香樟ISSR-PCR反应体系的正交优化

应用L9(34)正交表建立了适合于樟树ISSR-PCR的优化反应体系,即20μL ISSR反应体系中含有1×PCR buffer、dNTP0.25 mmol/L、引物0.3μmol/L、Mg2+2.0 mmol/L、Taq酶1 U和模板DNA50 ng.适宜的扩增条件为:94℃预变性4 min;94℃变性40 s,58℃退火1 min,72℃延伸2 min,42个循环;72℃延伸10 min;4℃保存.     

珊瑚菜ITS序列的PCR扩增与测序分析

为加强珍稀濒危物种珊瑚菜遗传多样性的研究和种质资源的保护工作,本实验对珊瑚菜ITS基因片段的PCR扩增条件进行了优化和产物的测序分析.结果显示:珊瑚菜ITS基因片段的PCR扩增最佳反应体系为Buffer 2. 50μL,d NTP 0. 50μL,引物ITS1和ITS4各1. 00μL,Taq DNA polymerase 0. 15μL,模板DNA 2. 00μL,dd H2O 17. 85μL,总体积25. 00μL.最佳扩增程序为94℃预变性5. 0 min,94℃变性50 s,50℃退火50 s,72℃延伸1 min 45 s,37个循环,后72℃延伸10 min.在最佳扩增条件下获得了清晰、稳定的目的条带,测序后获得长度为628 bp的核苷酸序列,通过GenBank的BLAST比对验证,确定为ITS序列,其中包括完整的ITS1序列和5. 8S r DNA序列以及ITS2的部分序列.     

白鲢RAPD的扩增条件及重复性的研究

当PCR反应体系中Mg2 +浓度为 2 5mmol/L、dNTPs浓度为 2 0 0 μmol/L、引物浓度为0 2 μmol/L、TaqDNA聚合酶为 1 5U、DNA模板为 2 5ng(反应总体积 2 5μl)时 ,可得到比较稳定的RAPD谱带 分别从白鲢 (Hypophthalmichtysmolitrix)血液、肌肉、肝脏、生殖腺等组织提取模板DNA ,其RAPD结果是一致的     

茶树TRAP反应体系的建立及正交设计优化

TRAP标记技术因操作简单、重复性好、效率高等特点得到广泛应用,但该技术在茶树中的研究报道较少,且茶树TRAP-PCR体系优化尚未见报道.笔者采用正交设计的方法,对茶树TRAP-PCR反应中Mg2+、Taq酶、dNTP、固定引物、随机引物5个因素进行了优化研究,建立了茶树TRAP-PCR最佳反应体系.该20μL反应体系含有2μL 10×PCR Buffer (Mg2+ free),50 ng模板DNA,1.75 mmo/L Mg2+,0.50 U Taq酶,0.20 mmol/L dNTP,0.20 mmol/L随机引物和0.20 mmol/L固定引物.根据优化结果,利用最佳反应体系,选用16个茶树品种对TRAP标记多态性进行了初步研究.     

太湖新银鱼线粒体Cytb基因PCR扩增条件的优化

为建立适宜太湖新银鱼（NeosalanxtaihuensisChen）线粒体DNA细胞色素b（Cytb）基因PCR的反应体系和扩增程序，利用正交设计LI6（4^5）表，对反应体系的模板DNA、dNTPs、Primers、TaqDNA聚合酶的浓度和退火温度进行五因素四水平优化筛选和扩增程序的优化，确立了最优反应体系和扩增程序。在设定的PCR扩增条件中dNTPs浓度对扩增结果的影响最大，这极显著水平；引物浓度、退火温度对扩增结果的影响显著；TaqDNA聚合酶的浓度对扩增结果的影响最小，不显著。25pL的反应体系中，在退火温度为50℃、引物浓度为0．5μmol／L、Taq酶浓度为2．5U／μL、模板浓度为5ng／μL、dNTPs浓度为2．5mmol／L的条件下，太湖新银鱼线粒体Cytb基因扩增效果为最佳，电泳条带清晰、规则。     

草鱼RAPD指纹的初步研究

运用 2 0个随机引物对草鱼 (Ctenopharyngodonidells)进行了随机扩增多态DNA(Ran domamplifiedpolymorphicDNA ,RAPD)分析 结果表明 ,所用引物都能对草鱼扩增出稳定的RAPD谱带 ,扩增的谱带数在 2～ 1 1之间 ,扩增的片段大小在 0 1kb～ 3 0kb之间 ;其中 ,OPM - 9等 6个引物能在草鱼个体间扩增出多态性片段 ,占引物总数的 33 3% ,OPM - 1等 1 4个引物对草鱼不同个体扩增的谱带是一致的 ,占引物总数的 66 7% ,为草鱼种质资源及遗传多样性的研究奠定了基础     

建鲤与兴国红鲤RAPD指纹的初步研究

运用 2 0个 10bp随机引物对建鲤 (Cyprinuscarpiovar .jian)和兴国红鲤 (Cyprinuscarpiovar .singuonensis)进行了RAPD -PCR反应。所用引物中 ,除 2个没有扩增产物外 ,其它引物都能对建鲤和兴国红鲤扩增出清晰的RAPD谱带 ,扩增的片段大小在 0 .2kb～ 3.0kb之间。其中 ,8个引物对建鲤个体的扩增有多态现象 ,占引物总数的 40 % ;5个引物对兴国红鲤个体的扩增有多态现象 ,占引物总数的 2 5 %。为建鲤和兴国红鲤RAPD分子标记的建立和品种鉴定提供了基础资料     

珙桐休眠期种子高质量基因组DNA的提取及分析

在对传统CTAB法进行改进的基础上,提取了沙藏珙桐休眠期去中果皮种子高质量基因组DNA,琼脂糖电泳及紫外分光光度分析,表明其OD260nm/OD280nm在1.8-2.0之间,用所提取的基因组DNA作为模板,S17为引物,进行RAPD扩增,获得了清晰的扩增图谱.     

悬挂双羰基功能基的酚醛树脂的合成及表征

在相转移催化剂存在的条件下 ,将乙酰乙酸乙酯、乙酰丙酮负载到酚醛树脂骨架上 ,合成了醚键悬挂羰基功能基的酚醛树脂 .该类树脂经 FTIR表征了结构 ,对 Cu2 +,Ni2 +,Co2 +,Pb2 +的吸附容量分别为 0 .59,0 .36,0 .1 6,0 .0 3 mmol/ g.     

铂族金属及钴、镍高效液相色谱分离分析

本文报道以新试剂2—(6—甲基-2苯并噻唑偶氮)-5—二乙氨基酚作柱前衍生试剂,以甲醇/水=82/18(v/v),含20mmol/L pH5.0醋酸盐缓冲溶液,12mmol/L水扬酸,5mmol/L TBA·Br作流动相.柱温35℃,流速1.0mL/min,检测波长575nm,反相高效液相色谱定量分离和测定了Os(Ⅳ)、Rh(Ⅲ)、Ru(Ⅲ)、Pd(Ⅱ)、Pt(Ⅱ)、Co(Ⅱ)和Ni(Ⅱ)等7个元素.当S/N=3时,各金属离子的检出限分别为(ng):2.79,0.31,8.20,1.14,9.45,0.27,0.040.方法应用于合成样的分析,标准回收率在95.0—104.0%之间.