体内天然分泌细胞。本研究旨在通过构建BMP7重组慢病毒表达载体,感染MSCs,并进行鉴定,从而建立BMP7高表达的MSCs细胞系。首先通过PCR法扩增BMP7基因的蛋白编码序列,并克隆入pCDH-BMP7慢病毒载体,其后与包装质粒共转染293T细胞包装病毒,将慢病毒感染小鼠MSCs,荧光显微镜下鉴定感染率。最后,采用定量PCR和Western blot检测BMP7的表达。测序结果表明pCDH-BMP7慢病毒载体构建成功,包装病毒产生的病毒液滴度为5×10~8TU/ml,慢病毒感染小鼠MSCs的转染率高于75%,定量PCR和Western blot结果均显示BMP7表达比对照组显著升高。结果表明BMP7重组慢病毒载体构建成功,包装得到高浓度滴度病毒液,感染小鼠MSCs能稳定过表达BMP7蛋白,为进一步探索高表达BMP7的MSCs治疗糖尿病肾脏损伤的研究提供实验基础。     

《庄子》的现实空间叙事与观念空间叙事

叙事是人类的基本活动,但长期以来,叙事学理论对时间关注较多,对空间着力甚少。空间不仅指日常生活经验中具体的物理空间,也具有明显的观念化空间状态。在《庄子》中,庄子采用＂寓言＂、＂厄言＂、＂重言＂三种手段,特别是＂寓言＂再现了＂仅免刑焉＂和＂窃钩者诛,窃国者为诸侯＂的现实空间。庄子虽然对现实空间不满,却无力改变,转而利用观念空间叙事建构起源于现实的＂至德之世＂,但＂至德之世＂空间状态是落后的,与现实产生了无法调和的矛盾,继而建构超越现实的＂逍遥＂空间状态。