Trpm7下调对大鼠心肌细胞游离Ca~(2+)浓度影响的研究

目的 TRPM7是心肌细胞内一种阳离子通道,对Mg~(2+)和Ca~(2+)都具有通透性。为了深入研究TRPM7基因在心肌细胞的功能,本试验试图研究下调TRPM7后大鼠心肌细胞内Ca~(2+)浓度的变化。方法大鼠心肌细胞的原代培养,心肌细胞存活度的测定,小干扰RNA(siRNA)技术,大鼠心肌细胞胞内游离Ca~(2+)荧光强度的检测。结果经过胞内游离Ca~(2+)荧光强度的检测发现下调TRPM7后大鼠心肌细胞内Ca~(2+)浓度无显著变化。结论调TRPM7后对心肌细胞钙的代谢没有显著影响。     

透明质酸键合分枝状低分子量聚乙烯亚胺作为siRNA载体的研究

通过构建透明质酸键合低分子量聚乙烯亚胺的低毒性siRNA载体,探究其转染si RNA的效果。利用核磁共振氢谱确定透明质酸与低分子量聚乙烯亚胺嫁接形成复合物的结构,并通过MTT方法检测其对细胞的毒性。采用凝胶电泳法确定siRNA与复合载体的结合比,利用粒度仪对其粒径大小、带电量等进行表征,并通过透射电子显微镜观察其形态。通过复合载体在B16F1细胞内,观察其基因沉默效率。结果表明:当siRNA与复合载体的质量比为1∶20时,其表面带电量约为+0. 3 m V,粒子直径约为113. 7 nm,形态均匀呈球形,分散均匀。其对细胞毒性远远小于高分子量聚乙烯亚胺,但转染效果较好。因此,透明质酸键合低分子量聚乙烯亚胺是一种低毒、高效的新型非病毒载体。     

miR-149-3p对糖尿病大鼠心肌细胞胰岛素抵抗的作用

目的探讨miR-149-3p对糖尿病大鼠心肌细胞胰岛素抵抗的干预作用及其机制。方法应用高脂饲料联合链脲佐菌素方法构建糖尿病大鼠模型,提取心肌组织总RNA,检测miR-149-3p的表达情况。培养H9c2心肌细胞,体外应用高糖高脂诱导H9c2细胞胰岛素抵抗模型,检测miR-149-3p的表达情况。应用miRNA转染技术将miR-149-3p转染进H9c2心肌细胞,并检测葡萄糖摄取。应用生物信息学实验、real time qPCR实验和western blot实验确定fat mass and obesity associated(FTO)是否为miR-149-3p的靶点。结果糖尿病模型组大鼠腹腔注射糖耐量实验中2h血糖显著高于对照组,且其血浆TC、TG和FFA水平均显著高于对照组。此外,糖尿病模型组大鼠心肌中miR-149-3p的表达显著降低;过表达miR-149-3p能够抑制胰岛素刺激的葡萄糖摄取,敲减miR-149-3p以能够促进胰岛素刺激的葡萄糖摄取。生物信息学实验、real time qPCR实验和western blot实验证明FTO是miR-149-3p的直接靶点。结论 miR-149-3p通过下调FTO抑制糖尿病大鼠心肌细胞胰岛素抵抗。     

耐力训练大鼠心肌基因谱改变及壳寡糖预处理效应

研究大强度耐力训练大鼠心肌组织基因表达谱的改变,筛选与心肌损伤过程相关的差异表达基因;观察壳寡糖预处理效应,探讨壳寡糖作为抗疲劳强力因子保护心肌结构和功能的分子机制.分别从对照组、壳寡糖处理组、耐力训练组SD大鼠的心肌组织中抽提总RNA.Cy3、Cy5荧光标记,反转录分别合成cDNA探针后,与含有12 000个基因的SBC大鼠高密度12K基因表达谱芯片杂交.杂交信号经扫描后,Genespring软件分析表达信号.差异表达基因共616个,大强度耐力训练组差异表达基因157个,其中上调141个,下调17个;壳寡糖处理组差异表达基因459个,其中上调183个,下调276个,涉及细胞凋亡差异表达基因有36个,下调24个,上调12个.结论：耐力运动所引起的心肌结构和功能的积极适应甚或心肌损害都是由众多基因共同调控的复杂过程.壳寡糖能调控大强度耐力训练大鼠心肌组织多种功能类别基因群表达水平,从分子水平揭示了壳寡糖保护大强度耐力训练对大鼠心肌造成不良影响的作用机制.     

miR-188在心肌梗死患者中的表达及临床意义

目的探讨microRNA-188(miR-188)在急性心肌梗死患者中的表达及其临床意义。方法采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)实验检测心肌梗死患者心脏组织和对照组患者心脏组织中miR-188的表达情况,并检测两组患者血清样本中miR-188的表达;应用转染试剂X-treme将miR-188类似物、miR-188抑制剂和其阴性对照(negative control,NC)分别转染进心肌细胞中,qRT-PCR实验检测miR-188转染效率,MTT实验检测细胞增殖情况,台盼蓝染色检测细胞存活率。结果 miR-188在心肌梗死患者心脏组织中表达显著低于对照组患者中的表达(P=0.0109),且其在心肌梗死患者血清样本中的表达显著低于对照组患者中的表达(P=0.0065)。在转染miR-188类似物的心肌细胞中,miR-188的表达显著升高,在转染miR-188抑制剂的心肌细胞中,miR-188的表达显著降低,差异均具有统计学意义(P=0.0193和0.0062);MTT结果显示,miR-188类似物显著提高心肌细胞增殖能力,miR-188抑制剂显著降低心肌细胞增殖能力;台盼蓝结果显示,miR-188类似物显著升高心肌细胞存活率,而miR-188抑制剂降低心肌细胞存活率。结论 miR-188能够提高心肌细胞的增殖能力和存活率,有望成为心肌梗死的生物标记物和潜在治疗靶点。     

融合自杀基因FCU1对结肠癌细胞杀伤作用的实验研究

目的 构建含融合自杀基因FCU1的重组质粒,经脂质体转染结肠癌细胞,同时给以前体药物5-FC,观察其对结肠癌细胞的杀伤作用.方法 采用分子克隆技术,构建含融合自杀基因FCU1的真核表达质粒pEGFP-FCU1,经脂质体转染结肠癌细胞HCT116,采用MTT法检测前体药物5-FX对HCT116杀伤作用及其旁观者效应.结果 重组质粒pEGFP-FCU1经酶切鉴定,与原始目的 片段大小一致,测序与GenBank中序列一致,转染HCT116细胞后,可见荧光蛋白的表达,前体药物5-FC显示极强的杀伤作用和旁观者效应.结论 FCU1/5-FC自杀基因系统,对结肠癌细胞具有显著的杀伤作用.     

盐酸贝那普利对缺氧复氧损伤培养乳鼠心肌细胞凋亡的干预作用

目的探讨盐酸贝那普利对缺氧复氧乳鼠心肌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法用原代培养的乳鼠心肌细胞建立缺氧复氧损伤模型,分为空白对照组（C组）、缺氧复氧损伤模型组（H/R组）、盐酸贝那普利组（B组）及缺氧复氧损伤＋盐酸贝那普利组（H/R＋B组）,流式细胞仪检测早期凋亡细胞及坏死细胞,相关软件分析。检测四组乳酸脱氢酶LDH活性、丙二醛MDA含量、超氧化物歧化酶SOD活力、肌酸激酶同功酶CKMB含量以及细胞凋亡率。结果H/R组LDH、MDA、SOD及心肌细胞凋亡率明显高于C组和B组;H/R＋B组LDH、MDA、SOD水平及心肌细胞凋亡率显著低于H/R组,以上差异均有统计学意义（P〈0.01）。结论离体培养的乳鼠心肌细胞建立的缺氧复氧损伤模型可诱导心肌细胞的凋亡。盐酸贝那普利可明显抑制这种凋亡的发生,其机制可能与其参与抗氧化、清除自由基作用有关。     

厄贝沙坦对慢性心衰模型鼠B-型利钠肽、细胞因子及心肌细胞凋亡的影响

目的观察厄贝沙坦对心衰模型鼠B-型利钠肽、细胞因子及心肌细胞凋亡的变化。方法将37只SD大鼠随机分为对照组(n=12)和造模组(n=25),造模采用盐酸多柔比星诱导心力衰竭,造模成功随机分模型组和厄贝沙坦(6.75mg/Kg,1次/日)组各12只。厄贝沙坦应用4周后,观察大鼠的一般状况、死亡数、心肌组织形态学的改变、心肌细胞凋亡及细胞凋亡指数,检测B-型利钠肽(BNP)、肿瘤坏死因子-a(TNF-a)及白介素-6(IL-6)水平的变化。结果与对照组相比,模型组大鼠死亡数增加,心肌细胞凋亡指数明显增加,BNP、TNF-a及IL-6水平明显升高,差异显著。与模型组比,厄贝沙坦组大鼠一般状况改善明显,死亡数减少、心肌组织形态学明显改善、心肌细胞凋亡减少及细胞凋亡指数,BNP,TNF-a及IL-6水平明显降低,差异显著。结论模型组大鼠BNP,TNF-a,IL-6水平明显升高,心肌细胞凋亡增加;厄贝沙坦通过降低细胞因子水平,抑制细胞凋亡,从而延缓心力衰竭的进一步发展。     

RNA干扰研究前沿和应用领域

小RNA(MicroRNA,miRNA)的作用与应用研究继2001,2002连续两年被美国《Science》杂志评选为年度10大突破技术以来,2003年继续热度高涨,名列前矛。其核心技术RNA干扰(RNAi),即用20多个核苷酸组成的短的双链RNA(siRNA)代替传统反义核酸进行转录后基因沉默,已经迅速而广泛地应用到基因功能,基因表达调控机制研究等热门领域,并为基因治疗开辟了新的途径。近两年来,这方面的科学论文及报道爆炸性增长,几乎每天都有新的结果涌现。此外,RNAi沉默机制     

miR-96在胃癌诊断中的临床意义

目的探讨microRNA-96(miR-96)在胃癌患者组织和血清中的表达及其对胃癌细胞的作用。方法收集2017年1月至2018年1月期间本院收治的胃癌患者(n=15)和同期在本院做胃部活组织检查的健康志愿者(n=15)的组织及血清样本;采用RT-PCR技术检测胃癌患者和健康志愿者组织和血清中miR-96的表达水平;采用Lipofectamine2000进行瞬时转染,将miR-96转染至人胃癌细胞系SGC7901细胞中,并检测miR-98的转染效率;进行CCK-8实验和克隆形成实验检测miR-96对人胃癌细胞系SGC7901细胞活力和增殖的作用。结果 RT-PCR结果显示,与健康志愿者相比,miR-96在胃癌患者的癌症组织和血清中表达均显著上调(P=0.0274和0.0089);RT-PCR结果表明,与转染无关序列NC相比,转染miR-96类似物后的胃癌细胞中miR-96的表达显著升高(P=0.008),而转染miR-96inhibitors后的胃癌细胞中miR-96的表达显著降低(P=0.005);CCK-8实验显示,miR-96类似物能够显著升高胃癌细胞活力,而miR-96抑制剂s能够显著降低胃癌细胞活力;克隆形成实验表明,miR-96类似物能够促进胃癌细胞增殖,而miR-96抑制剂s能够抑制胃癌细胞增殖。结论 miR-96在胃癌患者的组织和血清中表达上调,可作为胃癌诊断的生物标记物。     

汉语古诗词中的话语轮换及其翻译

中国古诗词由于体裁的限制，人物对话往往具有高度的概括性和跳跃性，读者在阅读汉语古诗词时必须弄清作品涉及到的话语角色，识别并补充沉默话轮，这对还原文学作品中人物会话的整个结构，充分理解言简意丰的汉语古诗词致关重要。汉语（尤其是古汉语）的表达偏重意合，这种表达方式导致汉语古诗词中的不少会话角色关系呈隐性，读者需通过上下文逻辑推断，才能理清话语角色、会话相邻对、话轮沉默等。在把汉语古诗词翻译成偏重形合的英语时，一般要酌情增加表明会话角色关系、会话相邻对的词语，甚至补充沉默的话轮，并采用直接引语形式，使译文话轮结构清晰，会话关系呈显性。     

基于动机差异的员工沉默行为影响机制整合模型探索

立足于三类沉默行为的不同动机,将西方理论与本土文化相结合,提出了员工沉默影响机制的 整合模型。 具体地,分别从不介入动机、躲避动机及防御性动机视角出发,依次构建了默许性沉默、漠视 性沉默及防御性沉默的预测因素,并讨论了其作用机制。 本研究预测,不同动机下的员工沉默,其影响因 素不同:(1)关系取向显著预测防御性沉默,且受到心理安全感的中介及中庸思维的调节作用;(2)情感 承诺与漠视性沉默显著相关,且受到组织嵌入的中介及组织建言氛围的调节作用;(3)组织支持感与默 许性沉默显著相关,且受到消极自我评价的中介及归因定向的调节作用。 本研究理论上有望为员工沉默 领域贡献新的知识,实践上可增加管理实务的具体性和操作性。     

周梅森政治小说的叙事伦理审视

本文从叙事伦理的视角将近年周梅森政治小说与书写"官场"的其它小说(王跃文《国画》、阎真《沧浪之水》等)进行比较。笔者认为存在的区别体现在3个方面:思索而非展示问题;道德在场而非缺席;作者发言而非失语。因此,相对于市场语境下大量匮乏写作伦理的作品而言,周梅森的政治小说拥有其独特价值。     

水滑石类复合氧化物的制备及其催化性能研究

采用低饱和共沉淀法制备TMgAL—LDHs、ZnAI—LDHs、CuMgAI—LDHs等几种水滑石结构化合物．研究了pH值和原料比对MgAI—LDHs、ZnAI—LDHs和CuMgAl-LDHs结构的影响．并以这些类水滑石为前驱体得到了MgAI、ZnAI、CuMgAl三种复合氧化物催化剂．研究结果表明：当pH〉9时,对MgAl-LDHs结构的影响较小;当Zn／Al-3时．形成的ZnAl—LDHs结晶度最好;在Cu2＋／Mg2＋=0．25条件下,M2＋／M3＋=2．0时形成的CuMgAl—LDHs结晶度和品形最好;在M2＋／M3＋-3条件下,随着Cu2＋／Mg2＋比的增大．层间距加大．Mg—Al、Zn—A、Cu—Mg—Al三种复合氧化物对逆水煤气变换反应的热稳定性均较好,Cu的引入大幅度的提高催化活性,特别是低温活性的提高尤为明显．     

方向和位置对S160功能影响的研究

研究抑制序列S160对基因表达的影响。首先将hKv4.3基因5非翻译区的一段序列（＋2～＋160,S160）以不同的方向和位置克隆到报告质粒pβ-gal-promoter vector中,瞬时表达,之后进行β-galactosidase相对活性分析。结果表明S160对基因表达具有强烈的抑制作用,且抑制序列S160的抑制功能具有位置特异性,没有方向特异性。     

关于沉默权的法理学分析

沉默权是一项刑事诉讼制度。目前世界大多数国家已经确立了这项制度。沉默权确立的基础是人权理论,它的价值在于保障和促进司法公正,我国应该结合国情建立有中国特色的沉默权制度。     

严家显先生办学思想研究

详细回顾了福建省立农学院首任院长严家显先生"研究、教学、推广"的办学思想:(1)注重研究农业高深学术;(2)以教学为中心,确保教学质量;(3)注重为地方经济和社会发展服务。研究严家显先生的办学思想对目前农业院校的发展具有重要的借鉴意义,其办学思想为福建农林大学70年来的发展奠定了坚实的精神基础。     

论沉默权副作用及其消解机制——一种法社会学的反思

沉默权副作用是构建我国沉默权制度的最主要障碍,只有很好地消除人们的此种心理恐慌才有可能真正建立起沉默权制度。我国应当采用综合治理的方式建立沉默权消解机制:构建有限沉默权制度,从沉默权内部限制其副作用;构造配套措施,从外部消解沉默权副作用;加强社会治理,构建预防、理解和接受沉默权副作用的人文环境。     

一类三点半正边值问题的正解

对二阶三点半正边值问题 {（P（t）u′（t）））′＋λf（t,u）=0,0〈t〈1 P（0）u′（0）=0,u（1）=ku（η） 进行了研究不要求非线性项连续且下方有界,在满足Carathéodory条件下,对充分小的存在正解,应用的工具为锥上的不动点定理。