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人骨形成因子7基因慢病毒载体的构建及其在骨髓间充质干细胞中的表达
引用本文:屈彦纯,王爱香,郭嘉宁,王嘉南,杨阔,朱小泉,杨泽.人骨形成因子7基因慢病毒载体的构建及其在骨髓间充质干细胞中的表达[J].西南科技大学学报(哲学社会科学版),2018(4).
作者姓名:屈彦纯  王爱香  郭嘉宁  王嘉南  杨阔  朱小泉  杨泽
作者单位:天津医科大学第二医院天津市泌尿外科研究所;北京医院国家老年医学中心卫生部老年医学重点实验室
摘    要:BMP7是骨形成因子家族的一个成员,它不仅是一个重要的成骨生长因子,而且在糖尿病肾脏损伤保护和逆转中扮演重要的角色。干细胞治疗已经逐渐发展为糖尿病肾病治疗的一种有效手段,骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是BMP7的体内天然分泌细胞。本研究旨在通过构建BMP7重组慢病毒表达载体,感染MSCs,并进行鉴定,从而建立BMP7高表达的MSCs细胞系。首先通过PCR法扩增BMP7基因的蛋白编码序列,并克隆入pCDH-BMP7慢病毒载体,其后与包装质粒共转染293T细胞包装病毒,将慢病毒感染小鼠MSCs,荧光显微镜下鉴定感染率。最后,采用定量PCR和Western blot检测BMP7的表达。测序结果表明pCDH-BMP7慢病毒载体构建成功,包装病毒产生的病毒液滴度为5×10~8TU/ml,慢病毒感染小鼠MSCs的转染率高于75%,定量PCR和Western blot结果均显示BMP7表达比对照组显著升高。结果表明BMP7重组慢病毒载体构建成功,包装得到高浓度滴度病毒液,感染小鼠MSCs能稳定过表达BMP7蛋白,为进一步探索高表达BMP7的MSCs治疗糖尿病肾脏损伤的研究提供实验基础。

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