基因替换及多基因共表达强化大肠杆菌辅酶Q_(10)的合成能力

为了强化大肠杆菌合成辅酶Q10(CoQ10)的能力,对大肠杆菌进行了相关的基因操作。通过敲除大肠杆菌染色体上的聚八异戊二烯焦磷酸合成酶基因ispB,并导入来自Gluconobactersuboxydans的聚十异戊二烯焦磷酸合成酶基因ddsA,使大肠杆菌具有CoQ10合成能力的同时降低了内源性辅酶Q8(CoQ8)的合成。采用双质粒共表达系统,对CoQ生物合成途径中多个功能基因进行了强化表达,构建得到的重组大肠杆菌CoQ的合成能力、CoQ10合成的专一性都有明显改善,其中ubiCA和ddsA基因的协同表达效果最为明显,CoQ的合成能力比对照提高了65%,而CoQ10的合成量也提高了1.1倍。     

链霉菌查尔酮合成酶基因克隆及原核表达载体构建

根据Genbank数据库已知的链霉菌的查尔酮合成酶基因的保守区设计chs基因特异简并引物,土壤总DNA为模板,利用PCR技术扩增得到该l条chs基因编码区,通过TA克隆、测序和同源比对及进化分析表明:该基因为放线菌来源chs基因.分别在该基因5’末端和3’末端分别引入的限制酶NcoI和EcoR I酶切位点,利用上述2种限制酶分别酶切导入到psimple-T/chs载体和原核表达pET32a,凝胶回收目的片段后,将二者连接并转化大肠杆菌感受态细胞,转化子经菌液PCR筛选、双酶切鉴定后,3730测序结果表明,该基因全长编码区为1089 bp,推测该基因编码全长为362个氨基酸残基,等电点(PI)为5.41、分子量为3 965道尔顿含有CHS保守功能区的酸性蛋白质.分析表明,该基因与Streptomyces lividans来源的查尔酮合成酶RppA基因核苷酸相似性高达93％,氨基酸序列相似性高达87.70％.测序结果表明,该基因已经成功插入到pET32a载体中.     

热带假丝酵母产辅酶Q10发酵条件的研究

目的以热带假丝酵母作为辅酶Q10的生产菌,研究不同的发酵条件对辅酶Q10产量的影响, 以获得比较高的辅酶Q10产量。方法用酒精提取,用紫外分光光度法检测。结果葡萄糖是较好的碳源,大豆蛋白胨是较好的氮源,磷酸盐不同的比例对细胞生长及辅酶Q10合成的影响较显著,添加硫酸锰对辅酶Q10的合成有一定的促进作用。发酵初始pH 8.0,接种量为4.0%,250mL三角瓶装液量为40mL,发酵时间为72 h,葡萄糖4.0%, 大豆蛋白胨5.0%,辅酶Q10产量达到70 μg·mL-1。

结论热带假丝酵母作为高产辅酶Q10菌种具有较好的实用性以及进一步提高产量的潜力和广阔的应用前景。     

浆细胞膜糖蛋白基因K121Q变异与老年人2型糖尿病的关联研究

目的探讨浆细胞膜糖蛋白基因(PC-1)4号外显子K121Q变异与老年人2型糖尿病的相关性。方法自2006年北京市社区2型糖尿病调查资料中选出有糖尿病家族史,且相互间无亲缘关系的老年2型糖尿病患者228例,同时选择非糖尿病健康老年对照人群308例。所有受试者均签署知情同意书,所有受试者均为汉族。应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,检测PC-1基因K121Q的多态性分布情况。结果老年2型糖尿病患者中KK基因型177例(77.6%),KQ基因型46例(20.2%),QQ基因型5例(2.2%),K、Q等位基因频率分别是87.7%和12.3%;正常老年对照组中KK基因型239例(77.6%),KQ基因型63例(20.5%),QQ基因型6例(1.9%),K、Q等位基因频率分别是87.8%和12.2%;PC-1基因K121Q变异的基因型频率和等位基因频率在两组中的分布差异无显著性(P>0.05);PC-1基因K121Q变异的基因型频率和等位基因频率在男性和女性中的分布差异也无显著性(P>0.05);PC-1基因K121Q变异的KK基因型组与KQ QQ基因型组中的肥胖指标的特征差异也无显著性(P>0.05)。结论PC-1基因K121Q变异可能与老年人2型糖尿病的易感性无关联。     

从造像到寓言的文学之旅--论当代小说中的阿Q精神基因

鲁迅小说<阿Q正传>因在塑造典型形象和承担民族寓言两方面的巨大成功而成为不朽的杰作.在当代小说发展的不同时期,作家曾在这两方面分别对阿Q的精神基因加以演绎,虽也有较好的小说诞生,但却一直缺乏能将二者统一并在艺术成就上可以同<阿Q正传>相媲美的作品.对当代小说中富含阿Q精神基因的作品做个案分析,可以从中得出对当前及未来小说创作的有益启示.     

重离子诱变类球红细菌提高辅酶Q10产量

辅酶Q10是天然的抗氧化剂,其作为多功能生化药物和食品添加剂广泛地应用于食品、化妆品及医药行业.目前,其大规模生产采用微生物发酵法,最常用生产菌种为类球红细菌.为了提高该菌种的辅酶Q10产量,本研究以类球红细菌V-0(Rhodobacter sphaeroides)为出发菌株,通过重离子诱变技术筛选到一株高产突变株V-4,其辅酶Q10的产量为370.85±2.28mg·L~(-1),较出发菌株产量提高了17.34%.研究采取重离子诱变这种新的育种方式进行菌种选育,克服了重复使用常规诱变产生的"抗性",筛选到一株辅酶Q10产量较大幅度提高的菌株,为工业应用提供了新菌种.     

半夏属植物凝集素基因片段克隆与序列分析

半夏属植物凝集素同其他天南星科植物凝集素一样,有3个甘露糖专一结合位点,且具显著的抗虫性.本研究根据已知掌叶半夏凝集素基因表达序列的相关信息设计引物,采用RT-PCR方法,分别从滴水珠、石蜘蛛、盾叶半夏、掌叶半夏、三叶半夏中克隆出长约530bp的凝集素基因片段.使用Genesean软件、ORF finder软件、Ex2PASy Proteomics Server软件对5个凝集素基因片段进行分析,结果表明:克隆出的滴水珠、石蜘蛛、盾叶半夏、掌叶半夏、三叶半夏凝集素基因片段分别编码107、171、170、170、170个氨基酸,在它们所编码的肽链中,都具有酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、蛋白激酶C磷酸化位点和N-糖基化位点三类不同的功能位点.但由于编码序列碱基的突变,引起肽链中的氨基酸发生变化,从而导致这五种植株的凝集素基因存在较高的多态性以及存在功能位点的差异.其凝集素基因多态性及功能位点的差异对凝集素功能的影响需进一步分析.本实验为克隆五种植物凝集素基因的表达序列与结构基因以及深入研究半夏属凝集素的功能提供了有意义的参考资料.     

大肠杆菌巴豆甜菜碱还原酶基因缺失菌株的构建

报道了体外构建caiA基因缺失的带有卡那霉素抗性基因的5.2kb线状DNA分子,以此转化大肠杆菌JM83和BL21(DE3)株,借助于体内DNA同源重组,定向敲除了大肠杆菌中的巴豆甜菜碱还原酶编码基因caiA。经遗传稳定性实验、聚合酶链反应(PCR)以及Southern鉴定,表明所获得的JM83转化子22号和BL21(DE3)转化子4号确为caiA基因缺失突变株;酶活分析结果表明,22号和4号转化子均丧失了巴豆甜菜碱还原酶活性。     

辅酶Q10对高龄慢性心功能不全的疗效及安全性分析

目的观察辅酶Q10对高龄慢性心功能不全的疗效及安全性。方法 70例高龄慢性心功能不全的患者随机分为治疗组和对照组,对照组给以常规治疗,治疗组在常规治疗基础上联合辅酶Q10,两组疗程均为2个月,治疗前后观察两组血浆脑钠肽（BNP）的水平、心功能改善程度。结果两组BNP均下降,但治疗组BNP水平下降明显高于对照组,治疗组心功能不全改善较对照组更明显,差异有显著性（P〈0.05）,且治疗组不良反应发生率很低。结论辅酶Q10对高龄慢性心功能不全的有很好的疗效及安全性。     

不同浆料对浆纱质量的影响

不同浓度的浆料对棉纱浆纱质量有很大的影响。不同浆料对棉纱强度影响的大小为:魔芋精粉(A_9)>氧化淀粉(A_2)>普通面粉(A_1、CK)>玉米淀粉(A_5)>小麦淀粉(A_6)>酯化淀粉(A_4)>羧甲基淀粉(A_3)>羧甲基纤维素(A_7)>聚丙烯酰胺(A_8)。对棉纱挺度影响的大小为:A_5>A_2>A_9>A_1>A_3、A_4>A_6>A_8>A_7。对棉纱伏毛性影响的大小为:A_6>A_5>A_1>A_9>A_7>A_8>A_3>A_4>A_2。多数浆料以6％～10％的浓度浆纱质量较好。     

四氢呋喃对反应挤出苯乙烯/异戊二烯共聚物微观结构的影响

为研究极性调节剂对反应挤出苯乙烯类共聚物微观结构的影响,以双螺杆挤出机为反应器,有机锂为引发剂,四氢呋喃(THF)为极性调节剂,采用苯乙烯/异戊二烯(S/I)混合单体一次加料反应挤出技术合成了S/I共聚物,1H-NMR、GPC、DMA和TEM的分析结果表明:THF提高了共聚物的3,4-结构异戊二烯含量,使分散相尺寸变得细小且均匀,两相相容性提高;共聚物链段中长嵌段聚苯乙烯含量较少,并与大量分布较均匀的聚苯乙烯短嵌段、聚异戊二烯短嵌段以及无规共聚的苯乙烯单元共同组成完整的分子链。     

鲤鱼卵透明带糖蛋白分离纯化研究

温度、pH值对ZP粗品制备的影响研究 ,得出ZP粗品制备最佳条件为 :在温度为 75℃、pH值 9.0— 10 .2的溶液中提取。将 4 0 %饱和 (NH4 ) 2 SO4 去除部分杂蛋白的ZP组份用Q -SepharoseFF层析 ,分别用不同浓度的NaCl、不同pH值的Tris -HCl缓冲液作洗脱液纯化ZP粗品即可得ZP - 1、ZP - 2单组份     

大肠杆菌核苷磷酸化酶的重组表达和活性

将大肠杆菌K-12菌株来源的嘌呤核苷磷酸化酶、尿苷磷酸化酶和胸苷磷酸化酶基因分别克隆到pET-11a载体并转化大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌表达,通过SDS-PAGE分析和酶的活性测定,重组菌诱导表达后目的蛋白的表达量占菌体总蛋白的37%以上,与产核苷磷酸化酶的野生菌比较,酶的活性也有显著提高。在特异反应条件下,构建的工程菌可以用来高效催化核苷的转糖基反应。     

应科学地看待遗传工程稻1号

今年第二期,第三期,第四期,第六期,第九期《专业户》分别对遗传工程稻1号作了不同的报道。说法各异。我认为,应科学看待遗传工程稻一号。遗传工程稻一号,是湖南水稻育种专家万文举教授应用分子育种方法将玉米 DNA 片段(基因)导入水稻,培育成功的超高产,优质水稻新品种,     

核黄素受体蛋白的原核融合表达

用PCR(polymerase-chain-reaction)方法从含有软体海龟编码核黄素结合蛋白(riboflavin binding protein,RfBP)基因的质粒中克隆出RfBP基因,将该基因与原核表达载体pET30a( )重组并研究了表达条件,聚丙烯酰胺凝胶(SDS)电泳表明,蛋白质的大小为35 kD,以BL21(DE3)pLysS作宿主菌,1 mmol/LIPTG(isopropyl-l-thio-β-D-galactoside)诱导4h,融合蛋白His-tag-RfBP表达量达到最大.本文研究结果可为研究核黄素受体蛋白调节植物的核黄素含量及生长发育机制奠定基础.     

生命科学及仪器若干概念简析

基因工程是以分子遗传学为理沦基础,以分子生物学和微生物学的现代方法为手段,将不同来源的基因(DNA分子),按预先设计的蓝图,在体外构建杂种DNA分子,然后导入活细胞,以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品(药品)。基因工程技术为基因结构和功能的研究提供了有力手段。     

绿色荧光蛋白基因在转基因金鱼中的整合与表达

通过分子克隆技术将鲤鱼β—肌动蛋白启动子(carpβ-actinpromoterA)与编码绿色荧光蛋白(GFP)的cD NA融合构建成能在真核生物体内表达的质粒载体pAGFP。质粒pAGFP经PvuⅠ线性化后采用显微注射法导入金鱼受精卵,在胚胎发育初期,经紫外光激发能观察到少数胚胎发绿色荧光。在通过PCR实验检测出的5个阳性个体染色体DNA中,经点杂交实验证实有2个个体染色体基因组上整合了GFP基因。     

禽脑脊髓炎病毒内蒙分离株外壳蛋白VP1基因在大肠杆菌中的融合表达及活性分析

为研制禽脑脊髓炎病毒(avian encephalomyelitis virus,AEV)亚单位疫苗,对AEV-NH937内蒙分离株外壳蛋白VP1基因进行融合表达、纯化及活性分析.根据AEV-NH937基因组全序列,设计一对引物.利用RT-PCR技术,扩增AEV的外壳蛋白VP1基因.经序列分析,VP1基因编码区为810bp,编码270个氨基酸残基.将VP1基因插入载体pGEX-4T1构建表达重组质粒,然后转化大肠杆菌BL21.经IPTG诱导后,用聚丙稀酰氨凝胶电泳分析,结果表明,有融合蛋白表达,其分子量为56KD.纯化后,利用ELISA检测分析VP1蛋白,证明VP1蛋白有一定的抗原活性.     

饲料加工方式对猪饲料营养价值和生产性能的影响

用 36头 15kg左右的长×荣F1肉猪 ,通过饲养试验和消化试验研究粉料日粮 (处理 1)、膨化粉料日粮 (处理 2 )、制粒日粮 (处理 3)和膨化制粒日粮 (处理 4 )对 15— 90kg生长育肥猪生产性能和养分消化率的影响。结果显示 :处理 2、3、4日增重比处理 1分别提高 3.98%、1.4 9%和 8.96 % ;饲料利用率分别改进了 8.35 %、6 .0 8%和 13.4 2 % ;干物质表观消化率分别提高了 4 .72 % (P <0 .0 5 )、- 1.6 9% (P >0 .0 5 )和 4 .83% (P <0 .0 5 ) ;粗蛋白质分别提高了 3.94 %、2 .2 9%和 1.6 8% ,差异均不显著 (P >0 .0 5 ) ;粗脂肪分别提高了 2 6 .2 2 % (P <0 .0 1)、4 3.89% (P <0 .0 1)和 4 4.2 6 % (P <0 .0 1) ;粗纤维表观消化率分别提高了 2 1.86 % (P <0 .0 1)、11.5 2 % (P <0 .0 5 )和 2 2 .0 1% (P <0 .0 1) ;每头猪节约饲料成本 2 1.0 0元、17.2 5元和 34.5 0元。表明饲粮制成颗粒料的饲养效果明显优于粉状料 ,将饲粮膨化或膨化再制粒有加性效应     

线性微分方程组的辅助函数解法

设有方程组 (we)厂会十PY十Qz=X飞会一‘+Q’‘“X‘(1)其中P、P;、Q、Q,、X、X,都是x的连续函数。 为了解方程组(1),我们用未知函数e二0(x)乘第二个方程,然后将两个方程相加,得到奥十。奥、(P+P,。)Y十(Q十Q:。)Z=x十xl。UX OX(2·)引入辅助未知函数y+02==t(3)并消去方程(:)中的y和李,注意到y=:一。:,奥十。李二一奥一z史 U工U盖U蕊U蕊U盖我们得到dt do.,n .n。、,。_、.,。.八八、,,。〕于一z万es丁一+灭r十rlU)气t一U‘)+气议+议zU少Z=人+AIUUX UX(4)为了消去z,我们令z的系数等于。,于是有器+(p+P:。)卜Q一Q:。二。器+(…