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| 利用CRISPR/Cas9双质粒系统构建Nissle 1917ΔcheZ基因缺失株 | |
| 作者姓名： | 区炳明 林鑫 吕海慧 葛桦 朱惠敏 黄丽华 刘文华 李赛男 张敏瑜 |
| 作者单位： | 1. 肇庆学院生命科学学院;2. 华南师范大学体育科学学院 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（32102703）;;广东省基础与应用基础联合基金项目（2019A1515111186）;;全国大学生平台创新和创业培训计划项目(202110580008); |
| 摘 要： | 为研究趋化性基因cheZ对大肠杆菌益生菌Nissle 1917的影响,研究以敲除大肠杆菌Nissle 1917的cheZ基因为目的.首先,利用诺唯赞ClonExpress?MultiS一步克隆试剂盒构建pTargetTΔcheZ重组质粒,随后将pTargetTΔcheZ重组质粒电转入含pCas质粒的Nissle 1917感受态中,以实现对大肠杆菌益生菌Nissle 1917染色体中cheZ基因进行靶向敲除,经PCR鉴定和基因测序双重证实,Nissle 1917基因组中的cheZ基因已敲除.最后,经IPTG诱导和高温培养,消除缺失株中的pTargetTΔcheZ和pCas 2个质粒,最终获得趋化性基因cheZ缺失株Nissle 1917ΔcheZ.本试验为验证cheZ基因在益生菌Nissle1917中的生物活性及其扮演的基因功能的后续相关研究打下了前期基础. |
| 关 键 词： | CRISPR/Cas9双质粒系统 Nissle 1917 cheZ 基因缺失 |