清华新成果有望定向“饿死”癌细胞

正我国科学家率先获得人源葡萄糖转运蛋白GLUT1三维晶体结构。人源葡萄糖转运蛋白GLUT1三维晶体结构听上去似乎有些晦涩,但如果能把它搞清楚,就能人工干预细胞对葡萄糖的吸收,既可以对正常细胞增加葡萄糖供应,治疗大脑萎缩、癫痫等疾病,     

小鼠脂肪细胞糖尿病药物筛选模型的优化及应用

糖尿病已经成为世界范围内危害人类健康的主要疾病之一,对糖尿病的研究和治疗具有重要意义,本文首先建立并优化小鼠脂肪细胞糖尿病药物筛选模型,然后使用临床抗糖尿病药物对该模型进行考察,并对海糖平(H)和杉糖平(S)两种降糖新药进行了筛选。通过Western-blot法检测GLUT4(葡萄糖转运蛋白4)以确定药物的药效。结果表明,用临床抗糖尿病药物考察模型能客观反映该药物药效。在此模型上,对杉糖平和海糖平的各个馏分进行初步筛选,发现两种药物的一些有效成分。     

Semicarbazide-Sensitive Amine Oxidase对血糖调节作用研究

Semicarbazide-Sensitive Amine Oxidase(SSAO)是一类在人体内广泛分布但生理功能尚不清楚的酶。本研究中我们首次在动物模型上发现了SSAO活性对大鼠血糖的影响。通过使用SSAO的高选择性抑制剂MDL-72974A以及它的内源性底物甲胺等对动物进行处理,研究血糖与SSAO活性的关系。SSAO活性用同位素标记法以14C-苯甲胺为底物进行测定,血糖则采用己糖激酶法测定。此外我们还测定了尿甲醛排泄以考察SSAO催化脱氨反应是否发生。实验结果显示,抑制SSAO活性可以导致动物血糖升高,并且SSAO底物甲胺可以降低糖尿病鼠血糖。这些结果表明SSAO可能在血糖调节方面有某种作用,进一步研究将对发展糖尿病治疗策略有重要意义。     

不同浓度的多巴胺对SH-SY5Y细胞中多巴胺转运体分布的影响

多巴胺是脑内一种天然的神经递质,对于体外培养的 SH-SY5Y 细胞,不同浓度的多巴胺会对其产生不同的影响。本文研究了一系列浓度梯度的多巴胺对 SH-SY5Y 细胞生长状态的影响,得出了其从对细胞生长促进作用转入毒性作用的拐点。并且对这些细胞中的多巴胺转运蛋白进行了染色,观察了它们在不同多巴胺浓度下,在细胞膜表面及细胞内部的分布规律。     

SSAO酶活性的测定方法研究

SSAO(semicarbazide-Sensitive Amine Oxidase 1、4、3、6)是时氨基脲敏感的一系列酶的统称,它在人体内广泛分布但生理功能尚不清楚。一些研究显示该酶可能与糖尿病并发症、心脏病以及一些神经系统疾病等有着一定的联系。SSAO的内源性底物包括甲胺和氨基丙酮等,它们通过酶催化氧化脱氨产生相应的醛、过氧化氢和氨。甲醛、丙酮醛和过氧化氢都是细胞毒性的物质。本研究我们用ABTs作为衍生过氧化氢的试剂,建立了一种操作简便、安全并且具有相当灵敏度的一种测定方法。实验结果显示该方法具有足够的灵敏度,能够满足SSAO酶活性测定的需要。该方法的建立为糖尿病和心脑血管疾病等疾病的病因学研究以及临床样品分析提供了一种适用的方法。     

法乐氏四联症患者红细胞的研究

采用电镜、电泳等技术研究法乐氏四联症患者红细胞的形态、膜双层结构、膜生化组成以及红细胞与凝集素的作用等,实验结果表明,病人红细胞中双凹盘形细胞的比例显著少于正常人,而盆形细胞及其它异形细胞的比例大多高于正常人。病人红细胞膜双层结构不及正常人的清晰,且稍宽,致密度下降。SDS—PAGE的图谱以及红细胞与凝集素作用的结果均表明患者红细胞膜蛋白产生了一些变化。     

Rab蛋白与囊泡运输

Rab蛋白家族是Ras超家族（包括ras，rho／rac，tab，arf以及ran五大类）中最大的家族，是一类小分子量GTP酶，分子量大都在20～25kDa之间，表达于从酵母、果蝇、小鼠到人类等各种真核生物中，调节细胞器之间的囊泡运输．其在酵母中称为YPT／SEC，在高等真核生物中称为Rab．到目前为止，已有近70多种人类Rab蛋白或Rab—like蛋白编码基因被克隆和鉴定，其中包括一些剪切体．     

CSA对SfaMNPV诱导SL-1细胞凋亡的影响

检测线粒体膜通透性转运孔(MPT)的开放抑制剂环孢菌素A(CSA)对芹菜夜蛾核型多角体病毒(Syngrapha falcifera multiplenuclear polyhedrosis virus,SfaMNPV)诱导诱导斜纹夜蛾(Spodoptera litura Cells,SL-1)细胞凋亡的影响。用不同浓度CSA和SfaMNPV单独或联合处理SL-1细胞,通过细胞形态学观察、DNA凝胶电泳法、PI染色流式细胞仪鉴定细胞凋亡,应用罗丹明123(Rh123)染色流式细胞仪测定线粒体跨膜电位(ΔΨm)。CSA明显抑制了SfaMNPV诱导的SL-1细胞凋亡,CSA还抑制了SfaMNPV诱导的SL-1细胞线粒体膜电位(ΔΨm)下降。CSA抑制了SfaMNPV诱导SL-1细胞的ΔΨm下降,可能是亲环素-D(CyP-D)与CSA的结合导致MPT的关闭,从而抑制细胞凋亡。     

植物线粒体的物质运输

线粒体普遍存在于植物细胞中,它参与TCA循环、氨基酸代谢、脂肪酸分解、电子传递和能量转换等生理过程。而上述生理过程的进行都涉及穿过线粒体膜的物质运输。无机离子如K~+、Ca~(++) 、NO_3~-等可通过被动的和连接能量的运输穿过线粒体膜,不同的离子其运输方式和速率不同。有机酸、氨基酸和核苷酸的运输是在专一的内膜蛋白上进行,几乎都被一些巯基试剂或底物类似物抑制,底物类似物竞争结合位点。研究细胞质和线粒体基质之间有选择性的物质运输具有重要的意义。     

大麦根木质部细胞质膜上H~+泵与阴离子通道电导性的关系分析

为了解细胞膜氢离子泵的电生理特性,本实验用膜片箝法研究了大麦根木质部薄壁细胞质膜上的生电泵在无一价阳离子条件下的生电活性与阴离子通道电导性的关系.结果显示:在大约40%的所测定的原生质体中观察到了由离子泵活动导致的膜电位超极化;添加H~+泵激活剂壳梭孢菌素导致在零电位的越膜电流密度的增加和膜电位大约-50 V的超极化;相比之下,添加H~+泵抑制剂DCCD(Dicylohexylcarbondiimid)则导致膜电位的去极化作用和零电位越膜电流密度的减少;没有观察到钙离子通道抑制剂赤藓红B对生电泵活性的作用;细胞外溶液的p H值从5.8升高到8.8时,由于氢离子浓度梯度的加大导致泵的激活.这些特征都表明所测到的生电泵活性是H~+泵的作用而不是Ca~(2+)泵.负离子通道抑制剂DIDS(4,4'-Diisothiocyano-2,2'-stilbenedisulfonic acid)能导致膜电位的强烈超极化,暗示负离子通道的活性导致的短路效应强烈干扰和影响了H~+泵的电活性的测定.这可能是植物根木质部细胞质膜上的H~+泵的电活性用膜片箝法难以检测的原因.尽管非特异性Ca~(2+)通道抑制剂La3+也对泵的活性有明显影响,但在添加DIDS后添加的钙离子通道抑制剂nifidepin没有显示出对泵活性的影响,表明钙离子泵的活性在钳制的原生质体膜的膜片上几乎看不到.     

槐杞黄对哮喘气道及血清IL-13水平的影响

目的:探讨IL-13在哮喘患儿血清中的表达及槐杞黄对于哮喘大鼠IL-13表达的可能影响及与布地奈德的共同作用?方法:选择 10例哮喘缓解期儿童 (哮喘组)及10例健康儿童 (健康对照组)为研究对象?两组年龄?性别?体质指数比较差异均无统计学意义?测试两组儿童初诊时肺功能,并利用酶联免疫吸附试验(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)检测两组儿童血清 IL-13的水平?取50只4~6周龄的健康雄性SD大鼠,适应性喂养1周后,随机分为5组,即对照组?哮喘模型组?布地奈德组?槐杞黄组?布地奈德联合槐杞黄组?用卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)致敏及激发共持续6周,建立哮喘模型?通过HE染色观察肺部炎症细胞浸润情况?应用ELISA检测及比较各组大鼠之间肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)及血清中IL-13浓度的差异?结果:与健康对照组儿童比较,哮喘组儿童初诊时第1秒用力呼气量占预测值百分比及呼气峰流速占预测值百分比均升高,血清IL-13水平升高(P < 0.05)?大鼠肺组织病理学改变:模型组气道周围大量炎症细胞浸润?柱状细胞增生?气管壁增厚;对照组则无上述表现;相比模型组,布地奈德组?槐杞黄组?布地奈德联合槐杞黄组大鼠不同程度减轻(P < 0.05)?模型组BALF及血清中IL-13的浓度增加(P < 0.05)?相较于模型组,布地奈德组?槐杞黄组?布地奈德联合槐杞黄组大鼠BALF及血清IL-13浓度有不同程度降低(P < 0.05),且布地奈德联合槐杞黄组变化比布地奈德组更明显(P < 0.05)? 结论:在OVA诱导的大鼠哮喘模型中,使用布地奈德?槐杞黄或是布地奈德联合槐杞黄治疗可以不同程度改善气道IL-13分泌,因而可能改善气道炎症?布地奈德联合槐杞黄治疗可能存在协同效应?     

缩泉丸对肾阳虚多尿大鼠肾脏AVPR—V2表达的影响

目的观察缩泉丸对肾阳虚多尿模型大鼠肾脏加压素二型受体（AVPR—V2）表达的影响。方法用腺嘌呤250mg／kg灌服大鼠4周,造成肾阳虚多尿模型,分别给予缩泉丸、肾气丸和去氨加压素治疗4N,用免疫组化法检测缩泉丸对肾阳虚多尿模型大鼠肾脏AVPR—V2表达的影响。结果模型组肾小球、集合管、肾小管和肾小囊的内壁细胞上AVPR—V2的表达明显较正常组减弱,表现为棕黄色颗粒明显减少,颜色明显变浅,dDAVPSg和缩泉丸高剂量组肾脏AVPR—V2表达比模型组明显升高。结论缩泉丸能够改善肾阳虚多尿模型大鼠肾脏AVPR—V2的表达。     

法夫酵母产虾青素发酵培养基的优化

为研究碳源和氮源对法夫酵母产虾青素的影响,采用单因素实验和均匀实验设计对培养基进行优化,结果表明:蔗糖是法夫酵母生长的最佳碳源,葡萄糖是虾青素在细胞内积累的最佳碳源,其最佳浓度为30g/L;最佳的氮源组成是硫酸铵4.9g/L、蛋白胨6.2g/L、酵母膏1g/L,虾青素的含量达6.78mg/L,摇瓶发酵产率提高了1.8倍左右。     

2型糖尿病血糖水平与IL-6和TNF-α的相关性研究

目的探讨2型糖尿病（T2DM）血糖水平与IL-6和TNF-α相关性。方法采用酶联免疫分析法检测35例初诊T2DM患者27例血糖控制良好（HbA1c〈7%）T2DM患者及20例糖耐量正常的健康对照者的IL-6和TNF-α水平,同时监测空腹血糖（FPG）、胰岛素、C反应蛋白（CRP）水平及体重指数（BMI）等。结果初诊T2DM组血清胰岛素、各炎症因子及血糖水平均高于健康对照组（P〈0.01）,而血糖控制良好T2DM组TNF-α和IL-6浓度与健康对照组无差异。相关分析显示IL-6和TNF-α与性别、BMI和空腹胰岛素等均不相关,但与空腹血糖（r=0.38,P=0.03）呈显著正相关,与总胆固醇呈显著负相关（r=-0.19,P=0.04）。结论人类空腹血清IL-6和TNF-α水平在T2DM病人中明显升高,其与血糖浓度有关,与肥胖关系不明显。     

PRRSV JL／07／SW毒株GP5重组蛋白间接ELISA检测方法的建立

本研究将以纯化的重组GP5蛋白作为包被抗原,建立了诊断PRRS的间接ELISA方法。实验确定了最佳抗原包被浓度为2．30μ／mL,PRRSV阳性血清稀释度为1：100。用间接ELISA方法检测猪瘟、猪细小病毒、猪戊肝病毒阳性血清无交叉反应,证明有很好的特异性。     

凋亡通路蛋白表达对过氧化氢诱导PC12细胞凋亡的影响

目的探讨过氧化氢（H2O2）诱导PC12细胞凋亡的机制。方法 MTT测定细胞存活率,荧光染色观察细胞形态,透射电镜观察细胞的超微结构,流式细胞仪测定细胞凋亡率,Western blotting技术和流式细胞仪检测Bcl-2和Bax蛋白的表达,分光光度计测定Caspase-3释放率。结果 0.25 mM的H2O2可诱导PC12细胞凋亡,细胞的形态发生改变,细胞核受损,细胞内Bcl-2蛋白的表达降低、Bax蛋白的表达增加,Caspase-3被激活。结论 H2O2诱导了PC12细胞凋亡,其作用机制与细胞内Bcl-2、Bax蛋白的表达及Caspase-3活性密切相关。     

大鼠胰岛细胞的分离、纯化和培养研究

目的研究Wistar大鼠胰岛细胞分离、纯化和培养的改良方法和条件,为进行细胞电生理实验提供胞膜完整、活性良好的胰岛细胞。方法水合氯醛腹腔麻醉,采用胶原酶ⅴ逆行灌注、原位消化及Ficoll-400梯度离心的方法分离、纯化大鼠胰岛,并分离、培养胰岛单细胞。结果采用该方法分离、纯化胰岛的获得率稳定;急性分离、培养的胰岛细胞12h～24h贴壁,（4～5）d胰岛细胞生长状态最佳,胞膜完整,折光性好。结论逆行灌注、原位消化及Ficoll-400梯度离心为一种有效的分离、纯化胰岛细胞的方法,培养的胰岛细胞（4～5）d达到最佳状态,适合进一步研究的要求。     

硅橡胶膜生物反应器乙醇连续发酵性能研究

进行了3种测定硅橡胶膜生物反应器乙醇连续发酵性能的对比实验．实验结果表明：硅橡胶膜的渗透蒸发作用可有效消除乙醇发酵过程中的产品抑制效应，将乙醇产率提高至传统发酵过程的3～4倍；从发酵液中连续分离出来的乙醇，经过冷凝后成为高浓度产品，冷阱收集液乙醇浓度可达原料液乙醇浓度的4倍左右．膜的固定作用使反应器中保持了较高的酵母细胞浓度，但是无机盐、不挥发性副产物及老化细胞的堆积会影响细胞活性，为了获取高乙醇产率，必须将部分发酵液从膜生物反应器中取出．